牛支原体、牛病毒性腹泻病毒和牛传染性鼻气管炎病毒三重二温式PCR检测方法的建立及应用

为建立一种可同时检测牛支原体(MB)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和牛传染性支气管炎病毒(IBRV)的三重二温式PCR检测方法。根据GenBank中MB、BVDV和IBRV的保守基因Uvrc基因、5′端非编码区(5′-UTR)和GB基因,分别设计了3对特异引物,将三温式PCR扩增程序简化为两个温度梯度,优化反应条件建立了用于同时检测MB、BVDV以及IBRV 3种常见牛呼吸道传染病病原的三重二温式PCR。结果显示,该方法特异性好,只对MB、BVDV和IBRV模板进行扩增,扩增的目的片段长度分别为412、170、727bp,对其他牛病原体无特异性扩增;灵敏度高,最低能同时检测到10 000拷贝的目的核酸;干扰性小,能同时检测3个不同浓度的模板。研究所建立的MB、BVDV和IBRV三重二温式PCR检测方法,具有特异性好、灵敏度高、方便快速等优点,可用于临床鉴别诊断和流行病学调查,具有很高的临床应用价值。     

牛病毒性腹泻二温式PCR检测方法的建立

根据牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的5’端非编码区设计了1对可以扩增244bp BVDV某段基因序列的特异性引物,优化建立了BVD的二温式PCR快速检测方法。特异性试验和敏感性试验结果表明,该方法只对BVDV模板进行扩增,而对其他对照病毒的检测均为阴性;最低能检测到1pg牛病毒性腹泻病毒RNA。本研究所建立的BVD二温式PCR方法是一种快速、特异、敏感的检测方法。     

牛病毒性腹泻病毒和牛轮状病毒TaqMan二重实时荧光RT-PCR检测方法的建立

根据牛病毒性腹泻病毒（BVDV）5′端非编码区和牛轮状病毒（BRV）VP6基因序列,设计特异性引物和探针。通过对引物和探针浓度、Mg2＋浓度、dNTP浓度和Taq酶用量以及反应条件等因素的优化筛选,建立了能同时鉴别BVDV和BRV的二重荧光RT-PCR方法。该方法特异性好,与其他病原如CSFV、MB和IBRV不发生交叉反应;敏感性高,能够检测100个BVDV RNA和100个BRV RNA;稳定性好,批内重复和批间重复变异系数小;干扰性试验表明该方法能同时检测2个模板的不同浓度组合。本研究建立的二重荧光RT-PCR方法可用于BVDV和BRV检测,具有特异、敏感、快速、稳定等优点,是BVDV和BRV基础研究、流行病学调查和临床检测的良好工具。     

牛病毒性腹泻病毒、牛呼吸道合胞体病毒和牛副流感病毒3型三重RT-PCR检测方法的建立及应用

根椐GenBank中牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)、牛呼吸道合胞体病毒(bovine respiratory syncytial virus,BRSV)和牛副流感病毒3型(bovine parainfluenza virus type 3,BPIV-3)3种病毒基因序列,设计合成引物,建立3种病毒的三重RT-PCR方法。用这3对引物对同一样品中的BVDV、BRSV和BPIV-3核酸模板进行三重RT-PCR扩增,结果显示:可同时扩增BVDV的466 bp,BRSV的735 bp和BPIV-3的258 bp的特异性片段,而对其他4种病原的PCR扩增结果均为阴性;敏感性测定结果表明,该三重RT-PCR技术能检出10 pg的BVDV、1 pg的BPIV-3和10 pg的BRSV模板。用37份临床病料对本研究多重RT-PCR技术和单项RT-PCR技术进行对比验证,结果显示:两者的总符合率为100%。结果表明:建立的多重RT-PCR检测方法,具有特异、快速、准确的特点,可用于对这3种病毒的同时检测和鉴别诊断。     

牛环形泰勒虫病二温式PCR诊断方法的建立及初步应用

为建立特异、敏感、快速的二温式PCR诊断方法,根据牛环形泰勒虫裂殖子表面抗原(tams1)基因,设计了一对特异性引物,扩增出大小为154bp基因片段,经克隆、测序分析,与已知基因序列的相似性为96%。用建立的牛环形泰勒虫病二温式PCR诊断方法,对从新疆牛环形泰勒虫病流行地区采集的50份全血样品进行诊断,阳性率为88%,而血涂片检出的阳性率只有58%。经试验验证,该方法具有特异性高、敏感性强、重复性和稳定性好等优点。表明本试验所建立的二温式PCR诊断方法可用于牛环形泰勒虫病的临床诊断、隐性感染检测和流行病学调查。     

