分子生物学技术与临床兽医学

分子生物学作为一门新兴学科,代表了生命科学研究领域的前沿,新理论、新技术、新成果层出不穷.近几年,生物技术不断向深度和广度迅猛发展.它的发展与动物疫病的诊断、预防和治疗技术之间已无明显的界限,并显示出了不可替代的作用.生物技术已经不是一项单一的技术,而是一个综合的技术体系,尤其是在兽医临床上的应用、发展中,需要多种不同技术、学科和领域的相互渗透、相互配合.     

分子生物学技术在兽医上的应用

随着分子生物学的发展，分子生物学常见实验技术的应用日益广泛，其对畜牧兽医高层次的研究与发展以及临床疾病防治与诊断起着重要的作用。１限制性内切酶及其应用限制性内切酶ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｅｎ-ｄｏｎｕｃｌｅａｓｅ简称限制酶的发现和应用在基因工程和分子生物学的发展过程中起着举足轻重的作用。它和其它修饰酶是分子生物学家在ＤＮＡ操作过程中所使用的基本工具。由于这些酶的使用，使分子克隆方法不断创新，简化了分子克隆的操作，而且拓宽了它的研究领域。１．１限制性内切酶的发现及分析技术原理Ａｒｂｅｒ等１９６３根据…     

分子生物学技术在临床兽医学上的研究与应用

近年来,生物技术不断向深度和广度迅猛发展,其发展与动物疫病的诊断、预防和治疗技术之间已并无明显的界限,并且起了不可替代的作用：如转基因动物既能用于抗病育种,也能用于生产疫苗和药品;核酸疫苗具有预防和治疗的双重作用;单克隆抗体不但用于免疫诊断,也可用于被动免疫和导向药物治疗等。生物技术已经不是一项单一的技术,而是一个综合的技术体系,尤其是在兽医临床上的应用、发展中,需要多种不同技术、学科和领域的相互渗透、相互配合。     

分子生物学技术在弓形虫病诊断中应用的研究进展

综述了限制性片段长度多态性技术（RFLP）在刚地弓形虫虫株分类方面的应用情况,从PCR、DNA探针技术和基因重组技术方面介绍了用于检测弓形虫DNA的分子生物学技术的研究进展,叙述了编码弓形虫主要蛋白基因的克隆及其表达产物在ELISA诊断中的应用。     

PCR技术在兽医学中的应用

ＰＣＲ技术在兽医学中的应用李文刚，甘孟侯近２０年来，一系列新技术的诞生使分子生物学的发展日趋加快，如各种ＤＮＡ工具酶（限制性内切酶和ＤＮＡ连接酶）的使用；原核质粒及噬菌体载体用于克隆和产生大量特异性ＤＮＡ序列；ＤＮＡ序列分析技术及ＲＮＡ合成，首次报道...     

鸡贫血病毒国内分离株的酶切图谱多态性分析

用套式PCR 扩增了鸡贫血病毒(CAV)长度为687 bp 的特异片段,以Hae Ⅲ、Hinf Ⅰ、Hpa Ⅱ分别酶切,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分析了其限制性酶切片段的多态性。对几株国内外分离株的分析表明,TK5803和山东分离株SJ1、SJ2 应属于Todd 的限制性内切酶酶切图谱多态性分析法(RFLP)分类中的第2 组;吉林JL1 株和哈尔滨CL1 株相同,但与其他任何毒株均不相同,大连DL1 株也不同于任何现有毒株,因而都不能归属于Todd 划分的7 个小组;荷兰弱毒株与目前发现的所有毒株均不同,具有其特征性的酶切图谱。     

现代诊断技术在兽医学上的应用及其进展

1　免疫酶技术 (ＥＩＡ)ＥＩＡ是根据抗原 -抗体结合的特异性 ,以酶作标记物 ,酶对底物具高效催化作用的原理而设计 ,既可用于抗原的检查 ,也常用于血清抗体的检测。1 .1　酶联免疫吸附试验 (ＥＬＩＳＡ)ＥＬＩＳＡ是应用最广泛的免疫酶技术 ,包括间接法、夹心法、竞争法等。自ＶＯＬＬＥＲ和ＢＩＤＷＥＬＬ(1 975 )首先报道了应用间接ＥＬＩＳＡ方法检测病毒特异性抗体以来 ,ＥＬＩＳＡ方法已普遍应用于传染病的流行病学普查、抗体水平的评价以及疫苗质量的监控和标化等 ,迄今为止大多数动物病原体均已发展或报道了ＥＬＩＳＡ方法的研究与…     

