ST细胞的鉴定及种子细胞库的建立

为确保疫苗生产的的安全性,对不同代次的ST细胞进行鉴定。从中国兽医药品监察所引进第40代的ST细胞,传至80代,每个代次各冻存3瓶于液氮中。细胞复苏后,对细胞的特征、纯净度、核型、致瘤性及对细胞的毒性进行了研究。结果表明,ST细胞系呈现梭状上皮细胞,生长状态良好,细胞的生长速度基本一致;细菌、霉菌、支原体、外源病毒的检测均为阴性;染色体数目为19对且核型相同;无致瘤性;对豚鼠和兔子无毒性;病毒在ST细胞系中稳定地繁殖,TCID50≥107.00,HI≥1∶32。建立ST细胞的种子细胞库,为开展猪细小病毒疫苗的生产提供安全保障,也为猪伪狂犬病疫苗及猪细小病毒弱毒苗的研究提供基础理论依据。     

BHK-21细胞库的建立及其生物学特性鉴定

从美国典型培养物保藏中心(ATCC)和中国兽医药品监察所(中监所)引进2株BHK-21细胞系,传代扩增培养后液氮冻存,建立相应的细胞库;复苏细胞后对活力、形态、生长曲线、微生物污染、染色体核型及荧光蛋白质粒转染表达等特性进行研究。结果显示,2个来源的BHK-21细胞系均呈成纤维型,生长状态良好;生长曲线呈S型;细菌、真菌、支原体及外源病毒检查均为阴性;染色体为21对,二倍体均占主体;外源质粒在该2株细胞系中能进行复制和表达。这可为开展BHK-21细胞系及口蹄疫疫苗的研究与开发提供基础理论依据和细胞资源。     

MDCK细胞库的建立及其生物学特性研究

分别从美国典型培养物保藏中心(ATCC)、中国典型培养物保藏中心(CCTCC)、北京协和细胞资源中心及某企业引进4株MDCK细胞系,扩大培养后液氮冻存,分别建立种子细胞库和工作细胞库。细胞复苏后分别对每株细胞进行了活力、形态、生长曲线、微生物污染、核型及荧光蛋白质粒转染表达等特性研究。结果表明,4个来源的MDCK细胞均呈上皮型,生长状态良好;生长曲线呈S型;细菌、真菌、支原体检测都为阴性;染色体2n=78;外源质粒在该细胞中能进行复制和表达。建立的细胞库为开展MDCK细胞及流感细胞基质疫苗的研究提供了基础理论依据和细胞资源。     

南方鲶SME—I细胞系的建立及其生物学特性的研究

用半消化法和组织块法接种南方鲶晚期胚，经４０多代连续培养，建立了ＳＭＥ－Ｉ鲶鱼细胞系。     

PK-15细胞生物学特性鉴定

对PK-15细胞进行细胞形态、生长曲线、微生物、外源病毒、胞核学及细胞致瘤性等特性进行了研究。结果表明,PK-15细胞呈不规则多边形、生长状态良好,无细菌、外援病毒及支原体污染,染色体共19对,细胞无致瘤性。     

奶山羊胎儿成纤维细胞系的建立及其生物学特性分析

试验分别采用组织块贴壁法和消化分离法对奶山羊胎儿成纤维细胞进行体外培养,通过原代培养、细胞传代、冷冻保存等成功建立了奶山羊胎儿成纤维细胞系,并对该细胞系进行了形态学观察、生长动力学分析、细胞活力测定、核型分析和微生物检测等多种生物学特性分析.结果表明:成纤维细胞原代培养采用贴块培养时所需时间较长,消化培养有较多死细胞;传代细胞生长情况良好,群体倍增时间(PDT)约为40.4h;生长总体趋势呈"S"型;冻存后活力为92.3%,生长状况与冻存前一致;细胞染色体中二倍体(2 n=60)占主体;细菌、真菌和支原体检测结果均为阴性,细胞系的各项指标均达到ATCC细胞系鉴定标准.     

