重瓣榆叶梅花中蛋白质提取工艺及动态含量研究

重瓣榆叶梅花中蛋白质提取研究表明,最佳提取工艺为采用pH7.0的磷酸氢二钠提取液、液料比为30∶1(mL∶g)、30℃、500 W、超声提取3次(每次120min)。在该提取工艺条件下,测得开花14d花中蛋白质含量最高,为13.237mg·g-1;开花21d花中蛋白质含量最低,仅为5.150mg·g-1。     

应用高效毛细管电泳测定生物蛋白质样品

应用高效毛细管电泳仪(CE)测定了生物样品中的胃蛋白酶、卵清蛋白及枯草杆菌细菌蛋白等。经过对波长185mm与214nm条件下的测定结果进行比较试验,得出185nm波长下的检测灵敏度大大高于214nm波长的检测灵敏度。     

重瓣榆叶梅花中多糖提取工艺及动态含量研究

采用超声波辅助提取法,优化重瓣榆叶梅花朵中多糖提取的工艺条件,并在最佳工艺条件下研究了重瓣榆叶梅花朵生长过程中多糖含量的动态变化。在单因素试验的基础上,利用响应面分析法对多糖的主要提取工艺参数进行优化和方差分析。得到最佳工艺条件为:提取温度70℃,提取时间40min,超声波功率120 W,液料比为60mL/g,在上述工艺条件下,测得处于花开初期的重瓣榆叶梅花中多糖的含量最高,其提取率可达到2.809%。说明花开初期时的重瓣榆叶梅花利用价值相对较高。     

高效毛细管电泳及其在蛋白质分析中的应用

介绍了毛细管电泳的基本原理和分离模式;列举了一些最近几年在蛋白质分析方面的应用;分析了其存在的问题和应用前景。     

高效毛细管电泳法测定加杨叶芦丁含量的动态变化

建立了加杨叶中芦丁含量测定的高效毛细管电泳方法。用甲醇溶解样品采用超声提取,研究了缓冲溶液浓度、pH值、电压、温度及进样时间等因素对分离检测的影响;确定了最佳的测定条件:50mmol/L硼酸盐缓冲溶液(pH值为9.3),压力进样时间为5s,温度为25℃,运行电压为20kV,检测波长为254nm。在此条件下,峰面积与芦丁浓度具有良好的线性关系,平均回收率达到98.58%,方法准确。同时,利用建立的方法研究了加杨叶生长过程中芦丁含量的变化。     

槐米的高效毛细管电泳指纹图谱研究

以甲醇为提取溶剂,采用毛细管区带电泳,运行电压20 kV,运行缓冲液为40 mmol/L硼砂（pH=9.0）,建立了槐米的指纹图谱.槐米指纹图谱中,共有峰的相对迁移时间的相对标准偏差小于1.3%,共有峰中单峰面积超过10%总峰面积的色谱峰一个,各批次的相对峰面积比值相对标准偏差小于6.0%,满足建立中药指纹图谱的要求.高效毛细管电泳指纹图谱法可作为槐米药材的质量控制的一种方法.     

白僵蚕高效毛细管电泳指纹图谱研究

【研究目的】采用高效毛细管电泳法(HPCE)建立白僵蚕的指纹图谱。【方法】:电解质溶液由以10mmol/L磷酸二氢钠-20mmol/L的硼砂溶液(pH8.62)作缓冲液,在25℃,20kV的压力下进行电泳,201nm波长处检测,线性关系良好,在25min内完全分离。【结果】:上述条件下,白僵蚕成分得到了较好的分离,方法学考察结果符合定量测定和定性研究的要求。【结论】:该方法具有较好的分离效果和良好的精密度,可考虑作为白僵蚕的质量控制方法。     

槐米的高效毛细管电泳指纹图谱研究

以甲醇为提取溶剂,采用毛细管区带电泳,运行电压20 kV,运行缓冲液为40 mmol/L硼砂(pH=9.0),建立了槐米的指纹图谱.槐米指纹图谱中,共有峰的相对迁移时间的相对标准偏差小于1.3%,共有峰中单峰面积超过10%总峰面积的色谱峰一个,各批次的相对峰面积比值相对标准偏差小于6.0%,满足建立中药指纹图谱的要求.高效毛细管电泳指纹图谱法可作为槐米药材的质量控制的一种方法.     

高效毛细管电泳法在果汁糖类测定上的应用

以苹果、梨、桃和杏的果实为材料,利用高效毛细管区带电泳法直接分离和测定了其果汁中的糖类物质,并结合外标定量法对主要糖类物质进行了分析,结果表明,该试验方法简便、快速、灵敏度高。     

高效毛细管电泳法分离检测鸡蛋中3种喹诺酮类抗菌药

旨在建立高效毛细管电泳检测鸡蛋中环丙沙星、氧氟沙星和恩诺沙星3种喹诺酮类抗生素的测定方法。研究结果显示,高效毛细管电泳在检测波长为280 nm时,最佳电泳条件是缓冲液为pH 8.53的30 mmol/L Na₂B₄O7-10 mmol/L KH₂PO₄溶液,分离电压为18 kV,温度为25 ℃。在此最佳电泳条件下,3种抗生素在12 min内实现基线分离,且各组分质量浓度与峰面积呈良好的线性关系（r＞0.996 9）,相对标准偏差（RSD）小于3%,平均加标回收率为115.92%~131.77%。该方法快速简便、灵敏度高、重现性好,可用于鸡蛋中喹诺酮类抗生素质量浓度的测定。     

