东方百合快繁培养基优化与脱毒技术研究

摘 要：【研究目的】为实现百合种球的国产化,繁育大量的优质种球,笔者以东方百合的西伯利亚和索邦品种为材料,研究东方百合茎尖诱导、继代增殖和生根的最佳培养基,并比较不同的组织培养方法的脱毒效果。【方法】设置不同的激素浓度梯度筛选东方百合茎尖诱导、继代增殖和生根的最佳培养基,并比较新鲜百合球茎尖培养、冷藏处理百合球的茎尖培养、鳞片培养、鳞片扦插苗茎尖培养和试管苗茎尖培养等5种组织培养方法的脱毒效果。【结果】试验结果表明,百合茎尖诱导的适宜培养基为MS + 2.0mg/L 6-BA + 0.1mg/L NAA,芽形成的适宜培养基为MS + 1.0mg/L 6-BA + 0.5 mg/L NAA,苗形成的适宜培养基为MS + 1.0mg/L 6-BA + 0.08mg/L NAA,生根的适宜培养基为1/2MS + 0.4mg/L NAA + 4%AC (Active Charcoal)。病毒检测表明试管苗茎尖培养的脱毒效果最好,但成活率较低;冷藏处理百合球的茎尖培养的脱毒效果也较好且成活率较高。【结论】筛选的东方百合各阶段的培养基配方能满足东方百合快速扩繁的技术要求,茎尖培养在东方百合依然是较好的脱毒方法。     

滁菊组织培养脱病毒技术研究

采用改良热处理结合茎尖分生组织培养的方法,建立滁菊组培脱毒快繁技术体系.研究结果表明,滁菊茎段诱导的最佳培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA;茎尖增殖的最佳培养基为MS+1.0mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA;壮苗生根的最佳培养基为1/2MS+0.1mg/L NAA.接种脱毒结果为,脱毒率＞83%,茎尖成活率＞42%.     

罗汉果组培苗二次脱毒技术研究

对罗汉果(Siraitia grosvenorii)组培苗采用热处理和剥取茎尖技术进行二次脱毒处理,脱毒效果采用间接酶联免疫法和电镜观察法进行检测.结果表明,适合材料热处理的培养基为MS+0.3 mg/L 6-BA+NAA 0.1 mg/L+0.1 mg/L IBA,热处理材料的顶芽呈锥形,利于剥取茎尖;茎尖分化最佳培养基为MS+0.3 mg/L 6-BA +0.05 mg/L NAA+0.1 mg/L GA3;38.5℃热处理10d剥取长1.0～1.5 mm的茎尖进行二次脱毒培养,存活率为80.00％,脱毒率为100.00％.     

皖贝母茎尖脱毒组织培养技术研究

应用ELISA方法对茎尖培养和热处理结合茎尖培养脱毒生产无病毒皖贝母种苗效果进行研究,结果表明,茎尖培养〈0.5 mm的茎尖无法成活;1～2 mm茎尖虽然成活率高但没有脱毒效果;0.8～1 mm茎尖的脱毒率为20%;0.5～0.8 mm的茎尖脱毒率为40%;0.3～0.5 mm茎尖脱毒率为60%。0.8～1.0 mm茎尖经50±1℃热处理20 min脱毒效果最好,脱毒率达100%;愈伤组织和不定芽的诱导需要不同的激素配比,诱导愈伤组织的合适培养基为：MS＋6-BA 0.5 mg/L＋NAA 4 mg/L,诱导不定芽并能一次成苗的合适培养基为：MS＋2,4-D 1.0 mg/L＋6-BA 1.0 mg/L＋NAA 0.2 mg/L,平均每个外植体产生2～3个不定芽。     

宜兴百合脱毒技术

1997～2000年以宜兴百合为试材，对3种脱毒方法(茎尖培养、热处理结合茎尖培养、花药培养)进行研究。结果表明，珠芽经(50±1)℃热水处理40min，培养30d后，切取0.8～1.0mm茎尖培养的脱毒效果最好，脱毒率达100%；(38±1)℃热空气处理后切取茎尖培养也能提高脱毒效果。只有通过病毒鉴定的试管苗，方能用于生产。     

提高百合茎尖组织培养脱毒效率研究

以带有CMV病毒的东方百合栽培品种Siberia鳞茎为外植体,常规消毒后在MS BA 1.0 mg/L NAA 0.5 mg/L培养基中培养成苗,热处理后剥取较大的茎尖(0.4～0.6 mm)进行培养,待茎尖长成植株后再次剥取较大茎尖进行二次脱毒,经检测脱毒率可达80%.研究结果表明,茎尖二次脱毒培养方法简单,易于操作,脱毒率高.     