太湖猪成纤维细胞系的建立及其生物学特性研究

以太湖猪皮肤为材料,采用组织块法培养成纤维细胞,并对其进行生物学特性检测,包括细胞形态观察、细胞冻存前和复苏后接种的存活率测定、生长曲线绘制、染色体核型分析。结果表明:所培养的成纤维细胞呈典型的成纤维细胞形态;细胞冻存前和复苏后接种的存活率分别为96·5%和93·2%;生长曲线呈"S"形,倍增时间为72h;对所制备的染色体片核型分析显示2n=38,XY。本次实验成功地建立了太湖猪成纤维细胞系,为在细胞水平上保存太湖猪种质资源提供了可能,并为其他研究提供了实验材料。     

频危畜禽品种细胞库的构建与鉴定

我国是世界上畜禽种质资源最丰富的国家之一。近些年由于受诸多不良因素的影响而导致很多畜禽品种受到一定程度的威胁。笔者认为,通过构建濒危畜禽品种细胞库的途径以保存其种质资源,是目前最为理想的方法之一。因此,本文就构建濒危畜禽品种细胞库的细胞生物学发展概况、建库方法和技术以及鉴定等问题进行了论述,试图起到抛砖砖引玉的作用,并渴望通过同仁的共同努力,实现珍贵畜禽种质资源的长期保存。     

南方鲶SME－Ⅰ细胞系的建立及其生物学特性的研究

用半消化法和组织块法接种南方鲶晚期胚，经４０多代连续培养，建立了ＳＭＥ－Ⅰ鲶鱼细胞系。该细胞系为贴附性上皮样细胞。细胞内微丝束丰富，平行排列伸到伪足，但质膜下不很密集。细胞最适在含１５％～２０％小平血清的１６４０培养基中生长，适温２８～２９℃，ｐＨ６．５～７．２，群体倍增时间为５８．６ｈ，已增殖到１０￣８个的水平。细胞染色体数为正常二倍体２ｎ＝５８，但有不少异倍化细胞。该细胞系已可用于鱼类生物工程研究和进入细胞资源库保存。     

草鱼囊胚细胞系的生物学特性

国外鱼类细胞培养始于 6 0年代[1 ] 。我国起步较晚 ,主要取材于鲤科经济鱼类 ,多为对草鱼(Ｃｔｅｎｏｐｈａｒｙｎｇｏｄｏｉｄｅｌｌａ)出血病病毒 (ＧＣＨＶ)敏感的细胞系 /株[2 - 5] 。本实验室为了进行ＧＣＨＶ的分离、培养及鱼类干扰素的诱导和鉴定等鱼类遗传育种研究 ,从 1 989年 4月起开始进行草鱼囊胚细胞培养 ,建立了草鱼囊胚细胞系 (ＧＣＢ)。目前 ,该细胞系已传至 2 0 0余代 ,部分保存于液氮中。本文对其部分生物学特性进行了分析。1　材料1 .1　细胞试验草鱼受精卵取自广东南海。胚胎发育至囊胚期 ,以含抗菌素的平衡盐溶液浸洗…     

稳定表达T_7RNA聚合酶的猪睾丸细胞系的建立

根据GenBank中登录的T7RNA聚合酶基因参考序列,设计合成了1对特异性引物扩增对T7RNA聚合酶基因进行扩增,将测序正确的T7RNA聚合酶基因和真核表达载体pIRES2-EGFP双酶切后进行连接构建pIRES2-EGFP-T7RNA RNA质粒。再将构建正确的pIRES2-EGFP-T7RNA质粒经用脂质体法转染猪睾丸细胞,通过G418筛选和单细胞克隆化,同时构建pET-32a-RED原核表达质粒载体,用其检测T7启动子控制下的红色荧光蛋白的表达。结果表明,建立的ST/T7RNA细胞系经20次传代仍然能稳定表达T7RNA聚合酶。结果显示,成功建立能稳定表达T7RNA聚合酶的猪睾丸细胞系,为猪瘟病毒反向遗传操作平台奠定了基础。     

荸荠枯萎病病原鉴定及生物学特性

荸荠枯萎病菌生长发育温度10～35℃,pH值3～13.菌丝生长最适温度20～25℃、pH值7～8;产孢最适温度25～30℃、pH值6;菌丝体在荸荠培养基上生长较快,产孢量以PSA培养基上最多;孢子萌发的最适温度25℃、pH值7～9,致死温度55℃.     

