牛双芽巴贝斯虫巢式PCR诊断方法的建立

[目的与方法]根据Genbank上登陆的双芽巴贝斯虫HSP20基因设计两对引物, SHSP-P1与SHSP-P2和SHSP-P3与 SHSP-P4,以其建立牛双芽巴贝斯虫巢式PCR快速检测方法.[结果]第一次、第二次扩增的退火温度均为57℃,分别扩增出约631和409 bp的条带,与预期的大小相符,而作为对照样本的牛巴贝斯虫、牛环形泰勒虫基因组DNA均无此扩增目的条带出现.将感染双芽巴贝斯虫的全血基因组DNA做10倍递减稀释到106倍扩增时,巢式PCR还能见到目的条带,其灵敏度相当于4.6 pg/mL全血基因组DNA.在对50份疫区牛全血DNA样本检测中,阳性检出率分别为22; (11/50).[结论]所建立的牛双芽巴贝斯虫巢式PCR方法准确、敏感、特异,可以用于牛双芽巴贝斯虫病的快速检测和小范围的流行病学调查,具有重要的临床意义.     

牛双芽巴贝斯虫GST-HSP20(exon)融合蛋白间接ELISA检测方法的建立

[目的与方法]以纯化的牛双芽巴贝斯虫GST-HSP20(exons) 融合蛋白作为检测抗原,通过优化ELISA反应条件,建立了检测牛双芽巴贝斯虫血清特异性抗体的新型间接ELISA方法.[结果]方阵试验确定的GST-HSP20抗原的最适包被浓度为5 μg/mL,血清最佳稀释倍数为40倍,ELISA阳性反应的临界值为OD450≥0.292,批内和批间重复试验的变异系数均小于10;.HSP20间接ELISA方法能排除GST的干扰,与其它梨形虫病无交叉反应,与巢式PCR检测方法的阳性符合率为96;.[结论]所建立的ELSIA检测法重复性好、特异性强、灵敏度高.这是国内首次利用重组蛋白建立的牛双芽巴贝斯病血清学诊断方法,为大规模地进行牛巴贝斯虫病的流行病学调查和血清学诊断提供有效的技术手段.     

牛双芽巴贝斯虫热休克蛋白基因外显子的克隆与原核表达

从患牛焦虫病的牛全血样品中抽提总RNA,通过设计特异性引物,经RT-PCR扩增牛双芽巴贝斯虫热休克蛋白20（HSP20）基因的外显子,将其插入pMD18-T载体进行测序、鉴定,构建原核表达质粒载体PGEX-4T-2-HSP20（exon）。试验结果显示牛双芽巴贝斯虫HSP20基因外显子已被成功克隆。该基因的外显子序列与国际标准株HSP20外显子的序列存在两个碱基的突变,导致其编码的蛋白质出现了一个氨基酸的变异。测序结果还表明,克隆出的牛双芽巴贝斯虫HSP20基因外显子已正向插入原核质粒表达载体PGEX-4T-2,成功构建了PGEX-4T-2-HSP20（exon）表达载体,并在大肠杆菌BL21（DE3）中的得到表达。     

驽巴贝斯虫PCR检测方法的建立及应用

根据驽巴贝斯虫BC-48基因序列,设计并合成1对特异性引物,建立了驽巴贝斯虫PCR检测方法。试验扩增出610 bp的基因片段,其序列与GenBank上驽巴贝斯虫BC-48基因同源性为96.7%。而对新孢子虫、弓形虫、马巴贝斯虫的基因组DNA没有扩增带出现。对驽巴贝斯虫基因组DNA的最小检测量为2.812 fg/μL。通过对35份临床样品的检测,阳性率为20%。同时与血液涂片染色镜检进行了比较,结果表明,PCR检测方法准确、敏感、特异。     

牛双芽巴贝斯虫rap-1基因的克隆与序列分析

对牛双芽巴贝斯虫(Babesia bigemina)潜在药物靶标Rap-1的基因进行克隆与序列分析.以兰州株牛双芽巴贝斯虫基因组为模板,经PCR扩增获得了rap -1基因,将该基因克隆到pGEM-T Easy Vector上,对重组质粒进行PCR扩增,对目的基因进行酶切鉴定及序列测定分析.结果表明,rap -1基因长度为846 bp,同源性分析结果显示,克隆序列与GenBank收录的巴西株牛双芽巴贝斯虫的核苷酸序列同源性为99.74％,说明兰州株牛双芽巴贝斯虫的rap-1与GenBank公布的参考基因具有高度同源性,rap-1基因具有很高的保守性.     

