用间接免疫过氧化物酶抗体试验测定猪传染性胃肠炎病毒抗体

免疫辣根过氧化物酶抗体(IPA)试验已被应用于检查猪传染性胃肠炎(TGE)病毒的抗体。从82头猪采集血清的IPA抗体滴度比其血清中和试验大约高7倍。IPA试验和血清中和试验二者的抗体滴度呈正相关(λ=+0.74)。IPA试验似乎有可能于常规实验室用于IGE的血清学诊断。     

用间接免疫过氧化物酶抗体试验测定猪的抗传染性胃肠炎病毒抗体

采集82头猪的血清,免疫过氧化物酶抗体的抗体滴度比血清中和试验大概高七倍以上,传染性胃肠炎抗体浓度,在免疫过氧化物酶抗体试验和中和试验之间是正比关系。免疫过氧化物酶抗体试验,已成为实验室内诊断传染性胃肠炎的常规方法。     

猪传染性胃肠炎病毒免疫过氧化物酶单层细胞试验原位检测方法的建立

为建立猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的原位检测方法,本研究以TGEV N蛋白的单克隆抗体为一抗,羊抗小鼠IgG-HRP为二抗,AEC过氧化物酶底物为显色液,建立了TGEV的免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)检测方法。检测结果显示,一抗的最佳使用浓度为0.5 ng/μL,二抗的最佳稀释倍数为1∶2 000倍,经AEC显色,TGEV感染的阳性细胞呈红棕色;对常见的猪流行性腹泻病毒、猪轮状病毒和猪圆环病毒2型等猪病病原检测均为阴性,具有良好特异性;同时该方法能够在普通显微镜下观察到病毒在细胞中的分布情况。本研究建立的方法为TGEV的实验室鉴定及TGEV在感染细胞中的定位和动态分布提供有效的检测手段。     

应用微量血清中和试验检测猪传染性胃肠炎病毒抗体

猪传染性胃肠炎(TGE)是仔猪的一种高度接触性、病毒性肠道疾病,是进、出口猪主要检疫对象之一。据中外检疫条款规定,诊断本病的方法可用酶联免疫吸附试验和血清中和试验。自1985年以来,笔者采用微量血清中和试验对进出口约2000头猪进行     

应用免疫过氧化物酶检查猪传染性疱疹病毒

过氧化物酶抗体结合物的制备免疫球蛋白是从猪的免疫血清中得到的,抗体效价约为1:256——对每0.1ml有100TC1D_(50)的伪狂犬病毒。用硫酸铵沉淀法制备免疫球蛋白。将100ml 血清的沉淀物溶解在10ml 无菌的蒸馏水中,用0.0175M pH6.3磷酸盐缓冲液,4℃环     

应用免疫酶技术测定猪传染性胃肠炎病毒的初步结果

免疫酶技术是近十年来在荧光抗体和组织化学基础上发展起来的一种新技术。近年来这个技术在国内外已开始广泛地应用于医学和生物学中。由于该技术具有荧光抗体技术的优点,而克服了荧光抗体技术中必须具     

猪传染性胃肠炎病毒核酸免疫昆明鼠的抗体应答

以猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)TH98株N基因的重组质粒pHN为模板，Li-15和Li-2为上、下游引物扩增出TGEVTH98／N基因。将N基因与真核表达载体pcDNA3．1( )分别用BamHⅠ、XhoⅠ双酶切后连接，构建了重组真核表达载体pcDNA—N。将昆明鼠随机分为2组，分别肌肉注射pcDNA—N和pcDNA3．1( )，每只鼠100μg，共免疫3次，每次间隔2周。首次免疫后第0、14、21、28、35、39、47和54d采血分离血清，采用ELISA检测抗体动态变化。注射pcDNA—N组小鼠在首次免疫后第39d检测到针对TGEVN蛋白的阳性抗体。     

利用重组抗原建立间接酶联免疫吸附试验检测猪传染性胃肠炎血清抗体

随着分子生物学的发展 ,重组抗原用于疾病的血清学诊断的报道越来越多 [3 ] 。周仲芳等报道了采用杆状病毒表达系统生产的TGE病毒纤突蛋白 ( S)建立了一种竞争ELISA检测猪 TGE血清抗体 ,获得了较为理想的特异性和准确性。本文报道了采用同样的重组抗原建立了一种间接 ELISA用于TGE血清抗体的检测 ,同时由于在结果判定中采用终点滴度技术 ( End- titer) ,使得检测结果的判定更直观和迅速。1　材料与方法1.1　 EL ISA操作方法　本研究中的抗原制备和包被方法见周仲芳等 ( 1997)的报道。ELISA板经抗原包被后可立即使用 ,也可保存…     

猪传染性胃肠炎病毒卵黄抗体的研制

针对猪传染性胃肠炎病尚无有效的治疗药物,本文研究开发抗猪传染性胃肠炎病毒卵黄抗体,以期为该病的防治提供技术支持.用猪传染性胃肠炎灭活疫苗按程序免疫90～140日龄健康商品海兰褐蛋鸡,三免14天后收集高免蛋进行卵黄抗体提取、ELISA抗体效价检测及攻毒保护试验.高免蛋三免后14天效价可达到1:256,并维持3个月,三免后...     