不同培养基配方对东方百合茎尖直接诱导小鳞茎的影响

为了建立东方百合茎尖组培脱毒体系,筛选出茎尖直接再生小鳞茎适宜培养基配方,指导百合种球脱毒生产。试验采用正交设计,以东方百合杂种系品种西伯利亚茎尖为试验材料,对培养基激素种类和糖浓度组合对茎尖接种成活率和小鳞茎诱导率的影响进行了探讨。结果表明,处理J5培养基(MS+6-BA 1 mg/L+IBA 0.2 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂6 g/L),西伯利亚茎尖成活率为70%,小鳞茎诱导率为85.51%,显著高于其它处理,为试验条件下的最佳培养基配方。     

百合病毒脱除技术研究

为了探究生产脱毒百合种球的最佳途径,通过对5种百合进行茎尖切块大小、热处理方式以及病毒唑浓度三方面的试验,探茎尖培养、茎尖培养结合热处理、茎尖培养结合病毒唑、茎尖培养加热处理结合病毒唑4种方法对LVX,CMV,LSV 3种病毒的脱除效果。结果显示:综合考虑存活率和脱毒率,单纯的茎尖培养难以脱除病毒,3种方法结合脱毒的效果最好。即茎尖培养(0.5～0.8mm)加热处理(变温热处理)结合病毒唑(10mg/L)的方法脱除病毒的效果最好。     

大蒜茎尖培养脱毒及增产效果的研究

采用山东栽培的6个大蒜品种进行茎尖培养脱毒。结果表明,最佳诱芽培养基为B_5+BA3mg/L+NAA0.1mg/L+Ad30mg/L+KT0.5mg/L,最佳诱根培养基为1/2 B_5+BA0.01mg/L+NAA0.05mg/L。脱毒大蒜的蒜薹比对照增产58～175％,蒜头增产23～114％。本文还对影响茎尖培养成苗的因素,鳞茎热处理后茎尖培养的脱毒效果,脱毒大蒜无性世代的产量增长及脱毒大蒜增产的生产学基础进行了讨论。     

卷丹百合3种主要病毒脱毒方法研究

为了获得无病毒的优质种苗,以感染CMV、LSV和LRV的卷丹百合珠芽为试材,采用热处理、茎尖培养结合添加病毒唑的方法,运用RT-PCR方法检测病毒,探讨最适宜的脱毒方法。结果表明:对于CMV,仅通过茎尖培养,剥取0.1~0.3 mm大小茎尖培养脱毒率可达100%,但成活率仅为45%;对于LSV,38℃高温热处理20 d后,剥取0.1~0.3 mm茎尖培养,脱毒效果最佳,可达90%以上;对于LRV,38℃高温热处理20 d后,剥取0.4~0.6 mm茎尖培养,添加10 mg/L病毒唑可使脱毒率达90%以上。综合3种病毒的脱毒率和成活率,以38℃高温热处理20 d后,剥取0.4~0.6 mm茎尖培养,添加10 mg/L病毒唑,成活率较高,脱毒效果最好。     

紫薯脱毒快繁技术研究

为促进紫薯优良品种脱毒种苗的推广应用,提高紫薯产量和品质,以济薯18和济黑1号的优良种薯芽为外植体建立无菌体系,采用正交试验设计,研究了不同培养基、6苄氨基嘌呤(6-BA)、萘乙酸(NAA)及蔗糖浓度对紫薯苗诱导的影响。获得苗诱导的最佳培养基后,再从无菌材料上剥取茎尖进行分生组织脱毒培养。结果表明:这种方法脱毒难度低,脱毒效果好,脱毒率达100%;济薯18茎尖脱毒培养的最佳培养基为:1/2MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖20g/L;济黑1号最佳培养基为:MS、1/2MS或1/4MS+6-BA1mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖20g/L。     

香水百合脱毒技术研究

通过微茎尖培养脱毒方法、热处理脱毒方法和化学药剂脱毒等方法对香水百合罗宾娜种球进行脱毒处理,并将处理百合进行培养,通过酶联免疫吸附法对处理百合继带苗进行检测。结果表明:当香水百合用32℃的高温处理4周后,切取0.3~0.6 mm微茎尖培养的处理、切取0.3~0.6 mm微茎尖培养在含有浓度为15 mg/L病毒唑上的处理,这两种组合法香水百合罗宾娜存活率和黄瓜花叶病毒脱毒效果达到了最佳。     

百合脱毒种苗工厂化快繁技术研究

以带有CMV病毒的亚洲百合栽培品种Elle的无菌植株为试验材料，进行直接剥取茎尖培养、茎尖培养与病毒唑处理相结合、热处理与茎尖培养相结合三种方法脱毒效率和茎尖成苗率的差异比较，结果表明，加热处理与茎尖培养相结合的方法是最有效的百合脱毒方法。对脱毒材料快速繁殖条件优化的研究表明，生长调节剂组合对百合愈伤组织分化和小鳞茎增殖有较大的影响，MS BA1．0mg／L NAA0．1mg/L最适宜愈伤组织分化；用MS BA0．5～1．0mg/L NAA0．2～0．5mg／L处理，小鳞茎增殖率最高；适当提高蔗糖浓度对鳞茎形成有促进作用，以8％～10％的效果较佳。     

