8种杀菌剂对番茄灰霉病菌的毒力及田间番茄灰霉病菌对咯菌腈的敏感性

为了解决番茄灰霉病菌的抗性问题,筛选出理想的替代药剂,采用菌丝生长速率法测定了山东寿光和河北徐水两地番茄灰霉病菌对不同类型杀菌剂的敏感性。两地的番茄灰霉病菌对咯菌腈、氟啶胺均高度敏感,对其他不同作用方式的杀菌剂表现出不同的敏感性。用同样方法检测了不同地区的106株番茄灰霉菌对咯菌腈的敏感性,结果显示其EC50值分布在0.003 9～0.044 9μg/mL之间,平均EC50值为(0.014 2±0.008 1)μg/mL。咯菌腈可作为防治番茄灰霉病的候选药剂。     

辽宁省不同地区番茄灰霉病菌对咯菌腈的敏感性

为明确辽宁省不同地区间番茄灰霉病菌对咯菌腈的敏感性是否存在差异,以及咯菌腈与其他杀菌剂之间是否存在交互抗性,采用菌丝生长速率法测定番茄灰霉病菌对咯菌腈、腐霉利、多菌灵的敏感性。结果表明,从辽宁省6个不同地区分离的番茄灰霉病菌菌株对咯菌腈的平均EC50差异不显著,番茄灰霉病菌菌株对咯菌腈的敏感性频率呈正态分布,咯菌腈对不同地区共117株番茄灰霉病菌的EC50平均值为(0.007 3±0.004 5)μg/mL,且咯菌腈与腐霉利和多菌灵之间均不存在交互抗药性。     

咯菌腈与解淀粉芽胞杆菌X-119复配对葡萄灰霉病的防效

为探究杀菌剂与解淀粉芽胞杆菌Bacillus amyloliquefaciens X-119菌株复配防治葡萄灰霉病的可行性,通过平板试验筛选抑菌效果较好的杀菌剂与解淀粉芽胞杆菌X-119菌株进行复配,测定不同体积比复配剂对葡萄灰霉病的防效,并通过对菌丝形态、产孢量、产核能力及协同转运蛋白超家族（major facilitator superfamily,MFS）相关调控基因表达水平的观察筛选得到最优复配组合。结果显示,咯菌腈与解淀粉芽胞杆菌X-119菌株体积比为8∶2时的复配剂对葡萄灰霉病菌Botrytis cinerea H259、H261 菌株的抑制效果最佳,毒性比率分别为 1.77 和 1.73,防效分别为 90.91% 和72.33%;离体果实防效分别为83.06%和65.48%,温室防效分别为76.72%和76.24%,且复配剂防效高于单剂。且该复配剂可阻碍葡萄灰霉病菌菌丝正常生长,显著降低其产孢能力和产核能力。实时荧光定量PCR结果显示,该复配剂处理葡萄灰霉病菌后细胞膜转运蛋白相关调控基因BCIN_09g00960、BCIN_03g02340和BCIN_09g00210的表达水平下调趋势显著。表明咯菌腈与解淀粉芽胞杆菌X-119菌株复配表现出良好的防控效果,生产中可将咯菌腈与解淀粉芽胞杆菌X-119菌株按体积比8∶2复配用于葡萄灰霉病防治。     

河北省设施番茄灰霉病菌对啶酰菌胺和咯菌腈的敏感性

 为明确河北省设施番茄灰霉病菌对啶酰菌胺和咯菌腈的敏感性,2013-2016年,采用菌丝生长速率法测定了采自河北省八个地区的2 425株灰霉病菌对啶酰菌胺和咯菌腈的敏感性。2013-2016年监测数据显示,河北省设施番茄灰霉病菌对啶酰菌胺和咯菌腈的敏感性呈下降趋势。2016年从河北省不同地区采集的番茄灰霉病菌对啶酰菌胺具有相似的敏感性,且对啶酰菌胺产生了低水平的抗性,仅在唐山地区检测到了啶酰菌胺的高抗菌株;而不同地区采集的灰霉病菌对咯菌腈的敏感性具有差异,但均为咯菌腈的敏感菌株。因此,啶酰菌胺和咯菌腈仍可用于番茄灰霉病的防治,但应严格控制其使用频率,监测灰霉病菌对其敏感性变化动态。     

