深绿木霉TraT2A对5种作物的促生作用研究

为明确来源于深绿木霉(Trichoderma atroviride)T2菌株发酵液的蛋白提取物TraT2A对小麦、玉米、豇豆、辣椒和黄瓜5种作物的促生作用,本试验采用种子萌发和室内盆栽试验测定了4种不同浓度的TraT2A对5种作物种子发芽情况、幼苗形态变化和生理特性的影响。结果表明：4种不同浓度的TraT2A对5种作物均具有促生作用,可显著促进作物生长,促生率可达104.69%,同时提高叶绿素含量和根系活力,促生率达24.95%,且降低丙二醛含量,促生率达36.69%。10 mg·mL^-1 TraT2A对5种作物的促生效果最好,且不同作物不同指标之间促生效果存在差异,表现为对黄瓜干质量的促生率最大,为104.69%,其次是对黄瓜活力指数的促生率为91.86%,第三是对辣椒胚轴的促生率为70.17%;对其他作物的发芽率、发芽指数、胚根、鲜质量、干质量、叶绿素含量和根系活力的最大促生率在17.65%～46.46%范围内;10 mg·mL^-1 TraT2A处理5种作物后小麦丙二醛含量降幅最大(36.69%)。4种不同浓度的TraT2A处理5种作物后...     

深绿木霉T2菌株发酵液蛋白提取物TraT2A抑菌条件优化及其对百合叶斑病的田间防治效果

为了提高深绿木霉Trichoderma atroviride T2菌株发酵液蛋白提取物TraT2A的抑菌活性和光稳定性,采用菌丝生长速率法,通过对紫外保护剂 (抗坏血酸、腐殖酸) 和辅助剂 (IE-08、SP-4821A和SP-4821B) 的筛选,优化了TraT2A对百合叶斑病菌Alternaria alternata的抑菌条件,并测定了其对百合叶斑病的田间防治效果。结果表明:TraT2A在200.00 mg/mL下对百合叶斑病菌A.alternata的抑菌作用较好,抑制率为72.12%;随着紫外光照时间的延长,TraT2A的抑菌活性逐渐降低,添加5.00 mg/mL的腐殖酸对TraT2A有较好的紫外保护作用,抑制率 (69.01%) 比不加紫外保护剂对照 (29.37%) 提高39.64%;添加0.17 mg/mL 的辅助剂SP-4821A对TraT2A活性的提高效果最好,抑制率 (95.13%) 比TraT2A对照 (69.16%) 提高25.97%。按照优化后的配方:200 g TraT2A (质量浓度为200.00 mg/mL) + 5 g腐殖酸 (质量浓度为5.00 mg/mL) + 0.17 g SP-4821A (质量浓度为0.17 mg/mL) + 794.83 mL灭菌水,进行田间药效试验,结果发现其对百合叶斑病的防治效果为80.37%。该研究结果为进一步开发防治百合病害的TraT2A制剂提供了理论依据。     

深绿木霉T2菌株对百合疫霉拮抗作用及机制

本文采用对峙培养、抗生物质测定、对扣培养、圆盘滤膜法、酶活性测定等方法,研究了深绿木霉对百合疫霉病菌的拮抗作用及机制。结果表明,深绿木霉T2菌株具有较强的营养竞争与重寄生作用;并发现其有抗生物质和溶菌酶类产生,对峙培养60 h时,深绿木霉生长速率是百合疫霉的3.68倍,能够与其竞争营养,抑制了百合疫霉的生长与扩展,深绿木霉寄生在百合疫霉菌丝上生长,导致百合疫霉菌丝降解;其代谢产物能够抑制百合疫霉的生长,48 h时难挥发性和易挥发性代谢产物对百合疫霉的抑菌率分别为85.07%和79.10%;深绿木霉T2菌株的发酵液有较高的β 1,3 葡聚糖酶活性,并在第5天达到峰值,为18.54U;深绿木霉发酵液对百合疫霉菌丝有降解作用。     