牛双芽巴贝斯虫新疆株HSP20基因的克隆和真核表达质粒的构建

通过设计牛双芽巴贝斯虫热休克蛋白HSP20基因序列的特异性引物,采用 PCR方法从疑似"牛焦虫病"的患牛全血基因组中扩增得到699 bp的HSP20基因,将其连入pMD18-T测序、鉴定,再将验证的699 bp的HSP20基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建真核载体PCDNA3.1-HSP20.经再次测序、鉴定后,尾静脉注射小白鼠进行HSP20基因的瞬时表达,取其肝脏提取总 RNA,经RT-PCR方法扩增出一条534 bp的目的条带,表明真核表达质粒构建成功.     

牛巴贝斯虫病及其防治措施

<正>牛巴贝斯虫病是牛被双芽巴贝斯虫等病原感染后引起的一种急性发作的血液寄生虫病,导致病牛出现贫血、高热、黄疸、血红蛋白尿等症状。以下介绍牛巴贝斯虫病的感染特点、流行病学、临床症状及防治措施,供养殖户参考。一、巴贝斯虫病感染特点巴贝斯虫有多个种类,其中我国已报道可感染牛的有3种,分别是双芽巴贝斯虫、牛巴贝斯虫和卵形巴贝斯虫,它们都有多形性的特点,且虫体大小不一。双芽巴贝斯虫体长2.8～6微米,呈梨籽形、椭圆形等形态,主要寄生在红细胞内,     

牛双芽巴贝斯虫rap-1蛋白的真核表达

以846 bp的牛双芽巴贝斯虫兰州株潜在药物靶标pGEM-T-rap-1质粒为模板,选择真核表达载体GFP,构建真核表达质粒.采用脂质体转染法,将质粒转染绵羊成纤维细胞,通过G418筛选,筛选阳性克隆.结果显示牛双芽巴贝斯虫rap-1蛋白在绵羊成纤维细胞内成功表达.     

牛焦虫病的防治

牛焦虫病是指由双芽焦虫和巴贝斯焦虫引起,以高热、贫血与血红蛋白尿为特征的一种急性季节性寄生虫病。双芽焦虫多由突尾方头蜱和有距方头蜱传播,本病一年可数次爆发,但以春、夏、秋三季为多。易感染2岁以下的牛,但症状不明显,易耐过     

牛血孢子虫病的防治

牛血孢子虫病又名焦虫病。血孢子虫病是由血孢子虫亚目的寄生虫（主要寄生于红细胞内）引起的牛许多疾病的通称。牛血孢子虫病主要包括泰勒虫病、牛双芽巴贝斯虫病、牛巴贝斯虫病和牛边虫病。1临床症状本病有明显的季节性,常呈地方性流行,多发于夏、秋季节和蜱类活跃地区。病牛以贫血、黄疽、血红蛋白尿为特征。     

青蒿(Artemisia annua L.)治疗牛双芽巴贝斯焦虫病的试验

前言牛双芽巴贝斯焦虫病的病原体是双芽巴贝斯焦虫(Babesia bigemina Smith etkKilborne)。本病在世界各地均有发生,是一种急性过程的季节性疾病,发病率高,死亡率大,自然死亡率通常在50％左右,严重病例死亡率可达50—90％,对于畜牧业的危害程度不亚于某些恶性传染病,严重地威胁着养牛事业的健康发展。目前,在我国牛的恶性传染病大部分被控制、消灭,然而此病仍在较大面积内流行。在尚无疫苗预防的情况下,寻找安全经济而又特效的治药物,乃是十分必要的。     

牛焦虫病的诊断与防治要点

<正>牛焦虫病是一种由牛蜱经吸血传播引起的血液寄生虫病,由牛巴贝斯焦虫或牛双芽巴贝斯焦虫引起,可感染水牛、黄牛、奶牛,主要寄生于牛红细胞中。由于牛蜱是传播该病的重要媒介,所以有蜱生存的环境和季节,主要是7~9月份是本病的高发期。病牛主要表现精神沉郁,食欲减退,反刍迟缓甚至停止,体温升高到40~41.5℃,常高热稽留难退,呼吸急促,心跳加快,     

二重PCR快速检测牛伊氏锥虫和牛巴贝斯虫的研究

根据伊氏锥虫ITS序列（FJ416612）和GenBank报道的牛巴贝斯虫棒状结合蛋白1序列（FJ588013）,设计合成2对特异性诊断引物,建立了牛伊氏锥虫和牛巴贝斯虫的二重PCR诊断方法。结果表明,建立的二重PCR诊断方法可扩增出牛伊氏锥虫和牛巴贝斯虫的特异性条带,大小分别为213bp和360bp,最低检出量分别为4．00pg和0．38pg。但对牛双芽巴贝斯虫、分歧巴贝斯虫、环形泰勒虫、附红细胞体、巴氏杆菌不敏感。用该二重PCR方法对95份水牛样品和134份奶牛样品进行检测,结果发现,水牛伊氏锥虫的感染率为13．7％（13／95）、牛巴贝斯虫的感染率为7．4％（7／95）,无混合感染;奶牛伊氏锥虫的感染率为3．7％（5／134）、牛巴贝斯虫的感染率为0（0／134）。说明该二重PCR方法具有敏感、快速、特异的特点,适用于牛伊氏锥虫和牛巴贝斯虫的流行病学调查。     

