一株欧亚类禽H1N1猪流感病毒分子特征分析

为调查国内猪流感病毒流行和遗传演化状况,将2013年从山东某屠宰场的采集样品接种SPF鸡胚,分离到1株病毒,通过RT-PCR鉴定和全基因测序,并运用生物软件对病毒基因组关键氨基酸位点和遗传演化关系进行分析。结果显示,分离株A/Swine/Shandong/5513/2013(H1N1)为欧亚类禽H1N1猪流感病毒,基因片段未发生重排,与中国大陆近几年分离株类似。HA蛋白受体结合位点具有结合哺乳动物气管上皮细胞特性;HA蛋白抗原位点与欧亚类禽H1N1猪流感代表株A/swine/Hong Kong/1780/2008(H1N1)仅有一处不同,Q196H;裂解位点氨基酸为PSIQSR/GL,PB2蛋白毒力关键氨基酸位点为T271和E627,分离株为典型低致病力毒株。本毒株的分离鉴定为分析中国大陆猪流感流行状况和分子特征提供了数据。     

猪流感病毒广东株分离鉴定及遗传进化分析

本研究从广东省某猪场采集37份疑似猪流感症状的猪鼻拭子样品,接种于9日龄SPF鸡胚并收集尿囊液,通过血凝试验、血凝抑制试验和RT-PCR鉴定,分离得到一株猪流感病毒,经RT-PCR分别扩增8个基因片段,进行基因测序及序列分析,与GenBank收录的参考毒株比对并构建进化树。结果显示,分离毒株为H1N1亚型猪流感病毒,将其命名为A/swine/Guangdong/2/2018（H1N1）。遗传进化分析显示,分离株8个片段的核酸序列与A/swine/Guangdong/L3/2009（H1N1）对应序列的同源性均达99%以上,与经典型H1N1亚型猪流感病毒处于同一分支。分离毒株HA的裂解位点为PSIQSR↓GL,符合低致病性流感病毒分子特征。HA基因受体位点为190D、225G和226Q,表明本毒株既可以结合SAα-2,6-Gal型人类流感病毒SA受体,也有结合SAα-2,3-Gal型禽类流感病毒SA受体的可能,在28、40、104、304、498、557位氨基酸处有6个潜在糖基化位点;NA蛋白在50、58、63、68、98、146、235位氨基酸处有6个潜在糖基化位点,NA蛋白氨基酸序列活性中心位点为119E、199D、223I、275H、293R、295N,氨基酸分析位点未出现突变,表明本分离株对神经氨酸酶抑制剂类药物的敏感性较高,但在M2蛋白中,31位氨基酸由敏感型的（S）突变为抗药的（N）,提示可能对金刚烷胺类药物产生耐药性。开展猪流感病毒分离鉴定与遗传进化分析将为广东地区的猪流感流行和变异情况提供重要信息。     

猪流感病毒广东株分离鉴定及遗传进化分析

本研究从广东省某猪场采集37份疑似猪流感症状的猪鼻拭子样品,接种于9日龄SPF鸡胚并收集尿囊液,通过血凝试验、血凝抑制试验和RT-PCR鉴定,分离得到一株猪流感病毒,经RT-PCR分别扩增8个基因片段,进行基因测序及序列分析,与GenBank收录的参考毒株比对并构建进化树。结果显示,分离毒株为H1N1亚型猪流感病毒,将其命名为A/swine/Guangdong/2/2018(H1N1)。遗传进化分析显示,分离株8个片段的核酸序列与A/swine/Guangdong/L3/2009(H1N1)对应序列的同源性均达99%以上,与经典型H1N1亚型猪流感病毒处于同一分支。分离毒株HA的裂解位点为PSIQSR↓GL,符合低致病性流感病毒分子特征。HA基因受体位点为190D、225G和226Q,表明本毒株既可以结合SAα-2,6-Gal型人类流感病毒SA受体,也有结合SAα-2,3-Gal型禽类流感病毒SA受体的可能,在28、40、104、304、498、557位氨基酸处有6个潜在糖基化位点;NA蛋白在50、58、63、68、98、146、235位氨基酸处有6个潜在糖基化位点,NA蛋白氨基酸序列活性中心位点为119E、199D、223I、275H、293R、295N,氨基酸分析位点未出现突变,表明本分离株对神经氨酸酶抑制剂类药物的敏感性较高,但在M2蛋白中,31位氨基酸由敏感型的(S)突变为抗药的(N),提示可能对金刚烷胺类药物产生耐药性。开展猪流感病毒分离鉴定与遗传进化分析将为广东地区的猪流感流行和变异情况提供重要信息。     

