川牛膝多糖联合维生素C体外抑制HepG-2肿瘤细胞活性的作用

为了解川牛膝多糖联合维生素C抑制肿瘤细胞活性作用,采用超声波提取法从川牛膝根中提取川牛膝多糖(RCP),经Sevage法除去蛋白,并采用30%双氧水脱色、浓缩、冻干,得到川牛膝粉针剂,通过苯酚硫酸法制作葡萄糖标准曲线,进而测得多糖含量。体外联合维生素C作用于肝癌HepG-2细胞,采用噻唑蓝(MTT)法研究对HepG-2细胞的抑制作用。结果表明,川牛膝多糖与维生素C均可抑制肝癌HepG-2细胞的增殖,当多糖质量浓度为5、50、100、200 mg/mL时,对肝癌HepG-2的抑制率分别为19.7%、62.1%、59.1%、65.1%。当维生素C的浓度为0.1、0.2、0.3、0.4 mmol/L时,对肝癌HepG-2的抑制率为10%、11%、12%、54%。研究结果提示两者对肿瘤的抑制均呈剂量依赖性,当两者联合用药时,两者呈协同增效抗肿瘤作用,随着两者浓度的增加抑制率逐渐增强,对HepG-2细胞的最大抑制率可达84.2%。     

茶多酚对鼠胎儿成纤维细胞凋亡的影响

为探究茶多酚(Tea polyphenols,TP)对体外培养鼠胎儿成纤维细胞(Mouse embryonic fibrolast,MEF)凋亡的影响。在MEF细胞培养液中添加质量浓度为0、10、40、70、100和150μg/mL的TP,分别培养24、48、72和96h,使用MTT法(3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐,噻唑蓝,MTT法)检测细胞活力;细胞培养72h,以RT-PCR检测B-细胞淋巴瘤/白血病-2原癌基因(B cell lymphoma leukemia-2,Bcl-2)、和Bcl相关的蛋白X(Bcl-as-sociated X protein,Bax)、半胱天冬酶-3(Caspase-3)的相对表达量。MTT结果表明:TP质量浓度为40μg/mL时细胞密度略高于其他组,但是没有显著差异(P0.05);质量浓度为100μg/mL时,对MEF的生长产生抑制作用(P0.05),细胞形态没有发生明显变化;当质量浓度为150μg/mL时对细胞生长抑制作用明显(P0.05),从形态观察细胞出现调亡;通过反转录结果表明,对Bax基因、Bcl-2基因和Caspase-3基因的分子转录水平没有影响(P0.05),表明质量浓度高于100μg/mL TP对MEF生长产生抑制作用,但对Bax基因、Bcl-2基因和Caspase-3转录分子机制无影响。     

金针菇子实体膳食纤维对4种肠道菌群体外生长的影响

以金针菇子实体为试验材料,研究其可溶性膳食纤维(SDF)与不溶性膳食纤维(IDF)对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色假丝酵母及保加利亚乳杆菌体外生长的影响。结果表明,金针菇可溶性膳食纤维对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色假丝酵母有显著的抑制作用,而对保加利亚乳杆菌有显著的促进作用,且其抑制或促进效果随着SDF添加量的增加而提高;金针菇不溶性膳食纤维对保加利亚乳杆菌有显著的促生长作用,与其添加量呈正相关,而对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的影响与其添加量有关。添加量为2.4 g/100 m L时,IDF对大肠杆菌和白色假丝酵母的抑制效果最佳,抑制率分别为6.68%和14.49%;添加量为0.6 g/100 m L时,IDF对金黄色葡萄球菌的抑制效果最佳,抑制率为3.50%。该研究结果将会为菌质膳食纤维保健食品的开发提供重要参考依据。     