新杀菌剂对番茄灰霉病菌的室内毒力及田间防效

室内采用菌丝生长速率法、孢子萌发法和黄瓜子叶法测定了咯菌腈、抑霉唑、福美双、吡唑醚菌酯和嘧霉胺对番茄灰霉病菌( Botrytis cinerea)的抑制作用。结果表明,菌丝生长速率法和孢子萌发法的测定均以咯菌腈毒力最高,EC 50分别为0.005 2 μg/mL和0.087 6 μg/mL;黄瓜子叶法测定以抑霉唑毒力最高,其EC 50为0.675 3 μg/mL。田间药效试验结果表明：50%咯菌腈可湿性粉剂90 g/ hm2对番茄灰霉病的田间防效达到90%以上,显著高于对照药剂50%啶酰菌胺水分散粒剂300 g/hm2和40%嘧霉胺悬浮剂 480 g/hm2的防效。     

番茄灰霉病菌对咯菌腈的抗性诱变及抗药突变体的生物学特性

为评估番茄灰霉病菌Botrytis cinerea对咯菌腈的抗性风险,就室内经紫外照射获得抗药突变体的方法及抗性突变体的生物学性状进行了研究。结果表明:番茄灰霉病菌分生孢子的紫外照射亚致死时间为90~120 s;经亚致死时间紫外照射后,4个亲本菌株中有2个菌株共产生了6个抗咯菌腈的突变体,其EC50值是亲本菌株的310倍以上,抗性突变频率为3.13×10-7;经紫外照射诱变获得的所有抗性突变体在菌丝生长速率、产孢量、产菌核能力及其在番茄果实上的致病性方面均比其亲本菌株明显降低。相关分析显示,所得抗咯菌腈突变体对氟啶胺、啶菌唑、啶酰菌胺和嘧霉胺无交互抗性。表明番茄灰霉病菌对咯菌腈的抗药性风险较低。     

腐霉利和咯菌腈混用对黄瓜灰霉病菌的联合毒力及药剂残留动态

为探究腐霉利和咯菌腈混用对黄瓜灰霉病病原菌灰葡萄孢的联合毒力,进而通过减少用药量及施药后残留动态分析,提升黄瓜中这两种农药的风险防控水平。采用菌丝生长速率法,测得腐霉利和咯菌腈对灰霉病菌菌丝生长的有效抑制中浓度(EC₅₀)分别为0.069 mg/L和0.103 mg/L;而将两种农药以质量比1∶1混用时,EC₅₀值为0.016 mg/L,增效系数(synergistic ratio,SR)达到5.0,表现为强增效作用。腐霉利和咯菌腈单独处理3 d后的灰霉病菌菌丝经电镜扫描观察,分别表现为菌丝干瘪和胞内物质溢出;而经两种农药以质量比1∶1混合处理后,灰霉病菌同时出现了菌丝干瘪和胞内物质溢出现象,混用对菌丝的损伤符合叠加增强特征。为进一步分析腐霉利和咯菌腈混配施用后的动态残留情况,对可同时检测这两种农药残留的高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)方法进行了优化。所用方法下,腐霉利和咯菌腈的添加回收率分别为100%～102%和94%～96%,相对标准偏差(RSD)为1.7%～5.3%和2.8%～3.4%,定量限(LOQ)为0.01 mg/k...     

氟啶虫胺腈对枸杞棉蚜室内毒力及田间防效研究

明确氟啶虫胺腈对枸杞棉蚜的室内毒力及田间防效。采用浸虫法进行室内毒力测定,在田间进行小区药效试验。氟啶虫胺腈对枸杞棉蚜的LC₅₀值为77.6215 mg/L。50%氟啶虫胺腈水分散粒剂在田间对枸杞棉蚜表现出较好的速效性和持效性,55.56、83.33、111.11 mg/L在药后3、7、14 d的防效分别为72.38%～78.96%、80.15%～92.59%、79.71%～93.09%。药后7 d低剂量处理防效低于对照处理,其他处理的防效均显著高于对照药剂吡虫啉的防效,且各剂量处理均对枸杞树安全。50%氟啶虫胺腈水分散粒剂对枸杞棉蚜有较好的防治效果。     