牛巴贝斯虫病诊治

牛巴贝斯虫病是由双芽巴贝斯虫和牛巴贝斯虫等在牛红细胞内寄生后引起的一种血液原虫病。常引起病牛的高热、贫血及黄疸等。本文将对牛巴贝斯虫病的病原、流行病学、临床症状、病理变化、诊断和治疗方面进行归纳和总结。     

水牛焦虫病的防治措施

<正>福安水牛是福建省畜禽地方良种之一,具有性情温顺、行动敏捷、适应性广、遗传性稳定等特性。福安水牛的役用、肉用和繁殖性能在中国水牛地方良种中表现十分突出。2016年1月16日,福安市溪潭镇某养殖户到市疫病预防控制中心报告病例,言其养殖场的部分水牛发生了一种以高热、红尿、黄疸和机体迅速消瘦为特征的疾病。后经确诊为水牛焦虫病,现把诊治过程介绍如下:1.流行特点(1)水牛焦虫病的主要病原体为牛双芽巴贝斯焦虫,寄生于牛     

牛巴贝斯原虫病的分析诊断和治控措施

正巴贝斯原虫病是指巴贝斯原虫属寄生虫寄生于红细胞内而引起的疾病,该病以蜱为传播媒介,可感染大部分家畜和野生动物,偶尔也感染人。本病严重制约养牛业发展,也可感染其他家畜如马、绵羊、山羊、猪和犬。寄生于牛的巴贝斯原虫主要有两种,即双芽巴贝斯原虫和牛巴贝斯原虫,备受关注。不同的巴贝斯原虫属寄生虫引发的巴贝斯原虫病具有许多共同特征,这些特征可应用于各种巴贝斯虫病的诊断。     

牛双芽焦虫病的防治

<正> 牛双芽焦虫病是由双芽焦虫寄生在牛红血球内而引起的一种呈急性经过的季节性原虫病,由于临床上患牛具有明显的红色尿液特征,因此该病又称血尿或红尿症。牛双芽焦虫病的传播媒介在我国为突尾方头蜱和有距方头蝉,根据方头蜱的活动特点,本病常以散发的形式出现,始发于5月,8～9月为发病高峰期,以后逐渐下降,冬季则很少发生。本病对养牛业的危害甚大,如牛发病后不及时采取特效的治疗措施即会导致大批牛染病死亡。     

牛环形泰勒虫病PCR诊断方法的建立及其应用研究

[目的]建立快速检测牛环形泰勒病的PCR诊断方法.[方法]根据牛环形泰勒虫裂殖子的表面抗原(Tams1)基因,设计一对特异性引物,以地方阳性病例提取的DNA为模板,用PCR扩增出目的条带,经克隆、测序分析后,通过优化反应体系,建立牛环形泰勒虫病的PCR检测方法,并对该方法的特异性、敏感性进行验证试验.[结果]测序结果表明,扩增的目的片段与已知基因序列相似性为99;;该方法检测与牛的其他血液原虫无交叉反应,其最低检出限量为1.6×102 copies/μL.应用所建立的PCR检测方法对新疆吐鲁番市周边疑似地区419份牛全血进行了检测,结果阳性率为52.3; (219/419),而血液涂片检出率为43.7;(183/419).[结论]建立的牛环形泰勒虫PCR快速诊断方法具有有一定的特异性和敏感性,可用于牛环形泰勒虫病的分子诊断和流行病学调查.     

牛巴贝斯虫病诊治

<正>该病过去又叫牛焦虫病,是由双芽巴贝斯虫、牛巴贝斯虫寄生在牛红细胞内引起的血液原虫病。临床特征为高热、溶血、贫血、黄疸、血红蛋白尿。改良品种和国外品种较当地品种多发,幼牛较成牛多发。幼牛患病时如果治疗及时康复快、死亡率低,成牛尤其是年老体弱牛病情较重、康复慢、死亡率高。该病的发生和流行必需有病原体、传播者(蜱)、易感动物3个条件同时     

奶牛焦虫病的防治方法

奶牛焦虫病也称作牛巴贝斯虫病,是由数种巴贝斯虫引起的一种需经硬蜱传播的牛的血液原虫病.牛巴贝斯虫的传播媒介是牛蜱.lI缶床上常出现血红蛋白尿,故又称红尿热.该病对牛的危害很大.各种牛均易感染.如果得不到及时治疗.死亡牢很高.