一种简化有效的普通烟草原生质体培养方法

用不同方法进行普通烟草叶肉细胞原生质体培养 ,在低温 ( 1 0℃ )预处理原生质体分离材料后 ,加厚双层培养基中的固相至固液相体积比为 4∶ 1～ 5∶ 1时 ,有利于愈伤组织的快速形成和植株再生     

4种基因型烟草叶肉原生质体培养的研究

以K326、云85、红大、G-28等普通烟草品种的叶片为起始材料进行原生质体培养的研究。结果表明,基因型对烟草叶肉原生质体的培养有明显影响作用,并对影响烟草叶肉原生质体的分离、培养和再生植株等环节的其它相关因素进行了研究和探索。     

油菜原生质体培养研究进展

从原生质体的分离纯化、原生质体培养基成分、原生质体培养方法及原生质体应用前景等方面介绍了油菜原生质体培养近１０年的研究进展，并提出了存在的问题。     

甘蓝型油菜原生质体培养和植株再生

从甘蓝型油菜试管苗下胚轴和幼叶分离的原生质体，在含２．４－Ｄ０．８ｍｇ／１，ＮＡＡ０．５ｍｇ／１，６－ＢＡ０．５ｍｇ／１的改良ＢＧ培养基中浅层液体和固体平板培养６天，分裂细胞为８％－２０％，至１５天形成３２细胞的细胞团。愈伤组织在含ＮＡＡ０．２ｍｇ／１，ＩＢＡ０．１ｍｇ／１，６－ＢＡ１．０ｍｇ／１的ＭＳ分化培养基上培养基上培养３－４周，产生不定芽，并在附加ＩＢＡ０．５ｍｇ／１，６－ＢＡ０．２ｍ...     

草莓原生质体的培养和植株再生

通过对已分离提纯的草莓原生质体的培养研究 ,比较得出以KM为培养基 ,以 0 .4mol L葡萄糖和 0 .1mol L蔗糖或仅以 0 .5mol L葡萄糖作碳源 ,采用低溶点琼脂糖包埋的培养方式 ,培养密度采用 1× 10 6个 mL ,原生质体出现分裂和小愈伤组织形成的时间都较早。以MS1 、MS2 、MS3 为培养基、采用分步诱导的方法 ,能顺利诱导产生新植株 ,并在MS培养基上生根良好     

玉米原生质体培养再生植株

将玉米自交系“330”成熟胚诱导的愈伤组织,在附加2mg/L2,4—D的MSB培养基上继代、筛选,产生了三种类型的愈伤组织。用结构疏松,生长迅速的Ⅱ型胚性愈伤组织分离原生质体,在KPR或N_6ap培养基中以1×10~5/ml密度进行液体浅层培养,植板率为5.6%—7.4%。采用分步分化法得到了正常的绿苗,并经过壮根,炼苗后移栽成活。     

籼稻原生质体游离培养及再生植株

籼稻(Oryza sativa L.)推广品种“秋桂矮11”成熟种胚在N6+2,4-D培养基上诱导选择胚性愈伤组织,然后转入N6+2,4-D及高浓度脯氨酸的液体培养基悬浮培养。继代近6个月后建成胚性细胞悬浮系.悬浮细胞通过酶解游离产生大量原生质体,经合适渗透压的KpR琼脂糖培养基包埋,在无哺育培养条件下,分裂频率为11.36％,细胞克隆转至N6分化培养基再生出完整绿色小植株,分化频率为9.4％。     

烟草叶肉原生质体再生植株的研究

烟草原生质体是以烟草叶片薄壁细胞为材料，在无菌条件下，用2％纤维素酶（Onozuka-R10)0.5%离析酶（Macerozyme R-10),0.2%葡聚糖硫酸钾，5mN氯化钙，1mM磷酸二氢钾，0．7M甘露醇，PH5．8；或0．75％纤维素酶（EA3 876），0．3％离析酶，0．3％葡聚糖硫酸钾，0．7M甘露醇，PH5．6的沸合酶液，降解细胞壁分离出来的，并在NT（提高了氯化钙，VB1含量和降低硫酸镁含量以及增添了烟酸和维生素B6）液体培养基中培养，2天后发生细胞壁再生，3－4天后出现再生细胞的第一次分裂，5－7天第二次分裂，14天后可见15－20个细胞组成的小细胞团，此时要改变碳源和降低渗透浓度，30－40天后形成40－50个细胞组成的细胞团，大的细胞团约达1毫米，转移至固体分化培养基，随后进一步分化出小苗，将具有4－5片叶片，3－4厘米高的小苗 转移到生根培养基，发育成完整的小植株。     

枣树原生质体培养及其植株再生

以无核小枣和鸡蛋刺两个刺品种的胚性悬浮细胞经酶获得的原生质体为材料，采用不同种类的培养基，不同含量的ＭＡＡ和ＺＴ激素组合及不同原生质体培养密度对两个枣品种的原生质体进行培养，以获得适宜的培养基种类，较佳ＮＡＡ和ＺＴ的激素组合及适宜的培养密度。     