辽宁省H1N1亚型猪流感病毒的分离鉴定与遗传演化分析

本研究2012年底从辽宁省某屠宰场猪鼻咽拭子样品中分离到1株流感病毒,经HA—HI试验和RT—PCR鉴定为H1N1亚型猪流感病毒株,命名为A／swine/Liaoning／01／2012（H1N1）,通过对病毒的8个基因片段克隆并测序,并利用分子生物学软件进行遗传演化分析。结果表明,分离株HA基因裂解位点附近的氨基酸序列为IPSIQSRjG,符合低致病力流感病毒的分子特征。全基因组进化树结果表明,分离株的8个基因片段与A／swine／Jiangsu／40／2011（H1N1）株核苷酸同源性最高,分离株处在类禽型H1N1亚型遗传进化分支上;由于类禽型H1N1猪流感病毒具有潜在感染人的潜力,在国外和国内均有感染人的报道,因此,辽宁省首次分离到该型猪流感病毒对全省养猪业和公共卫生安全具有重要意义,值得深入研究。     

一株欧洲类禽H1N1猪流感病毒的分离鉴定与反向遗传系统的建立

猪流感是猪常见的呼吸道传染病,临床以高热、呼吸困难、咳嗽和衰竭、迅速康复或死亡为特征。猪流感不仅给养猪业造成巨大损失,也严重威胁着人类健康。本研究从发病猪场中分离到1株H1N1亚型猪流感病毒,序列分析结果显示,分离毒株属于欧洲类禽猪流感H1N1亚型病毒。将分离毒株分别接种到MDCK与ST细胞,观察病毒的生长特性,结果显示分离的猪流感病毒在ST细胞中复制能力较强。采用RT-PCR技术分别扩增8个基因片段,克隆到流感病毒反向遗传系统,成功拯救出猪流感病毒毒株,测序结果显示拯救的猪流感病毒与亲本毒序列一致。本研究成功分离的猪流感病毒,以及建立的反向遗传技术为研究欧洲类禽猪流感病毒跨种传播的机制以及研发新型猪流感疫苗株奠定了基础。     

宁夏地区H1N1亚型猪流感病毒基因组遗传进化分析

对宁夏地区2011年分离到的5株H1N1亚型猪流感病毒进行了基因组测定和遗传进化分析。结果显示:宁夏地区H1N1亚型猪流感病毒具有多样性,5株分离株可分为3类,其中1株为类人H1N1猪流感病毒,2株为经典猪流感病毒,另外2株为重组猪流感病毒,其PB2、PB1、PA、NP、NS基因来源于北美三元重组猪流感病毒,HA、NA、M基因来源于经典猪流感病毒;HA蛋白裂解位点附近氨基酸分析显示5株H1N1亚型猪流感分离株均为低致病性毒株;序列分析结果显示5株病毒在HA蛋白受体结合位点、抗原位点,以及NA蛋白潜在糖基化位点处氨基酸存在差异,这些差异具有分支特异性。5株病毒在NA和M2蛋白上均未出现与神经氨酸酶抑制剂和金刚烷胺耐药性相关的氨基酸变异,但其中3株病毒的PB2蛋白基因具有哺乳动物适应性变异E627K。     