蟛蜞菊对铜绿微囊藻生长抑制作用研究

研究了蟛蜞菊(Wedelia chinensis)水提液和粉末对铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)生长的抑制作用。结果表明,蟛蜞菊水提液与粉末对铜绿微囊藻生长均有明显的抑制效果。蟛蜞菊整株提取液的投加浓度大于1.0 g/L时,培养7 d时对铜绿微囊藻生长的抑制率可达到97.7%。蟛蜞菊粉末水提液的投加浓度大于1.0g/L时,培养6 d时对铜绿微囊藻生长的抑制率可达到100%。蟛蜞菊0.45μm滤膜过滤液的投加浓度大于1.0 g/L时,培养7 d时对铜绿微囊藻生长的抑制率可达到100%。直接投加蟛蜞菊粉末时,当其浓度大于1.0 g/L时,培养5 d后对铜绿微囊藻生长的抑制率可达到100%。在铜绿微囊藻生长受到抑制的同时,其叶绿素a及藻胆蛋白的含量也呈明显减少趋势。     

氨对悬浮培养幼仓鼠肾细胞(BHK-21)生长代谢的影响

【目的】研究在幼仓鼠肾细胞(BHK-21)悬浮培养过程中,不同浓度氨对其生长代谢的影响。【方法】用添加0,1.8,2.5,5.5,8.0和15.0 mmol/L氨的培养基培养BHK-21细胞,每隔12 h取样1次,用细胞计数仪进行细胞计数,测定细胞活力,采用AO/EB双染色法和Annexin V-FITC/PI流式细胞仪2种方法检测细胞的凋亡情况,同时测定细胞培养过程中葡萄糖、氨和乳酸浓度的变化。【结果】在BHK-21细胞连续培养过程中,当氨的添加浓度低于1.8 mmol/L时,其对细胞的生长几乎不产生抑制作用,细胞活性、细胞总数与对照组差异不显著,未出现细胞聚集成团现象;当氨添加浓度达到15.0 mmol/L时,BHK-21细胞直接进入死亡期;当氨的添加浓度为2.5~8.0 mmol/L时,氨对细胞生长的抑制作用由弱变强,这种抑制作用在细胞培养至24 h开始出现。另外,随着氨添加浓度的增加,葡萄糖的消耗量减少,细胞代谢产生的乳酸和氨降低。【结论】氨对悬浮培养的BHK-21细胞的生长和代谢有显著影响。     

红景天甙体外诱导人肝癌QGY-7703细胞凋亡研究

【目的】探讨红景天甙(Salidroside)体外诱导人肝癌QGY-7703细胞凋亡的作用及其可能的机制。【方法】以体外培养的人肝癌QGY-7703细胞作为研究对象,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测红景天甙对QGY-7703细胞生长的抑制作用,采用吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)荧光双染、琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术,分析红景天甙对QGY-7703细胞凋亡的诱导作用;采用Western blot免疫印迹法探讨红景天甙诱导QGY-7703细胞凋亡的可能机制。【结果】MTT比色法试验结果表明,0.01,0.1,1,10和100μg/mL红景天甙对QGY-7703细胞生长均有不同程度的抑制作用,细胞生长抑制率分别为13.2%,21.9%,31.4%,46.8%和60.9%,半数抑制质量浓度(IC50)为18.56μg/mL;用10μg/mL红景天甙处理QGY-7703细胞48 h,AO/EB荧光双染后,可观察到个别QGY-7703细胞呈现亮绿色或橘红色,表明细胞发生了凋亡;琼脂糖凝胶电泳结果显示,10μg/mL红景天甙作用QGY-7703细胞24,48和72 h均可导致细胞核内DNA产生有序断裂,形成DNA梯形带;流式细胞术试验结果表明,10μg/mL红景天甙的加入量为100和200μL时,QGY-7703细胞凋亡数分别为178和331个,相应的凋亡率分别为1.8%和3.5%,阴性对照组(10μg/mL红景天甙加入量为0μL)凋亡细胞数为105个,凋亡率仅为1.1%;Western blot免疫印迹分析结果表明,红景天甙下调了Bcl-2和PCNA蛋白的表达量,而使凋亡活化基因Bax与肿瘤抑制基因p53的蛋白表达量增高。【结论】红景天甙对体外培养的QGY-7703细胞具有明显的生长抑制作用和诱导凋亡作用,其诱导凋亡作用与Bcl-2家族成员、p53、Bax和PCNA基因调控有关。     