蝇蛆甲壳素对深绿木霉T2产生几丁质酶的诱导作用

分别采用EDTA除钙和氢氧化钠-戊醇反应体系,并结合微波加热处理2次的优化工艺,从蝇蛆中提取甲壳素、壳聚糖,探讨二者对深绿木霉T2菌株产生几丁质酶的影响,并对深绿木霉T2几丁质酶活性及其对4种病原真菌的拮抗作用进行了研究。结果表明,提取的蝇蛆甲壳素的产出率为75.0%,灰分含量为17.3%;蝇蛆壳聚糖制备获得脱乙酰度为95.5%、含水量为8.36%的高质量壳聚糖产品,且碱用量明显下降,反应时间由4 h缩短为6 min;蝇蛆甲壳素培养基诱导培养的深绿木霉T2几丁质酶活性为0.9721 U/mL,高于PDB液体培养基、SCMS营养液和蝇蛆壳聚糖培养基;不同营养条件下,蝇蛆甲壳素培养基均能够诱导深绿木霉T2菌株产生几丁质酶,且最佳产酶培养时间为120 h,酶活性峰值为1.8340 U/mL;经蝇蛆甲壳素诱导后的深绿木霉T2菌株对4种病原菌的抑菌效果明显高于对照菌株T2。     

深绿木霉发酵液对黑麦草促生作用及生理生化特性的影响

通过种子萌发和幼苗盆栽试验研究了不同稀释倍数深绿木霉发酵液对黑麦草促生作用及生理生化特性的影响。室内试验结果表明,不同稀释倍数深绿木霉发酵液能够显著提高黑麦草种子的发芽率、发芽指数和活力指数,尤其是100倍稀释液对黑麦草种子发芽率、发芽指数和活力指数的影响较为明显,分别为96.55%、37.41和7.83。盆栽试验结果表明,不同稀释倍数深绿木霉发酵液对黑麦草幼苗的生长具有明显的促生作用,以及能够显著地提高幼苗叶绿素、可溶性蛋白含量和与抗性相关酶的活性,尤其是100倍稀释液处理的黑麦草幼苗根系长度、株高、鲜重、干重和根冠比的相对增长率分别为16.95%、13.33%、40.57%、73.68%和36.36%;叶绿素和可溶性蛋白含量的相对增长率分别为8 4.09%和75.50%;多酚氧化酶、过氧化物酶和苯丙氨酸解氨酶活性均显著高于对照,且多酚氧化酶和苯丙氨酸解氨酶活性在处理后第四天达到最大值,过氧化物酶活性在处理后第三天达到最大值。因此,深绿木霉发酵液对黑麦草的生长具有显著的促生作用,且能够显著提高与抗性相关酶的活性。     

木霉对植物的促生及诱导抗性研究进展

木霉不仅能够直接抑制植物病原菌的生长,还可通过定殖于植物的根部引起植物新陈代谢的改变。本文综述了木霉在植物根部定殖后,通过产生植物生长调节剂、抑制或降解根际有害物质、增加养分利用率以促进植物生长以及通过产生激发子诱导植物形成胞壁沉积物、合成抗菌物质以诱导植物局部或系统抗性的研究进展,以期为进一步扩大木霉在农业生产中的应用提供参考。     

帚枝霉属内生真菌激发子蛋白SbES诱导辣椒抗棒孢叶斑病作用机理

为明确帚枝霉属Sarocladium内生生防真菌HND5菌株外泌激发子蛋白SbES的诱导辣椒抗病作用机理,通过构建SbES蛋白的毕赤酵母Pichia pastoris重组蛋白表达菌株,利用纯化后的SbES重组蛋白处理辣椒植株,检测辣椒对棒孢叶斑病的抗性,以及相关抗病反应与抗病基因表达的变化。结果表明,0.1 mg/mL SbES重组蛋白可有效诱导辣椒产生对棒孢叶斑病的抗性,可激发辣椒叶片活性氧爆发、微过敏反应和胼胝质积累等抗病反应;并能有效提高辣椒叶片中与活性氧爆发、过敏性反应、胼胝质合成和植保素合成等抗病反应相关基因,以及水杨酸、茉莉酸和乙烯信号传导关键基因的表达。推测帚枝霉属内生真菌激发子蛋白SbES可通过激活多种抗病信号传导途径来激发辣椒产生对棒孢叶斑病的抗性。     