一株H1N1亚型猪流感病毒的遗传演化分析及在雪貂体内复制和飞沫传播能力评估

本实验室于2016年在天津分离到一株猪流感病毒(SIV),命名为A/swine/Tianjin/312/2016(H1N1)(简称为TJ312株)。为了解该株病毒的生物学特性及遗传演化特征,本研究对经PCR分段扩增该病毒全基因组并测序,采用SeqMan软件拼接成全基因组序列经BLAST比对,得到与该SIV各基因节段序列同源性最高的病毒株,采用mafft分析其各基因节段编码氨基酸序列的分子特征,利用MEGA5.1软件分别构建该病毒8个基因节段的进化树。结果显示,SIV TJ312株各基因节段与2016年分离自天津的H1N1 SIV相应各基因节段的同源性在99%～100%。进化树结果显示该病毒株HA、NA和M基因均来自欧亚类禽H1N1 (EA H1N1) SIV谱系;PB2、PB1、PA和NP基因来自2009/H1N1流感病毒谱系;NS基因来自北美三重配H1N2 SIV谱系。蛋白分子特征分析结果显示,HA蛋白碱性氨基酸裂解位点序列为PSIQSR↓G,符合低致病性流感病毒分子特征;受体结合位点符合人源唾液酸受体(α-2,6唾液酸受体)的分子特性;NA蛋白aa275为H、aa295为N,且该蛋...     

猪流感病毒H1N1广东分离株HA基因的克隆与进化分析

采用常规的血清学试验和特异性RT-PCR,从广东不同地区猪场分离鉴定出8株H1N1亚型猪流感病毒(SIV)。用流感病毒血凝素(HA)基因通用引物扩增了8株病毒的血凝素(HA)基因,经克隆测序,HA基因全长1 757 bp,编码566个氨基酸。8个毒株的HA基因推导氨基酸序列分析表明,均含有8个潜在的N糖基化位点,且糖基化位点相同,其HA1、HA2之间切割位点序列为IPSIQSR↓G,从分子水平推论,此8株H1N1 SIV均属于非高致病性毒株。同源性分析表明,此8株病毒的氨基酸序列与经典SIV之间的同源性在92.3%~94.7%之间;与2009年甲型H1N1流感病毒同源性在80.4%~92.4%之间;与欧洲类禽SIV分离株同源性在80.4%~84.1%之间。进化关系表明,该8株SIV与A-swine-Shanghai-3-2005-H1N1同处一分支,与2009年甲型H1N1流感病毒和经典SIV分离株亲缘关系较近,与欧洲类禽SIV分离株亲缘关系较远。     

一株H1N1亚型猪流感病毒的分离鉴定与进化分析

为探究猪流感病毒（SIV）的流行情况,本实验室2020年11月从广州市某养殖场采集病猪鼻拭子30份,将鼻拭子接种9日龄SPF鸡胚,增殖后分离到1株具有凝血特性的病毒,经特异性PCR鉴定为流感病毒,通过进一步测序发现该病毒为H1N1亚型,命名为A/swine/Neimeng/03/2020 （H1N1）。通过NCBI进行各基因片段的同源性比对,发现该病毒的基因与2000年左右的人H1N1亚型病毒同源性较高。通过构建系统遗传进化树发现,确认病毒株是由人流感病毒A/Dunedin/2/2000 （H1N1）演化而来。通过HA基因推导发现该病毒HA1蛋白与2009年墨西哥流感的流行毒株以及经典的H1N1毒株具有较大的抗原性差异,该病毒呈现较低的致病性,与其HA裂解位点基序（PSIQSRGLF）表现一致,呈低致病性特征。     

1株H3N2亚型猪流感病毒的分离鉴定

为了解广东猪流感病毒(SIV)的流行变异情况,2010年11月从广东某规模猪场采集流感症状的猪鼻拭子60份,接种10日龄SPF鸡胚,分离到1株猪流感病毒,通过流感分型RT-PCR和HI试验鉴定为H3N2亚型SIV,命名为A/swine/Guangdong/L22/2010(H3N2),进行全基因序列测定及相似性分析发现,该分离株有低致病性流感分子特征,该毒株的8个基因片段连同最近广东猪群流行的流感毒株与2000年前后H3N2人流感病毒有较高的同源性.系统遗传演化显示,该病毒分离株可能是由1999年人源H3N2流感病毒A/Moscow/10/99(H3N2)进化而来.     