防治人参灰霉病的药剂筛选及其田间防效

调查辽宁、吉林人参主产区灰霉病发生危害发现,人参灰霉病发病初期为6月上旬,发病高峰期为7月中旬至8月下旬,发病严重的参床病株率达12.5%。为防治人参灰霉病,选用12种杀菌剂进行室内、外药剂筛选试验。室内初筛发现10%苯醚甲环唑水分散粒剂、40%嘧霉胺悬浮剂和50%腐霉利可湿性粉剂的抑菌效果较好,EC_(50)分别为0.19、1.20 mg/L和4.41 mg/L;其次是30%醚菌·啶酰菌水剂、70%代森联水分散粒剂、18.7%烯酰·吡唑酯水分散粒剂;50%多菌灵可湿性粉剂对病菌的抑制效果最差。田间药效试验发现,10%苯醚甲环唑水分散粒剂、50%腐霉利可湿性粉剂和40%嘧霉胺悬浮剂防治效果较好,均达到80%以上。     

吡虫啉、氟虫腈对地老虎的室内毒力及田间防效

室内毒力测定结果表明:吡虫啉和氟虫腈对黄地老虎的LD₅₀分别为0.090 6和0.064 0 g/100 g棉种。田间棉花苗期试验结果表明:吡虫啉和氟虫腈等药剂对棉花出苗无不良影响。12%吡虫啉悬浮种衣剂以0.2～0.3 g/100 g棉种拌种处理棉花种子,对棉花苗期地老虎具有较好的防治效果;5%氟虫腈悬浮种衣剂以0.1 g/100 g棉种拌种处理棉花种子,对棉花苗期地老虎也具有一定的防效。     

4种戊烷脒同系物对灰霉病的防治效果

采用载玻片萌发法、抑制菌丝生长速率法、组织测定法，结合田间小区试验，系统研究了戊烷脒及其同系物乙烷脒、丙烷脒、丁烷脒对番茄灰霉病菌的抑制活性和田间防治效果。结果表明，各化舍物对灰霉病均有一定的抑制活性，其中丙烷脒和丁烷脒对灰霉病的抑制活性较高，二者抑制菌丝生长的EC50分别为0．6821mg／L和2．1599mg／L，抑制孢子萌发的EC50分别为2．7510mg／L和5．7362mg／L；丙烷脒和丁烷脒对番茄灰霉病有较高的保护和治疗作用；在田问试验条件下，连续2次施药后，以120g ai／hm^2施用剂量防治豇豆灰霉病，丙烷脒和丁烷脒的防治效果分别为78．03％和54．52％，以100gai／hm^2施用剂量防治草莓灰霉病，防治效果分别为71．97％和68．96％，均优于对照药剂施佳乐（450gai／hm^2）和速克灵（468．8gai／hm^2）。丙烷脒和丁烷脒具有开发成为农用杀菌荆的潜力。     

枯草芽孢杆菌BS-208和BS-209菌株防治番茄灰霉病研究

为开发防治番茄灰霉病Botrytis cinerea的生防细菌,进行了枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis BS-208和BS-209菌株对番茄灰霉病的温室和田间防治试验,并测定了两菌株对番茄灰霉病菌的抑制作用。结果表明:BS-208菌株分泌物对番茄灰霉病菌菌丝生长的抑制率为44%以上;BS-208和BS-209菌株的发酵液在经稀释10倍后,对番茄灰霉病菌分生孢子萌发的抑制率可达90%以上。经温室盆栽试验测定,以BS-208和BS-209菌株发酵液和菌体处理后24和48 h接种病菌,防效均达75%以上,好于0 h接种的防效,但分泌物滤液防治效果较差。两年的田间试验结果表明,BS-208和BS-209制剂对番茄灰霉病均具有良好的防治效果,其防效随浓度加大而提高,以800倍液的防效最好,两菌株制剂800倍液连续3次施药后防效均达到74%以上,并且BS-208菌株的防效略高于BS-209菌株。     