枯草杆菌发酵对何首乌抗氧化成分及肝癌细胞抗增殖作用的影响

[目的]探讨何首乌经枯草杆菌发酵后主要抗氧化成分及其对肝癌细胞抗增殖作用效果的变化,为进一步研究何首乌发酵炮制方法及开发何首乌产品提供科学参考.[方法]将生何首乌用枯草杆菌发酵处理后,测定生品和发酵品的游离型蒽醌、结合型蒽醌和总多酚含量等成分的变化,并对比何首乌生品和发酵品对肝癌细胞HepG2抗增殖作用的变化.[结果]何首乌生品和发酵品总游离型蒽醌含量分别为1.56和1.60 mg/g,总结合型蒽醌含量分别为1.24和0.79 mg/g,何首乌经枯草杆菌发酵后结合型蒽醌含量极显著下降(P<0.01,下同).何首乌生品和发酵品水提取液的总多酚含量分别为44.88和74.01 mg/g,乙醇提取液的总多酚含量分别为61.84和93.86 mg/g,何首乌经枯草杆菌发酵后总多酚含量极显著增加.0.025 g/L何首乌生品对肝癌细胞HepG2作用24 h后的细胞抑制率为4.2%,0.25 g/L何首乌生品对肝癌细胞HepG2作用72 h后的细胞抑制率为-11.1%(负值表示促进细胞生长),即随着何首乌生品浓度增加和作用时间延长,其对肝癌细胞生长的作用由抑制转变为促进.经枯草杆菌发酵后,0.025 g/L何首乌发酵品对肝癌细胞HepG2作用24 h后的细胞抑制率为9.9%,0.25 g/L何首乌发酵品对肝癌细胞HepG2作用72 h后的细胞抑制率为20.9%,即随着何首乌发酵品浓度增加和作用时间延长,其对肝癌细胞HepG2有明显的抗增殖效果.[结论]枯草杆菌发酵可降低何首乌的毒性,增强其对肝癌细胞HepG2的抗增殖作用,表明使用枯草杆菌发酵何首乌的炮制方法是一种安全有效的炮制减毒方法,对开发相应何首乌炮制品有重要意义.     

西兰苔叶黄酮体外抗癌活性的研究

[目的]探讨西兰苔叶黄酮粗提物（EOF）的抗癌机制。[方法]通过四甲基偶氮唑盐（MTT）试验检测EOF对细胞生长的抑制率,并用流式细胞仪采用Annexi-V/PI双染法进行细胞凋亡检测,以探讨西兰苔叶EOF对癌细胞增殖的抑制作用及其诱导的癌细胞凋亡机制。[结果]西兰苔叶EOF对SW480、HepG2、Hela和A549这4种细胞的生长均表现出抑制作用,抑制率随药物浓度的增加而增大,呈明显的量效关系,其50%抑制浓度（IC50）值分别为88.14、99.65、104.43、79.77μg/ml,对SW480细胞的作用最为明显。通过Annexi-V/PI双染法流式细胞仪测得其浓度为30、60、80、120、160μg/ml时,诱导的SW480细胞的早期凋亡率分别为12.74%、16.41%、19.61%、28.28%和50.66%。[结论]西兰苔叶EOF是通过抑制增殖和诱导细胞凋亡来发挥对肿瘤的治疗作用的。     

重楼水提物对肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响

目的 探讨重楼水提物对人肝癌HepG2细胞株增殖和凋亡的影响.方法 以体外培养的肝癌HepG2细胞为研究对象,MTT法检测重楼对肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪Annexin V/PI 双染法检测重楼对其凋亡的影响,ELISA法检测Bcl-2、Bax 蛋白表达的情况.结果 不同浓度重楼水提物能有效抑制HepG2细胞的增殖,且呈时间及浓度依赖性,作用效果在12 μg/ml时抑制效果最好（P〈0.01）.12 μg/ml重楼水提物作用HepG2细胞24 h、48 h后,结果表明HepG2随着重楼水提物作用时间的延长,细胞凋亡率增加,与阴性对照组相比,差异有统计学意义（P〈0.01）.12 μg/ml重楼水提物作用HepG2 细胞24 h后,Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达增加,与阴性对照组相比,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 重楼水提物能抑制HepG2细胞的体外增殖,抑制作用表现出时效关系,其机制可能与促进细胞凋亡、降低Bcl-2蛋白表达、增加Bax蛋白表达有关.     