二重PCR检测牛血液中BVDV的初步应用

为筛选和建立准确、快速、敏感的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)检测方法,根据BVDV基因序列高度保守的5’UTR区,合成1对特异引物,从疑似BVDV感染的个体牛血清中提取RNA作为模板,采用二重PCR方法,获得252 bp特异性扩增产物,以此鉴别是否感染BVDV。结果表明,用该方法对同一牛场混合血清样品进行检测,发现该牛场存在BVDV感染。实验证明,该方法检测牛群是否感染BVDV,简单、快速、灵敏,且经济、方便、实用,在牛群BVDV检疫中具有较好的实用价值。     

二重RT-PCR同时检测VSV与BVDV核酸

水泡性口炎病毒(VSV)与牛病毒性腹泻病毒(BVDV)具有相近的传播途径与类似的检测方法，本文参照文献报道的基因序列，设计合成了两对能分别扩增VSV(202bp)、BVDV(341bp)基因片段的引物，并对PCR扩增条件进行优化，建立了二重RT-PCR方法，可同时检测VSV与BVDV病毒核酸。VSV产物经测序显示与报道的核酸序列同源性为88．6％。二重RT-PCR同时检测VSV与BVDV经济、快速、敏感、特异，可用于实验研究和流行病学调查。     

BVDV、BCV和BRV三重RT-PCR检测方法的建立及应用

根椐GenBank中已发表的牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)、牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCV)和牛轮状病毒(bovine rotavirus,BRV)3种病毒基因序列,设计引物。在建立各病毒单项RT-PCR技术的基础上,优化三重RT-PCR反应条件,建立了3种病毒的三重RT-PCR技术,用这3对引物对同一样品中的BVDV、BCV、BRV核酸模板进行三重RT-PCR扩增,结果可同时扩增BVDV的466 bp,BCV的685 bp,BRV的247 bp的特异性片段,而对猪瘟病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛呼吸道合胞体病毒和牛副流感病毒3型扩增结果均为阴性。敏感性测定表明,该三重RT-PCR技术能检出10 pg的BVDV、1 pg的BRV和10 pg的BCV模板。用45份临床病料对本研究多重RT-PCR技术和单项RT-PCR技术进行对比验证,显示两者的总符合率为100%。表明建立的多重RT-PCR检测方法具有特异、快速、准确的特点,可用于对这3种病毒的同时检测和鉴别诊断。     

基因Ⅰ型和Ⅱ型牛病毒性腹泻病毒双重TaqMan荧光定量PCR的建立及应用

为对基因Ⅰ型和Ⅱ型牛病毒性腹泻病毒(BVDV)进行鉴别检测,本研究根据GenBank中已登录的基因Ⅰ型和Ⅱ型BVDV 5'非编码区(5'-UTR)的参考序列,设计了一对BVDV Ⅰ型和Ⅱ型通用引物和2条鉴别探针,建立了Ⅰ型和Ⅱ型BVDV双重TaqMan荧光定量PCR检测方法,并利用该检测方法进行临床样品检测。特异性试验结果显示,除Ⅰ型和Ⅱ型BVDV外,该方法对猪瘟、牛传染性鼻气管炎、口蹄疫病毒等均无扩增曲线。敏感性试验结果显示,该方法对Ⅰ型BVDV检测下限为10拷贝/μL,Ⅱ型BVDV检测下限为100拷贝/μL,敏感性高。重复性试验结果显示,该方法组内和组间变异系数均小于1%。临床样品检测结果显示,Ⅰ型和Ⅱ型BVDV双重TaqMan荧光定量PCR检测方法可鉴别Ⅰ型和Ⅱ型BVDV,检测结果与OIE认可的BVDV普通PCR扩增产物测序结果一致。本研究所建立的Ⅰ型和Ⅱ型BVDV双重TaqMan荧光定量PCR具有快速、准确、可鉴别等优点,可用于Ⅰ型和Ⅱ型BVDV的快速鉴别检测。     