PCR-SSCP技术应用研究进展

聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)是基于PCR的单链构象多态性分子标记技术.PCR-SSCP作为检测基因突变的方法,自创立以来,经历了自身发展和完善的过程.刚建立时是将同位素掺入PCR扩增物中,通过放射自显影来显示结果,这给该技术的推广造成一定的困难.随着DNA银染方法与PCR-SSCP结合,尤其是直接溴乙锭染色方法的应用,使得该方法大大简化,操作更为简单,局限性较小,实验条件要求不高,适合一般临床实验室使用,具有简便、快速、灵敏的特点.不但被用于检测基因点突变和短序列的缺失和插入,而且还可用于动物育种,微生物,寄生虫研究的多个领域.由于SSCP的突出的优点,近几年被大量地应用.     

标记辅助选择及其在动物育种中的应用

动物遗传标记的发展，到目前为止已经历了从形体特征到血液蛋白多态性，再到DNA多态性这样一个发展过程。20世纪70年代，限制性内切酶的发现及DNA重组技术的创立使DNA多态性成为一种新的标记形式，并逐步走向完善。DNA标记：即分子遗传标记技术的成熟使得畜禽数量性状图谱越来越系统化和完善，从而为畜禽改良提供了新的手段。     

紫花苜蓿PGIP同源基因克隆与序列核苷酸多态性分析

多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIP)是植物重要的防卫蛋白之一,了解PGIP基因的核苷酸序列是对其进行分子遗传学与分子生物学研究的前提与基础。本研究采用同源克隆法,从16个紫花苜蓿(Medicago sativa)品种的集群DNA中克隆了7个苜蓿PGIP基因的部分基因组编码序列,分别对应于蒺藜苜蓿(M. truncatula)7个不同的PGIP基因,并命名为MsPGIP5、MsPGIP6、MsPGIP7、MsPGIP8、MsPGIP9、MsPGIP10和MsPGIP11。其中,MsPGIP5、MsPGIP6、MsPGIP8、MsPGIP9和MsPGIP11的单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism,SNP)位点间的平均距离分别为20、74、34、423和21 bp,差异较大。对MsPGIP5、MsPGIP6、MsPGIP8和MsPGIP11进行荧光标记PCR单链构象多态性(FPCR-SSCP)分析,结果表明,其等位基因数目与PCR片段长度的比值分别为20、56、22和19 bp,变化趋势与这4个基因SNP位点间的平均距离基本一致。比较而言,在发现的7个苜蓿PGIP基因中,MsPGIP9序列高度保守,MsPGIP5和MsPGIP11的变异较大,而MsPGIP6与MsPGIP8的变异中等。     

家畜多位点DNA指纹的研究及应用

本文介绍了ＤＮＡ指纹的概念、遗传特性、分子基础和ＤＮＡ指纹的制备技术。概述了家畜ＤＮＡ指纹的研究概况和成果,研讨了ＤＮＡ指纹在家畜遗传育种中应用的前景和可能性。     

新浦东鸡DNA指纹的随机扩增多态分析

利用随机扩增多态DNA指纹分析技术,由12个随机引物中筛选出3个具有多型的引物对28只新浦东鸡的基因组DNA指纹进行研究.结果表明3个引物共扩增出27条DNA片段,多型条带24条,其多型频率为0.593;其中H05引物扩增出DNA片段7条,其多型频率为0.259,G04引物扩增出DNA片段11条,其多型频率为0.408;V15引物扩增出DNA片段9条,其多型频率为0.333,3个引物扩增的DNA片段长度为489～1940bp.各位点的片段共享度分别是0.856,0.716和0.674;杂合度为0.549,0.695和0.727;平均百分差异为0.144,0.284和0.326;平均百分差异均值为0.251.     