纳米TiO_2对小球藻和新月菱形藻的毒性研究

研究了纳米Ti O2对小球藻(Chlorella sp.)和新月菱形藻(Nitzschia closterium)的毒性。15 d的试验结果表明,纳米Ti O2对2种微藻的毒性均随着纳米Ti O2浓度的增加而增强。但是,纳米Ti O2对2种微藻生长的抑制作用呈现一定差异性,当水中纳米Ti O2浓度低于9.0mg/L时,纳米Ti O2对小球藻生长产生的抑制作用强于新月菱形藻;当水中纳米Ti O2浓度高于12.0 mg/L时,纳米Ti O2对小球藻和新月菱形藻生长产生的抑制作用相近,生长相对抑制率均为40%左右。利用扫描电子显微镜观察了纳米Ti O2对小球藻藻细胞个体形态的影响,发现纳米Ti O2可以导致小球藻表面出现塌陷。     

碘对豌豆苗生长及其可食部分游离氨基酸和维生素C及纤维素含量的影响

为探索碘元素的生理效应，以豌豆苗为材料，研究了加碘溶液培养对其生长及品质的影响，结果表明，低浓度碘可促进豌豆苗生长，增加根系和菜苗长度，可食部分游离氨基酸总量和维生素C含量，并大幅度提高菜苗可食部分含碘量，而对纤维素含量无明显影响，碘质量浓度以1．0－1．5mg/L时效果最好；当质量浓度超过1．5mg/L时出现高碘毒害，品质间及加碘培养方式间存在显著性差异。     

生长调节剂与杀菌剂混用在富贵竹加工的研究

用富贵竹剥除叶片的茎干剪取做富贵竹塔的枝段为材料,设置3种植物生长调节剂 杀菌剂的3因子3水平正交试验9个处理组合,研究其对富贵竹植株修口效果、顶侧芽生长及生根的影响。结果表明,爱多收 瑞毒霉锰锌、IBA 甲基托布津2因子3水平间的差异均显著或极显著,B-1活力素 百菌清因子3水平间差异不显著;植株顶侧芽长度分别与生根数、根长、根鲜重呈极显著的正相关;最佳处理组合,出口美国为(0.3ml·L~(-1)爱多收 0.8g·L~(-1)瑞毒霉锰锌)24h (O.3ml·L~(-1)B-1活力素 1.0g·L~(-1)百菌清)3次 (30mg·L~(-1)IBA 1.0g·L~(-1)甲基托布津)12h;出口其他国家为(0.3ml·L~(-1)爱多收 0.8 g·L~(-1)瑞毒霉锰锌)48 h (0.3ml·L~(-1)B-1活力素 l.0 g·L~(-1)百菌清)3次 (30mg·L~(-1)IBA l.0 g·L~(-1)甲基托布津)12 h。     

不同培养基配方对防止土人参愈伤组织玻璃化作用的研究

[目的]研究不同培养基配方对防止土人参愈伤组织玻璃化的效果。[方法]以MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+蔗糖30g/L为基础培养基(对照组),将其配方作以下分组调整:①6-BA浓度减半;②添加活性炭(1 g/L);③Ca2+加倍;④NH4+减半;⑤采用2,4-D+KT代替6-BA;⑥联合②③④⑤,比较培养基变化对土人参愈伤组织玻璃化率的影响,并观察土人参愈伤组织悬浮培养细胞形态。[结果]与对照组相比,②～④组玻璃化率无显著差异(P>0.05);⑤组玻璃化率降至25%(P<0.05);⑥组玻璃化率降为0,同时⑥组悬浮细胞密度及活性均高于对照组。[结论]最佳培养基为改良MS(Ca2+浓度加倍,NH4+浓度减半)+2,4-D 2.0 mg/L+NAA 2.0 mg/L+KT 0.5 mg/L+活性炭1.0 g/L+蔗糖30 g/L,可在一定程度上防止土人参愈伤组织玻璃化的发生。     