饲粮蛋氨酸对鹅再生羽绒品质、血清指标及基因mRNA表达量的影响

旨在探讨饲粮蛋氨酸对鹅羽绒再生性能、血清指标及半胱氨酸和蛋氨酸代谢通路相关基因表达量的影响。本试验以128只健康霍尔多巴吉鹅为研究对象,于150日龄采绒后随机分成4组,每组4个重复,每个重复8只鹅。各组试验鹅分别饲喂基础饲粮中蛋氨酸添加量为0、0.28%、0.56%和0.84%的饲料,正试期42d。测定比较试验鹅的羽绒千朵绒重、羽枝长度以及血清生化、抗氧化和促生长因子等指标,并通过RT-qPCR检测半胱氨酸和蛋氨酸代谢通路相关基因mRNA的相对表达量。结果发现:1)随着饲粮中蛋氨酸添加比例增加,鹅血清中总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)含量等均未发生显著变化(P>0.05);血清中促生长因子(IGF-1)、催乳素(PRL)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)浓度随之显著升高(P<0.05),但添加量达到0.84%时反而又降低。2)饲粮中添加蛋氨酸可显著提高羽绒的千朵绒重和背部羽枝长度(P<0.05),促进羽绒再生,但不同蛋氨酸添加浓度对羽绒产量影响的差异不显著(P>0.05)。3)RT-qPCR检测结果显示,饲粮中添加蛋氨酸,半胱氨酸和蛋氨酸代谢通路中MAT1A mRNA相对表达量显著下调(P<0.05),基因AHCY在蛋氨酸添加比例为0.28%时mRNA相对表达量极显著下调(P<0.01)。结果表明,饲粮中添加适当浓度的蛋氨酸,可促进鹅体内IGF-1和PRL等促生长因子和抗氧化因子分泌,还可显著提高千朵绒重、背部羽枝长度,降低半胱氨酸和蛋氨酸代谢通路中MAT1A和ACHY基因mRNA的相对表达量,促进羽绒再生,其适宜的总添加量为0.55%～0.83%。     

杜仲叶及提取物在畜禽生产中的应用

JIANG Dongcai;YANG Nan;SHAN Yuefang;JIA Liangliang;XI Zhao;YANG Haiming(College of Animal Science&Technology,Yangzhou University,Yangzhou,Jiangsu Province 225009,China;Shanghai Bright Feed Co.,Ltd,Shanghai Songjiang 201613,China;Huai'an Higher Vocational School of Biological Engineering,Huai'an,Jiangsu Province 223200,China)     

初生重对新生梅山仔猪肝脏发育和脂代谢的影响

本试验旨在研究初生重对新生梅山仔猪肝脏发育和脂代谢的影响。选取正常初生重(NBW)和低初生重(LBW)新生梅山仔猪各6头,不喂食母乳,出生6h内颈动脉放血致死。取仔猪血液测定血浆脂代谢指标,屠宰取样测定肝脏器官指数、肝脏脂代谢指标及相关基因的表达。结果表明:与NBW组相比,LBW组新生梅山仔猪的肝脏细胞粒径和面积极显著降低(P<0.01);血浆总胆固醇(TC)含量极显著升高(P<0.01),血浆低密度脂蛋白(LDL)含量显著升高(P<0.05),血浆甘油三酯(TG)含量极显著降低(P<0.01);肝脏TC含量显著降低(P<0.05),肝脏TG含量和脂蛋白脂酶(LPL)活性极显著降低(P<0.01),肝脏肝脂酶(HL)活性呈下降趋势(P=0.086);肝脏脂肪酸合成酶(FAS)和LPL的基因表达量极显著降低(P<0.01),肝脏激素敏感脂肪酶(HSL)的基因表达量显著降低(P<0.05)。上述结果显示,LBW会抑制新生梅山仔猪的肝脏发育,降低脂代谢功能。     