牛病毒性腹泻病毒、牛肠道病毒、牛轮状病毒、牛冠状病毒四重一步法RT-PCR鉴别检测方法的建立与应用

为了建立一种能够同时、快速鉴别检测牛病毒性腹泻病毒（BVDV）、牛肠道病毒（BEV）、牛轮状病毒（BRV）、牛冠状病毒（BCV）的方法,根据BVDV 5’UTR基因、BEV 5’UTR基因、BRV VP6基因、BCV N基因设计引物,建立了能够同时鉴别检测BVDV、BEV、BRV、BCV的四重一步法RT-PCR方法,该方法检测IBRV、BPIV-3、BRSV均为阴性,对BVDV、BEV、BRV、BCV的核酸检测下线分别为3.28、28.2、23.6、25.0 pg,与现有标准或商品化RT-PCR试剂盒的符合率均为100%,批内和批间重复性试验的检测结果均完全一致,检测222份临床样品的BVDV、BEV、BRV、BCV阳性率分别为15.32%、18.02%、6.31%和4.05%。说明四重一步法RT-PCR方法特异性好、灵敏度高、稳定性强,可用于BVDV、BEV、BRV、BCV的临床鉴别诊断、流行病学调查以及疫病防控。     

2017—2018年云南省边境地区阿卡斑病毒抗体检测

为了解云南边境地区近年来阿卡斑病毒(Akabanne disease virus,AKAV)流行情况,2017—2018年连续2年在云南省与缅甸、老挝、越南接壤的12个边境县采集牛血清,应用cE LISA方法进行AKAV抗体检测。结果显示:2017—2018年共检测牛血清样品1 860份,检出阳性样品108份,阳性率为5.8%,显示这些地区存在一定的AKAV感染;各县AKAV抗体阳性率在0～24.4%之间,差异较大,其中抗体阳性率最高的为富宁县,2017年和2018年的阳性率分别为24.4%和20.0%,而瑞丽连续2年未检出抗体阳性;黄牛AKAV抗体阳性率(6.6%)高于水牛(4.7%),差异显著(P<0.05);入境牛抗体阳性率(6.5%)高于境内牛(3.0%),差异显著(P<0.05);养殖场(9.0%)、交易市场(8.4%)、屠宰场(7.6%)的牛AKAV抗体阳性率高于村寨散养户(2.5%),差异极显著(P<0.01)。结果表明,AKAV在云南边境地区存在一定的流行,其流行趋势受入境动物影响。结果提示,应继续加强云南省边境地区AKAV等虫媒病毒病的监控,及早发现和控制该病流行。     

呕吐毒素对母兔繁殖性能的影响

本试验旨在评价日粮中呕吐毒素对母兔性能的影响。选择12月龄新西兰空怀经产母兔100只,随机分为5组,每组20只,分别饲喂呕吐毒素含量为100μg/kg、300μg/kg、400μg/kg、700μg/kg、900μg/kg的日粮,评估其对母兔繁殖性能的影响。结果显示,随着日粮中呕吐毒素含量的升高,会造成母兔流产率升高;产仔数、产活仔数、初生个体重均出现显著下降。结果表明,母兔对呕吐毒素是非常敏感的,日粮中呕吐毒素含量达到700μg/kg时,母兔繁殖性能发生显著下降,建议母兔日粮中呕吐毒素控制在700μg/kg内。     

乌蒙乌骨鸡绿壳蛋与白壳蛋的品质及营养成分分析

试验选取相同日龄及饲养条件下乌蒙乌骨鸡生产的绿壳蛋与白壳蛋各60枚,比较分析二者在蛋品质、常规营养指标和矿物质元素含量方面的差异。结果:绿壳蛋与白壳蛋的蛋品质指标中,蛋重、蛋壳重、蛋形指数、蛋壳厚度、蛋黄比率、蛋白比率指标差异不显著(P>0.05),绿壳蛋哈氏单位、蛋白高度极显著高于白壳蛋(P<0.01);蛋营养指标中,能量、碳水化合物、粗蛋白、粗脂肪、氨基酸总量及各类氨基酸含量差异不显著(P>0.05),白壳蛋胆固醇含量极显著高于绿壳蛋(P<0.01);矿物质元素及维生素指标中,Na、Cu、Se、P、Fe、Zn差异不显著(P>0.05),绿壳蛋V_E、叶酸、K含量极显著高于白壳蛋(P<0.01),但V_B1含量极显著低于白壳蛋。结论:综合各项指标评价,乌蒙乌骨鸡生产的绿壳蛋品质及微生素含量优于白壳蛋。     

鸡滑液囊支原体的RT-PCR检测及基因序列分析

为确诊某鸡场肉鸡发病死亡的病因,通过临床症状、病理变化、RT-PCR检测、病原S1基因序列分析进行综合诊断。结果:(1)病鸡表现食欲不振、精神沉郁、跛行及无法站立、关节肿大等症状,剖检发现肿大关节内有大量黏液。(2)鸡滑液囊支原体RT-PCR扩增出现207 bp特异性条带,与预期结果一致。(3)病原S1基因序列分析显示与GenBank公布的鸡滑液囊支原体基因序列同源性均达到99%,构建系统进化树分析显示与GenBank公布的参考株聚为1支。综合诊断为鸡滑液囊支原体感染。     