雌激素对双齿围沙蚕性比、生长和卵母细胞发育的影响

将性未分化的双齿围沙蚕Perinereis aibuhitensis暴露在双酚A和17β-雌二醇两种雌激素下,研究了雌激素对双齿围沙蚕雌雄比例、个体生长、死亡率及卵母细胞发育的影响。结果表明,两种雌激素各浓度下的试验组沙蚕均为雌性。与对照组相比,双酚A浓度为50、100μg/L时,对沙蚕有极显著的促生长作用（P〈0.01）;浓度为10、150μg/L时,对沙蚕的促生长作用显著（P〈0.05）;浓度为200μg/L时,对沙蚕的促生长作用不明显;沙蚕的死亡率随双酚A浓度的提高而增加。与对照组相比,当17-β雌二醇浓度为1、5、15 mg/L时,对沙蚕有极显著的促生长作用（P〈0.01）;浓度为30 mg/L时,对沙蚕的促生长作用显著（P〈0.05）;浓度为45 mg/L时,对沙蚕的促生长作用不明显;随着浓度的提高,沙蚕的死亡率明显加大。双酚A浓度为10~150μg/L、17β-雌二醇浓度为1~30 mg/L时,对沙蚕卵母细胞的生长有明显的促进作用（P〈0.01）;而双酚A浓度为200μg/L（P〈0.05）和17β-雌二醇浓度为45 mg/L（P〈0.01）时对卵母细胞的生长有抑制作用。     

多花黑麦草4个品种化感抑草作用差异的研究

采取琼脂混粉法，研究多花黑麦草4个品种地下部分根和地上部分茎叶粉末添加物对受体马唐和猪殃殃的化感作用。结果表明，多花黑麦草4个品种对猪殃殃和马唐幼苗生长存在化感抑制作用，但4个品种间的化感作用大小各异，以Maximus根和Barmega茎叶的粉末添加物对受体马唐幼苗的抑制作用最强。以Barmega根和Maximus、Jumbo茎叶的粉末添加物对受体猪殃殃幼苗的抑制作用最强。4个品种根的粉末添加物对受体苗高的抑制作用要强于茎叶粉末添加物，对受体根长的抑制作用则是茎叶粉末添加物强于根的粉末添加物。Barmega在添加量为2．0g·L-1时，供体根和茎叶对受体马唐苗高的抑制率分别为60．75％和46．76％。4个品种在5种添加量下对猪殃殃和马唐的苗高和根长均有一定程度的抑制作用，总体趋势为对根的抑制作用要强于茎叶，随着添加量的增加，抑制作用逐渐增强，但1．5g·L-1。和2．0g·L-1添加量间差异不显著，0．50、0．75和1．0g·L-1间差异显著。     

维生素B1和B12对米氏凯伦藻增殖的影响

[目的]研究维生素B1、B12在米氏凯伦藻有毒赤潮爆发增殖过程中的作用。[方法]设置7个不同浓度的维生素B1与B12的K培养基培养米氏凯伦藻,通过定期浮游计数框计数与活体叶绿素荧光值的测定,研究不同浓度维生素B1、B12下,米氏凯伦藻细胞密度与叶绿素荧光值的变化情况。[结果]在维生素B1浓度低于0.312 5×10-5g/L时,对米氏凯伦藻细胞密度与单位细胞叶绿素荧光值有显著影响（P〈0.05）;维生素B12浓度变化对米氏凯伦藻细胞密度与单位细胞叶绿素荧光值影响不显著（P〉0.05）。[结论]维生素B1对米氏凯伦藻细胞增殖有显著影响,维生素B12对米氏凯伦藻种群增殖的影响不显著。     