肠道微生物区系对断奶仔猪肠道黏膜免疫功能的调节作用研究进展

断奶仔猪肠道中定植了大量微生物,这些微生物及其代谢产物可参与断奶仔猪的肠道黏膜免疫过程。肠道微生物对断奶仔猪肠道黏膜免疫的调节机制主要是通过TLRs和NLRs通路分子分别发生作用。本文对肠道黏膜免疫的特点及断奶仔猪肠道微生物区系的组成进行了综述,并深入探讨了肠道微生物对断奶仔猪肠道黏膜免疫功能的调节作用,以及肠道微生物对肠道黏膜免疫系统调控的潜在机制,旨在为进一步利用断奶仔猪肠道黏膜免疫维持机体健康的相关研究提供参考。     

凹土纳米氧化锌对断奶仔猪血清、肝脏和肠道黏膜抗氧化指标的影响

本试验旨在研究凹土纳米氧化锌对断奶仔猪血清、肝脏和肠道黏膜抗氧化指标的影响。选取210头21日龄体重(6.30±0.51) kg的健康杜×长×大断奶仔猪,随机分为7个组,每组6个重复,每个重复5头猪。各组分别为对照组(CON组,基础饲粮)、抗生素组(ANT组,基础饲粮+抗生素)、氧化锌组(ZO组,基础饲粮+3 000 mg/kg氧化锌)、纳米氧化锌组(NZO组,基础饲粮+800 mg/kg纳米氧化锌)、低剂量凹土纳米氧化锌组(LANZ组,基础饲粮+700 mg/kg凹土纳米氧化锌)、中剂量凹土纳米氧化锌组(MANZ组,基础饲粮+1 000 mg/kg凹土纳米氧化锌)和高剂量凹土纳米氧化锌组(HANZ组,基础饲粮+1 300 mg/kg凹土纳米氧化锌)。预试期3 d,正试期9 d。结果表明:1) ZO和LANZ组的血清过氧化氢酶(CAT)活性显著高于CON组(P<0.05);ANT、ZO、LANZ、MANZ和HANZ组的血清总抗氧化能力(T-AOC)显著高于CON组(P <0. 05),且ANT组的血清T-AOC显著高于其他各组(P<0.05)。2) LANZ组的肝脏CAT活性显著高于其他各组(P<0.05)。3) ZO、NZO、LANZ、MANZ和HANZ组的空肠黏膜超氧化物歧化酶(SOD)活性显著高于ANT组(P<0.05)。ZO、LANZ组的空肠黏膜CAT活性显著高于CON和ANT组(P<0.05)。ANT、ZO、NZO、LANZ和HANZ组的空肠黏膜T-AOC显著高于CON和MANZ组(P <0.05)。4) HANZ组的回肠黏膜CAT活性显著低于CON组(P<0.05),ZO、NZO组的回肠黏膜谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性显著低于CON、ANT和LANZ组(P<0.05)。由此可见,断奶仔猪饲粮中添加适量凹土纳米氧化锌能够提高血清、肝脏和肠道中抗氧化酶的活性,增强仔猪的抗氧化性能。本试验中,饲粮中凹土纳米氧化锌适宜添加量为700 mg/kg。     