Pseudoterranova decipiens复合种的几个姊妹种种间线粒体nad1基因序列差异的研究

对来自世界各地的P．declplens复合种共6个姊妹种的线粒体（mtDNA）NADH脱氢酶亚单位Ⅰ基因（nad1）序列进行PCR扩增、克隆、测序和序列分析。结果显示，nad1基因序列种间差异为3．6％～15．0％，遗传差异性分析结果与ITS1、ITS2和cox1的基因序列遗传差异性分析结果基本上一致，nad1能提供准确的遗传标记，可用于P．decipiens复合种姊妹种的鉴定。这些结果有助于阐明P．declpiens复合种种间的遗传变异，为进一步的分子遗传学和分子诊断学研究奠定基础。     

原位PCR技术在兽医分子生物技术中的应用

本文阐述了原位PCR技术的原理、操作步骤及注意事项，原位PCR中非特异性问题及主要技术难点，原位PCR结果对照实验的目的和设计方法，不同原位检测技术的应用比较及其在兽医分子生物技术的应用和前景。对临床兽医分子水平的研究和诊断具有一定的指导作用，是兽医分子生物技术的重要研究内容。     

基因芯片在神经毒物学研究中的应用

基因芯片技术提供了一种能特异性测定信使RNA（mRNA）表达水平的工具，可用于研究一些和疾病相关的新的特定基因表达模式，把基因芯片作为研究神经毒物毒性作用分子机理的筛选工具是基因芯片技术在神经毒物学研究方面一个很重要的应用，使研究者们能够鉴定出一些对毒性物质有抑制作用和敏感的基因及一些与毒理相关的通路。     

基因芯片在抗微生物药学研究中的应用

基因芯片技术是一种高通量、快速、平行、自动化的DNA测序及基因表达研究工具。病原微生物全基因组测序的完成为抗微生物药物提供了大量潜在靶位。因而利用基因芯片技术进行抗微生物药学研究已逐渐成为热点之一。本文从药物作用机制、药物靶位研究、病原菌与寄主的相互作用、病原菌的鉴定及其耐药性的监测以及新药筛选、用药个体化等方面对其进行了综述。     

鹿苑鸡微卫星和AFLP指纹分析

利用20个微卫星标记和6对AFLP引物组合对地方鸡种鹿苑鸡进行了遗传检测,结果表明鹿苑鸡在20个微卫星位点上共检测到118个等位基因,基因频率分布在0.0125～0.5500之间,平均每个座位检测到5.9个等位基因.20个微卫星座位的平均杂合度为0.7366,平均多态信息含量为0.6953;6对AFLP引物组合在该鸡种中共检测到245条多态性条带,平均每个引物组合产生40.8条多态性条带;鹿苑鸡群体变异大,具有丰富的遗传多样性.     

SNP技术在猪肉溯源过程中的应用

为筛选可用于梅山猪和申农猪肉质溯源的SNP位点标记,采用PCR-RFLP方法检测13个基因在梅山猪和申农猪群体内14个SNP位点的多态性,以期寻找多态性丰富的SNP位点,通过再次采集样品,进行溯源验证试验,最终确定可用于梅山猪和申农猪肉溯源的SNP位点组合。结果表明：MMP19基因、GRN基因、NR4A1基因的SNP位点和PSMB10基因的2个SNP位点杂合度（H值）均大于0.30,符合肉质溯源要求。可根据MMP19、PSMB10、NR4A1和GRN 4个基因共5个SNP位点编制用于检测梅山猪和申农猪肉质溯源的条形码。     

DNA指纹技术在近交系动物遗传检测中的研究

采用生物素标记的(GGAT)4寡核苷酸探针对DBA1、DBA2两种近交系小鼠及DBA2×DBA1 F1代小鼠进行了DNA指纹图分析,并与常规生化位点标记分析法进行了比较.结果显示,DNA指纹图具有良好的多态性,不仅可以分辨生化位点标记分析法能够区分的不同品系的近交系动物,而且也能够分辨生化位点标记分析法不能区分的不同品系的近交系动物.研究还表明,用同一方法重复同一基因组DNA的指纹图时,获得相同的实验结果.因此,DNA指纹图法不仅比传统的生化位点检测分析法有更好的分辨力,也具有良好的稳定性.