中国李原生质体培养及植株再生

对中国李原生质体分离和培养的有关因素进行了研究。以悬浮培养物为材料,在适宜的酶解液中酶解１２ｈ,原生质体产量和活力分别达到３×１０＾７个／ｇ和９５％。以改良ＭＳ为基本培养基,在培养初期加２,４－Ｄ１．０ｍｇ／＝Ｌ,ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ,培养３０ｄ后将ＢＡ调至１．０ｍｇ／Ｌ,以０．５５ｍｏｌ／Ｌ葡萄糖调节渗透压,在２×１０＾５个／Ｌ的植板密度下液体浅层培养５０ｄ后形成了微愈伤组织。     

云南水稻品种原生质体培养研究

采用KPR和R2培养基进行水稻原生质体培养，日本晴、楚粳8号、云粳9号、大白谷和元江普通野生稻先后获得了原生质体培养的成功，除日本晴外，其余品种均为首次报道，品种间绿苗再生率有显著差异。日本晴最高，大白谷最低，同一品种不同的俞伤组织间，分化率有很大差异。有的愈伤组织极易分化出绿苗，有的不能再生出绿苗，说明分化前的预培养非常重要。N6分化培养基的再生绿苗率极显著地高于MS。配方为N6 葡萄糖20g/L 蔗糖30g/L IAA0.2mg/L 6-BA0.5mg/L Agarose-110g?L的培养基。分化率最高，按初次接种的愈伤组织块计，每块平均再生绿苗1.4苗,酶解原生质体量的多少,与愈伤组织在N6 1mg/L2,4-D的液体培养基中悬浮培养时间的长短有关,悬浮时间较长则易于获得较多的原生质体.日本晴的再生植株中,有两株多移栽到抽穗仅45d,有可能是极早良的变异株,有些植株的粒型和稃毛也有明显变异对鉴定和利用变异的植株具有现实意义.     

中国李原生质体培养及植株再生

对中国李（ＰｒｕｎｕｓｓａｌｉｃｉｎａＬｉｎｄｌ．）原生质体分离和培养的有关因素进行了研究。以悬浮培养物为材料,在适宜的酶解液中酶解１２ｈ,原生质体产量和活力分别达到３×１０７个／ｇ和９５％．以改良ＭＳ为基本培养基,在培养初期加２,４－Ｄ１．０ｍｇ／Ｌ,ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ,培养３０ｄ后将ＢＡ调至１．０ｍｇ／Ｌ,以０．５５ｍｏｌ／Ｌ葡萄糖调节渗透压,在２×１０５个／Ｌ的植板密度下液体浅层培养５０ｄ后形成了微愈伤组织。微愈伤组织转至固体培养基上继代培养,在分化培养基上分化出不定芽,在生根培养基上生根形成完整植株。     

甘蓝型油菜子叶原生质体培养再生植株

从早熟甘蓝型油菜品种６０１的子叶中游离出原生质体，采用液体浅层培养，获得持续分裂的细胞。培养基中的２，４－Ｄ浓度对刺激细胞分裂至关重要。形成的小愈伤组织必须继代培养（ＭＳ培养基补加２，４－Ｄ０．２ｍｇ／Ｌ，ｋｔ２ＭＧ／Ｌ）后，再转至ＭＳ分化培养基（补加ＮＡＡ０．０１ｍｇ／Ｌ，ＫＴ３ｍｇ／Ｌ）上，才能分化出芽。分化的芽在ＭＳ生根培养基（补加ＩＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ）上，可以形成完整植株。     

不结球白菜子叶原生质体培养再生植株

用 1 0g/ 10 0mL纤维素酶 (OnozukaR 10 ) ,0 1g/ 10 0mL果胶酶 (MecerozymeR 10 )及 10mmol/LCaCl2 ·2H2 O ,0 7mmol/LKH2 PO4 和 0 5mol/L甘露醇的混合酶液 ,从 14～ 18d苗龄的不结球白菜子叶上分离出高产率的原生质体。原生质体培养在KM8P1附加 2 ,4 D 0 5mg/L、 6 BA 0 2 5mg/L、NAA 0 5mg/L、葡萄糖 9 0g/ 10 0mL、蔗糖 1 0g/ 10 0mL、半乳糖0 0 3g/ 10 0mL液体培养基上 ,分裂旺盛。形成愈伤组织后经芽诱导和生根培养 ,获得了再生植株。     

水稻原生质体高效培养技术的研究

用１６个基因型水稻成熟胚在ＭＳ和Ｎ６培养基上筛选建成悬浮细胞系９个,原生质体再生植株３个。使用一步法或两步法较常规的分步法缩短建成悬浮细胞系时间２０～３０天。使用“三合一”培养基（即Ｎ６大量元素、ＭＳ微量元素和Ｂ５有机物等）和固液双相培养法较琼脂糖包埋法及液体浅层培养法显著提高原生质体培养的植板率。     

普通野生稻胚性细胞悬浮系的建立及原生质体再生植株

广西普通野生稻(Oryza rufipogon)2个品种的成熟种子经54±1℃温度处理5d打破休眠后,诱导产生出愈伤组织。挑选胚性愈伤组织置于液体培养基中振荡培养。经6个月继代培养,建立起胚性细胞悬浮系。其中1个品种(No.40)的悬浮细胞经酶解游离获得大量原生质体,用琼脂糖包埋培养,2周内分裂频率达21.4％。形成的小愈伤组织经增殖后在分化培养基上再生出绿色小植株。