凹土纳米氧化锌对断奶仔猪肝脏免疫功能和脂代谢的影响

本试验旨在研究饲粮中添加凹凸棒土负载纳米氧化锌(凹土纳米氧化锌)对断奶仔猪肝脏免疫功能和脂代谢的影响。试验选取210头21日龄体重相近[(6.30±0.51)kg]的健康“杜×长×大”断奶仔猪,随机分为7组,每组6个重复。分别为对照组(CON组,基础饲粮)、抗生素组(ANT组,基础饲粮+100mg/kg50%喹乙醇+150mg/kg15%金霉素+50mg/kg10%硫酸黏菌素)、氧化锌组(ZO组,基础饲粮+3000mg/kg氧化锌)、纳米氧化锌组(NZO组,基础饲粮+800mg/kg纳米氧化锌)、低凹土纳米氧化锌组(LA-ZO组,基础饲粮+700mg/kg凹土纳米氧化锌)、中凹土纳米氧化锌组(MA-ZO组,基础饲粮+1000mg/kg凹土纳米氧化锌)和高凹土纳米氧化锌组(HA-ZO组,基础饲粮+1300mg/kg凹土纳米氧化锌)。结果表明:1)LA-ZO组仔猪肝脏中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量显著低于ZO、MA-ZO和CON组(P<0.05),相比CON和NZO组,LA-ZO和MA-ZO组仔猪肝脏中白细胞介素-4含量显著提高(P<0.05),HA-ZO组仔猪肝脏中细胞因子含量与CON组相比没有显著差异(P>0.05);2)NZO和LA-ZO组仔猪肝脏中TNF-α的表达量显著低于CON组(P<0.05),HA-ZO仔猪肝脏中细胞因子相关基因表达量与CON组相比没有显著差异(P>0.05);3)LA-ZO和MA-ZO组仔猪肝脏中低密度脂蛋白胆固醇含量显著低于CON和ANT组(P<0.05),LA-ZO和NZO组仔猪肝脏中总胆固醇含量显著低于CON、ANT和ZO组(P<0.05),HA-ZO组仔猪肝脏中脂代谢相关产物含量与CON组相比没有显著差异(P>0.05);4)LA-ZO、ANT和MA-ZO组仔猪肝脏脂肪酸合成酶表达量显著低于CON、ZO和NZO组(P<0.05),且LA-ZO组仔猪肝脏激素敏感脂肪酶表达量显著高于CON、ANT和ZO组(P<0.05);HA-ZO组仔猪肝脏中脂代谢相关基因表达量与CON组相比没有显著差异(P>0.05)。综上,相比对照组,在断奶仔猪饲粮中添加凹土纳米氧化锌一定程度上有利于仔猪肝脏免疫功能和脂代谢,且以700mg/kg的添加量效果最佳。     

鼠伤寒沙门菌诱导自噬的分子机制研究进展

随着自噬现象的发现以来,有关自噬的研究在很多领域取得了重大突破,而鼠伤寒沙门菌与自噬之间的研究报道较少。文章主要阐述了自噬发生的整个机理过程,标志性蛋白LC3及其上下游蛋白Atg和p62之间的作用机制,自噬信号通路的激活位点和条件,基于鼠伤寒沙门菌刺激TLR系统激活TAK1,导致免疫细胞中的AMPK和ULK1的活化,抑制mTOR的活性,进一步阐述了沙门菌与自噬之间的相互关联性。     