应用免疫过氧化物酶方法检查猪传染性疱疹病毒

前言应用免疫过氧化物酶方法进行病毒抗原的定位,已经日益具有实际意义。我们的研究主要是比较异硫氰酸荧光素(FITC)标记抗体和辣根过氧化物酶标记抗体的敏感性。我们对于怀疑死于猪疱疹病毒感染的动物的诊断程序,包括在猪肾单层细胞分离猪疱疹     

猪传染性胃肠炎病毒的分离试验

猪传染性胃肠炎(简称TGE)是由一种病毒引起的猪的急性传染病。1956年Fee和Efo等报导该病毒可在猪肾细胞培养物上传代,1963年Harada首次报导了TGE病毒在猪肾细胞培养物上能出现细胞病变(CPE)(1)。也有报导(2)TGE病毒可在鸡胚、猪肾细胞、猪脾细胞和狗肾细胞培养物内传代增殖。     

免疫过氧化物酶单层试验检测鸡传染性法氏囊病病毒抗体的研究

建立了检测鸡血清中传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）抗体的免疫过氧化物酶单层试验（ＩＰＭＡ）。用于野外鸡血清中ＩＢＤＶ抗体检测。结果表明，ＩＰＭＡ比琼脂凝胶扩散试验（ＡＧＤ）更敏感、快速稳定。这为ＩＢＤ和其它疾病的诊断提供了一种新方法。     

猪传染性胃肠炎病毒重组N蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立

为建立一种检测猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)血清抗体的间接ELISA方法,将TGEV的N基因片段克隆到p ET-28a载体中,转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中进行诱导表达,并对表达的蛋白进行Western-blot鉴定。以纯化的重组N蛋白作为包被抗原,最终建立了检测TGEV抗体的间接ELISA方法。该ELISA方法与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸系统综合征病毒(PRRSV)、口蹄疫病毒(FMDV)、猪圆环病毒2型(PCV2)等5种病毒阳性血清不发生交叉反应,表明建立的ELISA方法具有良好的特异性。本研究可为猪传染性胃肠炎的流行病学调查、诊断与防控奠定基础。     

猪乳汁中抗猪传染性胃肠炎病毒IgA抗体间接ELISA检测方法的建立

为建立检测猪乳汁中抗猪染性胃肠炎病毒(TGEV)Ig A抗体的间接ELISA方法,本研究以TGEV重组N蛋白为包被抗原,以辣根过氧化物酶标记羊抗猪Ig A为检测抗体,并采用方阵法确定包被抗原和待检乳汁的最佳工作浓度,对各种反应条件进行优化,建立了猪乳汁中TGEV Ig A抗体的间接ELISA检测方法。该方法检测稀释160倍的阳性乳清仍呈阳性;与猪流行腹泻和猪轮状病毒感染阳性乳清无交叉反应;批内和批间变异系数均小于10%。利用建立的ELISA方法与间接免疫荧光方法分别对134份临床样品进行检测,阳性检出率分别为58.2%(78/134)和59.7%(80/134),总符合率为85.6%。本研究建立的检测方法能够有效评估乳汁中TGEV Ig A抗体的水平。     

猪传染性胃肠炎病毒间接ELISA检测方法的建立

猪传染性胃肠炎（TGE）是由冠状病毒科、冠状病毒属的TGEV引起猪的一种以呕吐、严重水样腹泻和脱水为特征的急性、高度接触性传染病。TGE常与其他腹泻性疾病发生混合感染,并且在临床不易与其他腹泻病相区别。因此,对TGE进行准确的诊断与鉴别诊断对防制该病具有重要意义。EUSA检测方法具有敏感性高、特异性强、操作简便和样本检测量大等特点,可广泛用于病原和血清抗体检测。     

猪的传染性胃肠炎病毒

传染性胃肠炎(TCE)是一种高度传染的病毒性的猪肠道疾病,2周龄前的小猪感染后死亡率十分高。在美国中西部猪繁殖密集的地区,传染性胃肠炎是幼年小猪腹泻和死亡的主要原因之一。虽然这种病毒通过实验接种后可以从狗、狐和八哥鸟中分离出来,并在狗体中可测得传染性胃肠炎的抗体,但除猪之外尚未发现其他动物发病。在美国,该病主要发生在冬季。这可能是由于(1)病毒在冷天比暖热天气活得较     

免疫过氧化物酶单层细胞试验检测猪圆环病毒Ⅱ型抗体方法的建立

正猪圆环病毒病(PCVD)是由猪圆环病毒Ⅱ型(PCV-2)引起的猪传染性疫病,是继猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)之后新发现的又一重要疫病,临床主要表现为生长迟缓、进行性消瘦、呼吸困难、黄疸、腹泻、皮炎、繁殖障碍、震颤等~([1])。自1997年Clark等人首次分离到PCV-2以来,该病已给全世界养猪业造成巨大的经济损失,我国为养猪大国,PCV-2感染也相当严重,全国各大小猪场均存在PCV-2感染的报道~([2])。急需采取防治措施控制该病毒的传播,