草莓试管内诱导匍匐茎和高温处理结合茎尖培养脱毒技术研究

【目的】获得可用于生产的无病毒草莓种苗。【方法】在试管内对深山草莓花瓣愈伤组织分化产生的优良变异新品种的试管苗进行匍匐茎诱导,并采取试管内高温处理结合茎尖培养对该品种进行脱毒研究,应用均匀设计法对各步骤主要影响因子进行优化筛选。【结果】该草莓新品种试管苗匍匐茎诱导的适宜培养基为:LS+6-BA1.00mg/L+GA31.90mg/L+KT1.00mg/L,其诱导率为99.5%以上;将含有匍匐茎的试管苗在试管内于56℃条件下培养85d后,切取1mm的茎尖在培养基MS+6-BA0.50mg/L+NAA0.20mg/L中进行茎尖愈伤组织诱导,然后将茎尖愈伤组织转接到培养基MS+6-BA1.00mg/L+NAA0.05mg/L中进行愈伤组织芽苗再分化培养,对再生芽苗进行病毒检测,脱毒率为100%。【结论】利用试管内高温处理结合茎尖脱毒的方法可以完全脱除草莓病毒,从而建立了草莓脱毒体系。     

马铃薯茎尖组织培养方法优化研究

提高马铃薯茎尖组织培养的成苗率和脱毒率。以克新1号为材料,研究了不同茎尖大小、不同浓度和配比的激素对马铃薯茎尖诱导的效果。结果表明:茎尖越小,脱毒率越高,但成活率和成苗率越低,以叶原基数为2的茎尖脱毒效果最好。通过对6种培养基的对比,筛选出MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L+GA 0.1 mg/L为茎尖诱导分化成苗的最优培养基。     

茎尖培养及热处理技术在百合脱毒中的应用研究

针对目前百合花卉栽培存在病毒侵害、品种退化严重的状况,以东方百合"Tiber"品种经过初代培养的无菌苗为材料,采用茎尖培养结合热处理的脱毒方法进行脱毒试验,并在试验过程中采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测法对百合黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)和百合潜隐病毒(Lilysymptomless virus,LSV)进行检测。证明了茎尖培养结合热处理的脱毒技术的可行性。试验结果表明,对于CMV的脱毒,仅用茎尖培养即可达到很好的脱毒效果。对于LSV的脱毒,茎尖培养结合30 min热处理的脱毒效果优于普通组织培养和茎尖培养。     

唐昌蒲茎尖脱毒的研究

1987年～1988年作者以唐昌蒲的茎尖(0.2～5 mm)为外植体,接种于MS+BAl mg/L+NAA1 mg/L脱分化培养基上,诱导其产生愈伤组织。一个月后,将愈伤组织接到N_6+BA0.5mg/L+NAA1 mg/L+0.4～0.6％活性炭的再分化培养基上诱导其生根、成苗。所得试管苗经鉴定脱毒率可达70.8％,其脱毒率大小与接种的茎尖大小有直接关系,茎尖越小,脱毒率越高。茎尖大小与试管苗的成苗途经、成苗率、丛生苗率有一定关系。     

甜樱桃茎尖培养脱毒研究

以甜樱桃(PrunusaviumL.)嫩梢芽为外植体进行了茎尖组培脱毒研究,筛选出的增殖培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L+GA30.5mg/L+AgNO35.0～10.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L,丛生芽增殖数达到6个以上;确定良好的生根培养基为1/2MS+IBA0.7mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖20g/L+琼脂7g/L,生根率达75.1%,移栽成活率可达80.5%以上;利用生物学方法对甜樱桃试管苗进行了初步病毒鉴定,结果表明,0.5～0.8mm茎尖培养对苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)和李矮缩病毒(PDA)的脱毒率达39.4%和48.1%;0.5mm以下茎尖培养对ACLSV和PDA的脱毒率达75.8%和78.6%,证明甜樱桃试管苗0.5mm以下的小茎尖培养能有效脱除ACLSV和PDA病毒。     

状元红葡萄的脱毒与快繁技术研究

以状元红葡萄为材料,选取秋季副梢的茎尖为外植体, 通过直接诱导丛生芽进行快速繁殖,同时运用热处理和茎尖培养相结合诱导葡萄脱毒苗。脱毒技术研究结果表明,1/2MS培养基比MS培养基的芽诱导率高。适宜的启动培养基为1/2MS+20 mg·L-1 6\|BA+01 mg·L-1 IBA,诱导效果最好。无根苗接种于1/2MS+05 mg·L-1 IBA+02 mg·L-1 NAA的培养基中,生根快,不定根发育良好,利于移栽。其中热处理时间以10 d为宜,这样有利于无根苗的生长和脱毒;经过热处理的无根苗,脱毒率达100%。     

百合车前草花叶病毒的脱毒组培技术

为百合种苗快速繁殖提供参考,以带有车前草花叶病毒的罗宾娜为材料,采用组培苗与栽培种球2种形式,通过茎尖培养与热处理+茎尖培养2种脱毒方式处理,以获得最佳组培苗的处理方式。结果表明:以MS+6-BA 1.0毫克/升+NAA 0.5毫克/升+2,4-D 0.1毫克/升+蔗糖30克/升+琼脂7克/升+活性炭1克/升,酸碱度5.8为茎尖培养基,能获得百合脱毒的再生植株。