mRNA差异显示技术在营养学研究中的应用

高等生物大约有 10 0 0 0 0个不同的基因 ,然而在任一细胞中表达的基因仅约占总数的 15 % ,即 15 0 0 0个。基因表达的开启、关闭以及表达量的变化 ,决定了每一个生命体的生长发育、分化以及细胞周期调控、衰老、死亡等生命过程。基因表达的变化是调控细胞生命过程的核心 ,因此研究细胞或组织在不同状态下基因表达的差异已成为分子生物学研究领域的热点之一。目前检测基因表达差异常用的方法有减法杂交、差异杂交、ｍＲＮＡ差显技术 (ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｉｓｐｌａｙｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎＰＣＲ ,ＤＤＲＴ ＰＣＲ)等…     

SSH与cDNA芯片技术的联合及其在植物基因差异表达研究中的应用

抑制消减杂交技术(SSH)与cDNA芯片技术是新近发展起来的研究差异表达基因的两种非常有效的方法。近年来,将SSH和cDNA芯片技术结合使用,为分析组织细胞的已知基因表达差异提供了新的手段,也为克隆和鉴定新基因开辟了新的道路,是目前寻找差异表达基因的适用方法。鉴于此,对SSH和cDNA芯片技术的基本原理、两种方法结合使用的操作流程、克隆差异表达新基因的特点,以及在植物基因差异表达方面的应用进行了概述。     

抑制性消减杂交技术及其在动物基因研究中的应用

抑制性消减杂交(SSH)是结合抑制性PCR和消减杂交技术发展起来的一种高效分离差异表达基因的方法,具有特异性高、假阳性率低、操作简便、灵敏度高等特点.在两种状态下基因的表达变化、差异基因的克隆和鉴定对基因表达调控有着重要意义.SSH在动物抗病、抗应激及药物的靶基因等方面的研究中取得了重要的进展.     

mRNA差异显示技术及其在动物科学研究中的应用

基因表达的变化是调控细胞生命活动过程的核心机制,分析不同细胞或同类细胞在不同发育阶段、不同生理状态下基因的表达状况,可以为研究生命活动过程提供重要信息。mRNA差异显示技术(differentialdisplay,DD)是目前应用比较广泛的在mRNA水平上检测基因表达的方法之一。本文介绍了mRNA差异显示技术原理及其优缺点,对包括引物设计改进、反应条件的优化、差异条带显示方法改进和降低假阳性策略等在内的技术改进进行了概述,对mRNA差异显示技术在动物生理学和病理学、动物胚胎、个体发育、动物遗传育种、动物营养研究中的应用作了概括介绍。     

mRNA差异显示技术的研究进展

在高等生物的发育过程中,基因的表达具有组织特异性及生长期特异性,正是由于基因的差异表达决定了所有的生命过程。在个体发育调节,细胞增殖、分化与凋亡,生理刺激,病理变化,以及某些药物的治疗等都会出现ｍＲＮＡ表达水平的变化。分析不同类型细胞中基因表达的差异,并克隆那些对生命过程以及病理变化至关重要的特异性表达基因,是分子生物学研究的重要任务。传统的基因分离方法主要有扣除杂交和差异杂交技术。虽然用这些技术已成功分离许多重要的基因,但技术操作繁琐,花费时间长,重复性差,效率低,而且只能进行２种组织样品的比…     

抑制性差减杂交技术(SSH)及其研究应用进展

高等生物大约含有 10万个不同的基因 ,其中仅有 15 %即 15 0 0 0个表达 ,基因表达的变化是调控细胞生命活动过程的核心机制 [1 ] 。因此 ,通过比较同一类细胞在不同生理状态下或在不同生长发育阶段的基因表达差异 ,可为分析生命活动过程提供重要信息。生物体几乎所有的生命活动过程包括病理的变化 ,从本质上讲均是基因表达变化的结果。因此 ,关于真核生物发育过程中基因表达与调控的研究已引起人们的高度重视。过去 ,人们对差异表达基因的分离主要依赖于示差筛选和差别杂交技术 ,但它们又存在着重复性差、敏感度低等缺点。近几年 ,随着 PC…     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒感染猪肺泡巨噬细胞的差异转录基因文库构建