两种季铵盐阳离子表面活性剂对番茄灰霉病菌的生物活性

为探讨季铵盐阳离子表面活性剂在番茄灰霉病防治中的应用潜力,室内采用菌丝生长速率法测定了五种阳离子表面活性剂对番茄灰霉病菌Botrytis cinerea的毒力作用,筛选出具有较高抑菌活性的1227(十二烷基二甲基苄基氯化铵)和C8-10(双八、十烷基季铵盐),并研究了其对该菌菌丝干重、分生孢子萌发、产孢量、菌核形成及细胞膜透性的影响。结果表明,五种阳离子表面活性剂中1227和C8-10对病原菌菌丝生长有较强的抑制作用,EC50值分别为8.39和5.82μg/mL,其毒力高于常规对照药剂腐霉利水悬浮剂,与嘧霉胺水悬浮剂、乙霉威水悬浮剂相当。两者对菌丝干重、孢子萌发均有较强的抑制作用,20μg/mL时抑制率接近或达到100%;对菌核数、菌核形态及分布有一定影响;40μg/mLC8-10对该菌产孢量的抑制率可达90%以上;1227和C8-10的浓度大于20μg/mL时均能明显影响病原菌细胞膜的通透性。     

灰霉病菌对三种杀菌剂的抗性表现型分布及稳定性测定

采用最低抑制浓度法(MIC)和菌落直径法,对采自山西晋中、晋南、晋东南和晋北4个地区的188个灰霉病菌株对3种杀菌剂的抗性表现型和稳定性进行了测定,旨在了解灰霉病菌的抗药性状况和预测其抗性发展趋势。结果表明:对多菌灵的抗性表现型可分为敏感(S)、低抗或中抗(RM)和高抗(R),对腐霉利和乙霉威可分为敏感(S)和抗性(R)。以对多菌灵、腐霉利和乙霉威的抗性为序,检测出8种不同类型的抗性表现型,即RRR、RRS、RSR、RSS、RMRS、RMSR、RMSS 和SSR。各表现型的分布频率随各地区用药历史和水平的不同而变化,并与抗性监测结果相一致。对55个不同抗性表现型的单孢菌株的稳定性测定结果表明:继代无药培养10代后,以RRR和RSS型表现最稳定,而其余类型菌株均不同程度发生了变异,尤其是RMSS和RMRS型菌株100%发生了变异,抗性表现型不稳定的菌株占52.7%。对多菌灵的抗性变化趋势是由敏感向低抗、再向高抗发展;对腐霉利的抗性变化主要是由抗性转变为敏感;而对乙霉威的抗性则相对比较稳定。     

丙烷脒对番茄灰霉病菌生长发育的影响

利用电子显微技术研究了丙烷脒在活体植物上对番茄灰霉病菌Botrytis cinerea Pers.生长发育的影响。结果表明:丙烷脒对番茄灰霉病菌的生长发育有明显影响,但不同时期施药,表现出一定的差异性。扫描电镜观察发现,在先施药后接菌的情况下,番茄灰霉病菌产孢量显著下降,并且所产孢子表现出凹陷、变形等不良发育状况;在先接菌后施药的情况下,丙烷脒处理后不影响番茄灰霉病菌的产孢量,但所产孢子也表现出凹陷、变形等不良发育状况;透射电镜观察发现,在先施药后接菌的情况下,番茄灰霉病菌无法有效地侵入番茄表皮以下组织,病情得以有效控制;在先接菌后施药的情况下,药剂处理的番茄灰霉病菌可以侵入番茄表皮以下组织,但生长状况不良。不同时期丙烷脒处理后均能使番茄灰霉病菌的菌丝出现塌陷、生长点缢缩等不良生长现象;病菌菌丝细胞壁表现出不规则的加厚,尤以顶端加厚明显;线粒体异常增多,并出现基质型肿胀;病菌菌丝内细胞器液泡化,最终形成大的液泡;病菌细胞内含物外渗,出现质壁分离和空腔细胞;病菌细胞器泡囊化解体和细胞组织崩解,细胞趋于死亡等。研究表明,丙烷脒对番茄灰霉病菌的生长发育具有明显的影响,除具有保护性防病效果外,还表现出较强的治疗效果。     