腹泻仔猪肠道病毒组学分析

为了解上海周边地区腹泻仔猪肠道病毒组学特征,特别是冠状病毒流行情况,采用病毒宏基因组学方法对6个猪场的90份疑似病毒感染导致腹泻粪样进行检测,并通过Geneious和MEGA7.0等生物信息学软件对获得的完整的α冠状病毒属中的PEDV ORF3基因序列进行遗传进化分析。数据显示,腹泻仔猪肠道病毒群落组成主要由小RNA病毒科(Picornaviridae)(63.67%)、星状病毒科(Astroviridae)(12.68%)、杯状病毒科(Caliciviridae)(4.07%)、细小病毒科(Parvoviridae)(2.51%)等组成。在唯一一个检测出PEDV阳性的猪场中,腹泻仔猪PEDV阳性率高达43.33%(13/30)。基因序列遗传进化分析显示,在本研究获得的3个PEDV ORF3基因序列中,有1个属于G2基因型,与其他参考PEDV病毒株相似性较高(96.44%～99.70%);另外2个ORF3基因序列属于G1基因型,相似性相对较低(95.11%～99.41%)。与PEDV传统株CV777蛋白序列比较分析发现,除piglet91株产生F2S突变以外,三株PEDV存在一致性突变,分别如下:V21A、I70M、V79I、F80V、L85I、L92F,这一特性,有可能是PEDV传统株与流行株基因型的鉴别依据。上海周边地区腹泻仔猪肠道病毒组成丰富,在不同猪群中,不同病原感染的情况有所差异,除了PEDV外,星状病毒和杯状病毒也是仔猪腹泻的主要病原。PEDV的ORF3基因与传统分离株相比具有独特的分子特征,新检测到的毒株突变位点与病毒毒力的关系有待于进一步研究。研究结果有助于了解腹泻仔猪肠道的病毒谱,并为仔猪病毒病防控提供一定的基础数据。     

消毒剂Neopredisan135-1对大熊猫西氏贝蛔虫卵的体外杀灭效果观察

西氏贝蛔虫是危害圈养大熊猫的主要寄生虫,西氏贝蛔虫卵是圈养大熊猫重复感染该蛔虫的来源,虫卵在外界环境中有着极强的生存能力。测定了消毒剂Neopredisan135-1对西氏贝蛔虫卵的体外杀灭效果,为圈养大熊猫西氏贝蛔虫的防控提供参考。将分离自大熊猫新鲜粪样中的西氏贝蛔虫卵通过消毒剂Neopredisan135-1不同浓度(2.5、5、10、20、40mg/mL)与不同作用时间(30、60、90、120min)处理后,将处理后的蛔虫卵和未用消毒剂处理的平行对照组一并置于25mg/mL的重铬酸钾溶液28℃温箱内,培养后在显微镜下观察虫卵的发育与死亡情况。结果发现,2.5mg/mL浓度组处理虫卵30、60、90min,其虫卵杀灭率均在50%左右;5mg/mL浓度组处理虫卵30min和60min,其虫卵杀灭率在74.71%～87.64%;而在10、20、40mg/mL浓度下处理30min其杀灭率均达到90%以上,10、20、40mg/mL的Neopredisan135-1对西氏贝蛔虫卵均具有较强的杀灭作用。考虑到成本、杀灭效果以及环境等因素,消毒剂Neopredisan135-1的推荐使用浓度为20mg/mL。     

猪圆环病毒3型Cap蛋白单克隆抗体的制备及其在免疫组化试验中的初步应用

为制备猪圆环病毒3型(PCV3)Cap蛋白单克隆抗体(MAb),并初步应用于感染细胞或组织样品中PCV3抗原的间接免疫荧光试验(IFA)或免疫组化(IHC)检测,本研究将PCV3 Cap蛋白的去核定位信号肽基因克隆于原核表达载体pET-28a中,经IPTG诱导表达了具有免疫原性的融合蛋白。以表达的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,共获得8株能够稳定分泌针对PCV3 Cap蛋白的MAb杂交瘤细胞株。Western blot与IFA试验结果显示,8株MAbs均能够与真核表达的重组Cap蛋白反应。选取3株杂交瘤细胞制备3株MAbs,小鼠腹水效价分别为1∶409 600、1∶204 800和1∶409 600。利用3株MAbs对自然感染PCV3临床病猪的腹股沟淋巴结进行IHC检测,结果显示3株MAbs的腹水均能够与感染PCV3的临床样品发生特异性的免疫反应。本研究制备的MAbs具有较好的特异性,为深入研究Cap蛋白的结构和PCV3快速诊断奠定了基础。