湘西龙山百合对小鼠B-16黑色素瘤细胞黑色素含量、酪氨酸酶活性的影响

目的 观察不同浓度湘西龙山百合提取液对小鼠B-16细胞细胞活力、黑色素含量、酪氨酸酶活性的影响。方法 选用同一传代小鼠B-16黑色素瘤细胞并分组,分别加入不同浓度百合提取液、维生素C二种溶液作用3 d后,用MTT法测定B-16细胞活力;用Maeda等的方法测定B-16细胞酪氨酸酶活性;用Victoria等的方法测定B-16细胞黑色素含量。结果 湘西龙山百合提取液对小鼠B-16细胞的酪氨酸酶活性、黑色素合成的抑制作用明显强于维生素C,组间差异有统计学意义（P<0.05）,且其抑制作用随浓度的增加而增加;同时湘西龙山百合提取液其细胞毒性作用同样强于维生素C,组间差异有统计学意义（P<0.05）。结论 百合提取液对B-16细胞的生长、酪氨酸酶活性和黑色素合成的抑制作用强于维生素C,其抑制作用与浓度呈正相关。     

pH和琼脂糖浓度对大白菜不定芽和胚状体诱导的影响

以1039,B-17和637大白菜自交系为试材,研究了培养基中不同pH和琼脂糖质量浓度对胚状体诱导的效应。结果表明,当pH值为6.0~6.2,琼脂糖质量浓度为8~9 g/mL时,可以诱导"1039"大白菜试材产生胚状体,其诱导频率约1.0%;当pH值为5.7~5.8,琼脂糖质量浓度为8~10 g/mL时,3个大白菜试材中均有不定芽产生,并且随着琼脂糖浓度的增加,不定芽的数量增加。不同的大白菜试材间诱导频率没有明显差异,均为3.0%。     

大蒜对铜绿微囊藻的化感抑制作用

通过人工培养箱培养的方法,利用分光光度计、酶标仪及相关试剂盒等分别测定铜绿微囊藻在不同浓度(0,0.2,0.4,0.8,1.6,3.2,6.4 g/L)大蒜作用下的生理生化指标变化情况,以期探讨大蒜对铜绿微囊藻的抑制机理。结果表明:大蒜对铜绿微囊藻表现为低促高抑的作用效果,与对照相比,0.2 g/L的大蒜浓度对铜绿微囊藻生长反而略有促进作用;6.4 g/L浓度的大蒜则可有效地抑制铜绿微囊藻的生长,而且随着作用时间的延长其抑制效果愈加明显,在第96小时时铜绿微囊藻的生长抑制率可达53.42%;另外,高浓度大蒜能有效抑制铜绿微囊藻的叶绿素a含量并能影响铜绿微囊藻藻胆蛋白各组分的构成及可溶性蛋白的含量。由此可以得出,一定浓度的大蒜对铜绿微囊藻具有化感抑制作用,且高浓度下的大蒜能通过影响铜绿微囊藻叶绿素a的含量来影响其光合作用,最终导致藻类繁殖受阻。可见,藻类叶绿素a(即PSⅡ)是大蒜抑制铜绿微囊藻生长繁殖的一个作用位点。     

钾元素对苹果树腐烂病菌生长发育的影响

本研究在室内测试了不同浓度钾元素对苹果树腐烂病菌生长速率、菌丝形态、菌丝干重、分生孢子萌发及致病力的影响,旨在为寻找更有效的抗腐烂病菌靶标提供理论基础。在基础培养基PDA和PDB中分别添加不同量KCl粉剂,配制成含不同浓度钾的培养基,通过生长速率法、菌丝干重法、孢子萌发法和伤口接种法研究钾元素对腐烂病菌的影响。结果表明：纯钾浓度低于9.04 g/L时能促进腐烂病菌菌丝生长,当浓度高于9.04g/L时则抑制菌丝生长,同时,该浓度下的分生孢子孢子萌发率也出现显著下降。当纯钾浓度达到12.82 g/L时,腐烂病菌菌丝生长、孢子萌发和致病性都受到显著抑制;从19.16 g/L高浓度钾处理菌株接种的病果上分离获得的腐烂病菌菌株KVm470,其致病力与野生型Vm470相比显著下降。因此,树体中保持合理浓度的钾含量除了提高树体抗病性之外,还能够显著抑制腐烂病菌的侵染和扩展,而且,钾元素对腐烂病菌致病力的影响具有一定程度的可遗传性。