宁夏兽医社会化服务改革探索

了解宁夏回族自治区兽医社会化服务建设现状,为优化管理政策措施提供支持。2017年以来,宁夏地区兽医主管部门全力推进政府购买兽医社会服务改革,取得了积极成效。一是全区兽医社会化服务组织覆盖面广。全区95.5%(21/22)的县(区)开展了政府购买兽医社会化服务,覆盖全区81.6%(160/196)的乡镇。二是村防员队伍平稳转型,工作效率与薪资待遇显著提高。此外,本文梳理基层兽医服务需求和供给,指出了当前存在养殖主体对政府提供兽医服务的依赖性强,基层兽医机构力量不足,社会兽医服务组织能力不足,兽医服务市场化程度低等发展瓶颈,这提示应加强顶层设计,充分培育社会化服务机构,强化经费投入的目标导向作用。     

羊口疮病毒B2L基因密码子偏好性分析

B2L蛋白是羊口疮病毒(ORFV)的主要囊膜蛋白,为重要保护性抗原之一,可刺激机体产生强烈的抗体反应。本研究对B2L基因运用Visual Gene Developer生物信息学软件,分析其在大肠杆菌、毕赤酵母、昆虫杆状病毒表达系统中的密码子使用偏好性,从而选择一个最适表达系统,以增加B2L蛋白的表达量。分析表明,B2L基因在昆虫杆状病毒表达系统中会得到更好的表达,这为B2L基因表达系统的选择提供了参考。     

天津市动物强制免疫疫苗“先打后补”试点

2016年,天津市作为全国首批试点省份,在全市规模场试行“先打后补”政策。3年来,通过前期细化方案,落实补贴经费,调整防疫管理方式等工作的实施,在推进养殖者主体责任落实,提升免疫政策投入效果等方面成效明显,但鉴于养殖者积极性差、试点初期政策门槛高、补贴到位率低、养殖者自主监测意识弱等问题,提示应简化政策实施程序,建立免疫服务市场,加大政策宣传力度,强化监测与执法衔接,以建立健全强制免疫“先打后补”管理机制,实现养殖者自主免疫,落实防疫主体责任的目标。     

不同月龄纯种和牛主要血液指标变化规律的研究

目前我国对和牛血液指标基本情况的报道较少,本研究测定并对比了不同月龄纯种和牛血液指标变化规律。结果表明,不同月龄纯种和牛血清中β-胡萝卜素含量在1.29~2.64μg/mL之间,γ-谷氨酰转移酶(γ-GTP)含量在19.95~26.81UI/L之间,维生素A含量在37.00~56.74ng/mL之间。     

辽育白牛两部位牛肉营养成分和氨基酸组成的分析

对6头22～24月龄辽育白牛育肥牛的眼肉和腹肉的常规营养成分、氨基酸组成测定分析,结果表明:辽育白牛眼肉和腹肉的水分、蛋白质、脂肪、灰分含量分别为59.5%±3.02%、18.17%±1.22%、24.03%±4.48%、0.84%±0.09%和58.69%±1.21%、15.84%±1.22%、34.18%±7.01%、0.74%±0.04%;必需氨基酸、总氨基酸、必需/总氨基酸、必需/非必需氨基酸含量分别为6.04 g/100 g±0.15 g/100 g、16.4 g/100 g±0.19 g/100 g、36.83%±0.17%、58.3%±0.26%和6.59 g/100 g±0.18 g/100 g、17.72 g/100 g±0.18 g/100 g、37.19%±0.19%、59.21%±0.31%,蛋白质中必需氨基酸组成比例基本符合FAO/WHO的标准。因此,辽育白牛眼肉和腹肉主要营养成分和氨基酸含量构成较为理想,适合生产高档牛肉。     

小规模养猪场分批次化生产技术的试验探讨

根据母猪所处的不同繁殖阶段,对猪场内存栏母猪进行科学规划,并利用现代化生产技术进行干预处理,使同一母猪群达到同期发情、定时输精、同时产仔的批次化生产。本研究于2018年6月份开始对凌源市两个养殖场内八个批次猪群进行了"批次化生产"技术应用试验,结果显示,该项技术看似高难,实则技术简单,易操作,给养殖户管理猪场带来了极大的方便,深受养殖户欢迎。