长枝木霉菌株TL16防治南方根结线虫的作用机理

为探明长枝木霉Trichoderma longibrachiatum菌株TL16防治南方根结线虫Meloidogyne incognita的作用机理,采用原生质体转化法获得绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记菌株GFP-TL16,通过测定菌株TL16和GFP-TL16对南方根结线虫卵和2龄幼虫(2nd-stage juvenile,J2)的寄生与致死作用,其发酵液对卵孵化的抑制作用和对J2的致死作用,以及菌株GFP-TL16在黄瓜根系的定殖情况和菌株TL16对番茄根结形成的抑制作用来综合分析其作用机理。结果显示:菌株TL16菌丝对南方根结线虫卵无寄生作用,处理19 d后卵降解率为26.33%,致死作用较低;菌株TL16分生孢子悬浮液处理南方根结线虫J2后72 h的致死率为1.65%,且无寄生作用。菌株TL16发酵液处理南方根结线虫J2后48 h的校正死亡率为10.71%,处理卵15 d后对卵孵化的相对抑制率为77.11%。菌株GFP-TL16可定殖于黄瓜根系中,经菌株TL16处理后接种南方根结线虫J2,番茄根结减退率为55.88%。表明长枝木霉菌株TL16可通过抑制根结线虫卵孵化和诱导番茄产生抗病性来防治根结线虫病。     

50% TraT2A水分散粒剂研制及其增效剂筛选

为提高深绿木霉Trichoderma atroviride T2菌株发酵液蛋白提取物TraT2A的稳定性及诱导抗病活性,通过筛选合适助剂、优化配方后,采用挤压造粒法制备50%TraT2A水分散粒剂,对其进行质量标准和活性评价;并通过增效剂筛选研制该制剂的复配增效剂。结果显示,以优化后的50%TraT2A水分散粒剂配方(质量分数)为50.00%TraT2A、2.00%十二烷基苯磺酸钠、8.00%聚羧酸盐、0.50%聚乙烯吡咯烷酮、4.50%硫酸铵、1.00%抗坏血酸、34.00%煅烧高岭土制得的制剂,其有效成分质量分数为48.60%,外观为白色颗粒状固体,颗粒破碎率为4.43%,水分含量为2.10%,崩解时间为57.13 s,悬浮率为83.04%,细度(75μm湿筛)为100.00%,粒度(100μm标准试验筛)为95.00%,pH为7.90,持久起泡性为250 mL试管中泡沫高度12.25 mL,经热贮、冷贮后该制剂外观及各项指标均无明显变化,有效成分分解率分别为3.60%和2.00%,均达到国家质量控制标准。当50%TraT2A水分散粒剂浓度分别为40、20 mg/mL时,对灰霉菌Botrytis cinerea的抑制率及对百合抗灰霉病的诱抗效果达到最高,分别为61.79%和65.77%;当增效剂0.50 mg/mL JFC和0.20 mg/mL杰效利按体积比3∶7混合时增效最显著,诱抗效果达74.20%,增效为12.82%。表明50%TraT2A水分散粒剂质量合格,且该制剂高浓度时对灰霉菌有一定抑制作用,低浓度时有较高的诱导抗病作用;所得复配增效剂对该制剂的诱导抗病作用增效明显。     

Synergistic Antifungal Activity of Chitinolytic Enzymes and Prodigiosin Produced by Biocontrol Bacterium, Serratia marcescens Strain B2 against Gray Mold Pathogen, Botrytis cinerea

Serratia marcescens strain B2 is an effective biocontrol agent against gray mold of cyclamen, caused by Botrytis cinerea Persoon. Strain B2 has strong antifungal activity against B. cinerea in vitro. The culture filtrate was found to contain different types of chitinolytic enzyme activity, including endochitinase and chitobiase activity. Four chitinolytic enzymes were detected among the extracellular proteins of strain B2. Two major enzymes, a 58-kDa endochitinase and a 98-kDa chitobiase, were purified by chromatography and electrofocusing, respectively. Both enzymes inhibited spore germination of B. cinerea. And a red pigment, prodigiosin, extracted and purified from the bacterial cells, also inhibited spore germination. When prodigiosin and the chitinolytic enzymes were applied in concert, a synergistic inhibitory effect was observed. S. marcescens strain B2 has multiple modes of action against the pathogen. Received 14 February 2001/ Accepted in revised form 31 May 2001