为鉴定高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)HuN4株感染猪肺泡巨噬细胞(PAM)后,细胞内转录发生差异的基因,本研究采用抑制性消减杂交技术,以HP-PRRSV HuN4株感染后48 h的PAM细胞mRNA为实验方(Tester),以未感染的PAM细胞为驱动方(Driver)进行消减杂交,得到了HP-PRRSV HuN4株感染后PAM内转录后发生上调的基因.反之,实验方与驱动方互换进行消减杂交,得到了HP-PRRSV HuN4株感染后PAM内转录后发生下调的基因.将2种杂交所得的差异转录基因经PCR扩增后分别克隆到T载体中并转化大肠杆菌感受态细胞,从而构建了正向(上调)和反向(下调)的差异cDNA文库.随机挑取文库中的多个克隆用PCR方法进行鉴定,结果表明差异文库中的cDNA具有较好的多样性.本研究为下一步的文库克隆的序列测定与差异基因的功能分析奠定了基础.     

mRNA差异显示技术及其在动物遗传研究中的应用

mRNA表达水平的变化决定细胞的功能状态,mRNA差异显示技术是在转录水平上研究基因表达的有效方法,本文综述了mRNA差异显示技术的基本原理方法、PCR引物设计及其循环参数优化、克服假阳性方法的建立,以及其在动物遗传研究中的应用现状,并对其前景进行了展望。     

Differential diagnosis of feline pruritus

Pruritic skin diseases in the cat are best approached in a problem-oriented fashion. The presentations of pruritic skin disease in the cat include miliary dermatitis, pruritus of the head, scaling and crusting dermatoses, alopecia, erythroderma and exfoliation, eosinophilic granuloma complex, macular and pustular eruptions, and pruritic nodular dermatoses. There is a specific differential diagnosis for each presentation. A rational diagnostic plan, based on the likelihood of each disease in the differential diagnosis, may be formulated for each presentation of pruritus in the cat.     

利用mRNA差异显示技术筛选丝羽乌骨鸡肝脏差异表达序列标签

为了找出可能与丝羽乌骨鸡独特性状形成相关的基因,本研究运用差异显示PCR技术等对丝羽乌骨鸡与快大型肉鸡肝脏组织中差异表达的基因进行筛选,并通过生物信息学方法对所筛选出的差异表达序列标签进行分析。结果,本研究共筛选得到10条丝羽乌骨鸡与快大型肉鸡肝脏差异表达序列标签(dbEST登录号:CN606328~CN606329、CN606331~CN606338)。生物信息学分析结果显示:10条ESTs中,CN606332和CN606336是家鸡的18S rRNA基因部分序列,CN606333与编码家鸡热休克蛋白70的基因(HSPA5)同源,CN606328、CN606331与家鸡已有核酸数据库中的cDNA克隆或EST具有较高相似性,但功能未知。其他5条表达序列标签在家鸡核酸数据库中未发现相似序列,但分别与其他物种的细胞膜蛋白基因、γ-谷氨酰转肽酶(gamma-glutamyl transpeptidase)基因、ATP-binding cassette transporter基因、推定蛋白MGC27019基因以及异常纺锤型小脑畸形症(abnormalspindle microcephaly,ASPM)蛋白基因有不同程度的相似性。本研究结果表明,丝羽乌骨鸡与快大型肉鸡可能在多种代谢途径上都存在差异表达的基因,通过进一步深入研究这些差异表达基因,可以为研究丝羽乌骨鸡独特性状的形成提供重要的信息。     

mRNA差异显示技术的研究

mRNA差异显示(mRNA Differential Display,DD)技术和表达序列标签(expressed sequence tags,ESTs)策略是目前基因组学研究中的强劲而有力的手段。mRNA差异显示技术在一般的分子生物学实验室就能得到应用,并产生ESTs,从而开展动植物基因组学的相关研究。