应用电导仪测定番茄灰霉病菌对多菌灵抗药性的初步研究

1.0 mg/L和5.0 mg/L多菌灵盐酸盐溶液处理灰霉病菌多菌灵敏感菌株和抗性菌丝体,用电导仪测定溶液电导率的动态变化,结果表明:在敏感菌株存在时,多菌灵盐酸盐溶液2 h后的电导率显著降低,而抗性菌株存在的溶液中电导率则未见下降。     

连续施药及室内药剂驯化对番茄灰葡萄孢对咯菌腈敏感性的影响

为了解连续施药对番茄灰葡萄孢对咯菌腈敏感性的影响,在温室条件下,从灰霉病发生初期开始,按推荐剂量(有效成分67.5 g/hm2)定期向番茄苗喷施咯菌腈,通过菌丝生长速率法检测灰葡萄孢对咯菌腈的敏感性。结果表明,在番茄1个生长季节中连续施药7次后,病菌对咯菌腈仍表现敏感,其EC50值在0.004 7～0.046 2 μg/mL之间。在含咯菌腈的PDA培养基上对30个灰葡萄孢敏感菌株进行药剂驯化7代后,共产生2个抗药性突变体(Rg-12和Rdz-28),其中Rg-12对咯菌腈的EC50值是其亲本菌株g-12的46倍,Rdz-28的EC50值大于500 μg/mL,2个抗性突变体在菌丝生长速率、产孢量和产菌核能力方面均显著低于其亲本菌株。推测灰葡萄孢可能不易对咯菌腈产生抗性,咯菌腈可作为防治番茄灰霉病的理想候选药剂。     

壳聚糖诱导黄瓜幼苗抗灰霉病

为了明确壳聚糖(chitosan,CTS)对黄瓜幼苗抗灰霉病的诱导作用,采用根际注射结合叶面喷洒的方法,测定了灰霉病菌侵染下幼苗植株病情指数、防御酶活性和抗病相关物质含量等生理指标。结果表明:CTS降低了黄瓜幼苗的病情指数,最高幅度达39.4%,提高了苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化物酶(POD)和多酚氧化酶(PPO)活性,增加了总酚、类黄酮和木质素含量。说明CTS能诱导黄瓜幼苗对灰霉病的抗性,且最佳处理浓度为200mg·L-1。     

纳他霉素对灰葡萄孢不同生育阶段菌体的毒力及其生物学性状的影响

以多菌灵为对照药剂,采用生长速率法、悬滴法和浸渍法分别测定了不同温度下纳他霉素对灰葡萄孢Botrytis cinerea菌丝生长、分生孢子萌发和菌核萌发的毒力,研究了常温下两种药剂对菌株产孢和菌核形成的影响。结果表明:纳他霉素及多菌灵对灰葡萄孢不同生育阶段菌体的抑制作用随温度降低而有不同程度增强;分生孢子对药剂最为敏感;温度对药剂对菌丝毒力的影响最显著;多菌灵对菌株不同发育阶段的抑制活性均高于纳他霉素。供试药剂对菌株产孢时间和菌核产生时间无显著影响,但多菌灵可显著刺激菌株产孢和菌核形成。     

转葡聚糖酶和防御素基因的番茄植株及其对番茄灰霉病的抗性

用根癌农杆菌Agrobacterium tumesfaciens介导法，将烟草β-1，3-葡聚糖酶Glucanase基因、苜蓿防御素alfAFP基因及二者双价基因导入番茄Micro—Tom中，以期获得抗灰霉病的转基因株系，并比较验证双价基因是否具有协同作用。绿色荧光蛋白基因（GFP）活性检测、PCR和Southem杂交检测表明，外源基因分别以1—4个拷贝整合到番茄基因组中。对T1代植株进行接种鉴定表明，转基因植株对灰霉病侵染的抵抗能力较对照明显增强，各株系的抗病能力与外源基因的表达相关，且葡聚糖酶基因和防御素基因对抗灰霉菌表现一定的协同作用。T1株系田间抗病鉴定结果表明，转基因株发病程度不同，病情指数在19—28之间，抗病性均高于对照。所得到的稳定表达的株系可作为抗病育种材料进一步研究。