番茄褐斑病病原菌鉴定及生物学特性研究

对河南新乡市牧野菜区保护地发生的番茄褐斑病进行了病原菌的分离、鉴定及致病性测定。结果表明，该病的病原为长蠕孢菌（Helminthosporium carposaprum），菌丝生长的最适宜培养基为PSA培养基，最适温度范围为20～25℃，最适pH值7～9，光照对该菌的生长几乎没有影响；产孢量在25℃，pH值7，查彼培养基上达到最大；分生孢子萌发的最适温度为20～25℃，最适pH值为9，相对湿度86％～100％，致死温度为55℃。     

版纳微型猪近交系胎儿成纤维细胞系的建立及其生物学特征

以版纳微型猪近交系妊娠47d的胎儿为材料,采用胰蛋白酶消化法消化培养胎儿成纤维细胞,对其进行细胞形态观察、细胞冻存前和复苏后存活率测定、生长曲线绘制和染色体核型分析等生物学特征检测.结果表明,培养的版纳微型猪近交系胎儿成纤维细胞呈典型的成纤维细胞形态;细胞冻存前和复苏后的存活率分别为98.06%和92.12%;生长曲线呈S形,倍增时间为36h;对所制备染色体核型进行分析,显示2n=38,XY,并在体外培养14个代次后仍能保持正常核型.     

Establishment of Master Cell Stock and Working Cell Bank of MDCK Lines and Selection and Evaluation of the Lines as Candidate Viral Substrates for Approval Production of Combinational Canine Attenuated-live Virus Vaccines

Under the prerequisite that the incidence of cancer or tumor in negative-control nude mice inoculated subcutaneously with primary feline or canine kidney cell cultures purified in vitro at passage 3 was 0(0/22) and 0 (0/10), respectively. The incidence of the progressively-growing malignant tumor(MT) in positive-control nude mice inoculated subcutaneously with Hela cell cultures of KB, X, or NM20/X strain was 10/10, 25/25 and 5/51, respectively. The results showed that the incidence of tumor in nude mice with di-and hyperploid YB strain of MDCK cell during 17 - 23 passages, with hyper- and hypoploid KA strain of MDCK cell during 6 - 8 passages, with hypoploid WB strain of MDCK cell on passage 6, with hyper-and hypopioid H strain of MDCK cell during 8 - 24 passages was 2/24, 6/10, 5/10 and 10/15, respectively. The chromosomal analysis results showed that the ratio of difference in the rate of modal chromosome number between high(mcs + n) and lowest (mcs)passages was not more than 5- 15% and the structure aberrations was generally 0-3%. These results proved that the genetic characteristics of chromosomal number of cell lines determines their tumorigenicity, but it is species-specific. MDCK line has tumorigenicity no matter what its chromosome karyotype is, at least it has very low tumorigenicity even when its modal chromosome number is hypoploid. It is thus evident that MDCK cell of WB or H strain can be approved as substrate for the preparation of attenuated viral vaccines, but MDCK cell of YB or KA strain can not be approved as substrate for the preparation of attenuated viral vaccines.     

香茅纹枯病病原菌的分离鉴定及其生物学特性

对香茅纹枯病病原菌进行分离鉴定及其生物学特性研究。结果表明：香茅纹枯病病原菌为立枯丝核菌（Rhizoctonia solani Kühn）;其最适生长培养基为马铃薯葡萄糖琼脂培养基,最适pH值为8,在可溶性淀粉为碳源的查彼克琼脂培养基上生长最快,在麦芽糖为碳源的查彼克琼脂培养基产菌核最多;该病原菌生长对氮源有一定偏嗜性,一般应在其分离培养基内添加硝酸钾作氮源;最适培养条件为25～30℃,全光照。寄主范围测定表明,人工接种该病原菌能侵染花梨木（Dalbergia odorifera T.Chen）、大叶桃花心木（Swieteniamacrophylla King.）、虎刺梅（Euphorbia milii var.splendens（Bojer ex Hook.）Ursch）、玉米（Zea mays L.）、水稻（Oryza sativa L.）、新台糖22号糖蔗（Saccharum officinarum L.T22）和果蔗（Saccharum sinense L.Home.）、雨树（Samanea saman（Jacq.）Merr.）、普通烟（Nicotiana tabacum L.）、发财树（Pachira aqualica Aubl）等10种盆栽植物幼苗。