重瓣榆叶梅花中黄酮的提取、动态含量及抗氧化活性测定

选用乙醇溶剂提取法,利用单因素和正交试验研究重瓣榆叶梅花朵中总黄酮的最佳提取工艺,并对花朵中总黄酮的抗氧化活性进行测定。结果表明:乙醇溶剂提取法的最佳提取工艺为:采用体积浓度为60%的乙醇溶剂、液料比为35∶1 (mL/g)、水浴温度80℃、提取时间90 min。在该提取工艺条件下,测得开花1周的重瓣榆叶梅花朵黄酮含量最高,为15.546%。重瓣榆叶梅花朵的黄酮提取液具有清除羟自由基(·OH)的能力,且其清除能力和黄酮提取液浓度呈正相关。     

野扁桃的繁育系统研究

为研究孑遗植物野扁桃的繁育系统,采用野外观测、荧光显微观察及统计分析方法对野扁桃的繁育系统进行研究。结果表明,该种单花开花持续时间为8d,花冠直径为(24.79±0.40)mm;花粉活力在刚散粉时最高达96.88%,在第17天半数花粉失去活性,第28天花粉完全失去活性;柱头在开花第1~3天可授性最强,可持续7d;杂交指数为3;自花花粉和异花花粉均能在柱头上萌发,授异花花粉59h后,花粉管进入子房。人工控制授粉试验表明,自花、异花授粉均能结实,需要昆虫传粉媒介。以上结果说明,野扁桃属于混合交配繁育系统类型,需要传粉者。     

基于ITS和trnl-trnF序列的新疆扁桃种质资源亲缘关系研究

为探究新疆扁桃种质的亲缘关系,以新疆‘纸皮’与‘阿曼尼沙’等24个扁桃种质为材料,对其叶片及果实的植物学性状进行对比分析。提取总DNA后分别对ITS与trnl-trnF序列进行PCR扩增、纯化及测序,将所测序列进行拼接及同源性比对。利用MEGA5软件构建基于ITS和trnl-trnF序列的不同扁桃种质间的系统发育树。通过植物学性状对比发现,‘矮丰’的叶形指数最高为4.12,‘叶尔羌’的出仁率为72.9%,在供试24个扁桃种质中最高。经相关生物信息学软件分析表明,ITS序列长度为608~610bp,包括42个变异位点和9个简约信息位点,G+C含量为61.16%~61.90%。trnl-trnF序列长度为915~933bp,其变异位点和简约信息位点丰富,分别为457个和332个,分别占总长的48.8%和35.7%,G+C含量较低,为32.46%~32.94%。基于ITS和trnl-trnF序列的系统发育树表明,ITS序列间的遗传距离为0.000~0.008,trnl-trnF序列间的遗传距离为0.000~0.400,‘双薄’与‘双软’具有相同的遗传背景。     

光核桃AmSO基因初克隆及生物信息学分析

为了初步探索光核桃（Amygdalus mira）亚硫酸盐氧化酶（Sulfite oxidase,SO）的蛋白结构与功能,以1 a生光核桃叶片cDNA为模板,采用分子克隆技术获得光核桃AmSO基因全长为1 182 bp的开放阅读框（ORF）,共编码393个氨基酸,相对分子质量是43.45 ku。生物信息学分析结果显示,AmSO蛋白是一种能在细胞核内发挥生物学作用的稳定碱性亲水蛋白,二级结构由无规则卷曲、α-螺旋和延伸链构成。蛋白结构域的预测及氨基酸序列同源性比对发现,编码氨基酸序列的N端具有氧化钼结构域,常存在于氧化还原酶中,可以与钼辅因子结合;在C端具有钼钴（Mo-co）二聚体结构域,该结构域参与二聚体的结合,并且能够参与硫、氮和碳循环中的氧化还原反应,二者在进化过程中高度保守。系统进化树分析表明AmSO与碧桃PpSO亲缘性最近,进化相对保守。对光核桃AmSO蛋白进行生物信息学预测,有助于进一步系统研究光核桃 AmSO基因在生物学上的功能,为进一步了解其对非生物胁迫的响应机制奠定基础。     

植物生长调节剂对榆叶梅生长及叶绿素荧光参数的调控效应

【目的】筛选对榆叶梅(Prunus triloba)幼苗生长发育起促进作用的植物生长调节剂种类及质量浓度,为榆叶梅的壮苗提供依据。【方法】以1年生榆叶梅幼苗为试验材料,采用盆栽试验,蘸根施用多效唑(PP333)、生根粉(GGR6)2种药剂,质量浓度均设50,100,150,200mg/L 4个梯度,分别记为P50、P100、P150、P200和G50、G100、G150、G200处理,以清水处理为对照(CK),测定不同处理榆叶梅生长指标(株高、冠幅、基径)和生理生化指标(叶绿素a(Chl a)、叶绿素b(Chl b)、叶绿素总含量(Chl(a+b))、电子传递效率(ETR)、实际光化学量子效率(ΦPSⅡ)、光化学猝灭(qP)、非光化学猝灭(qN)、最大光化学效率(Fv/Fm)),研究2种药剂对盆栽榆叶梅生长发育的影响,对所测的指标进行相关性分析,并利用隶属函数对不同处理榆叶梅测定指标进行综合评价。【结果】PP333抑制了榆叶梅幼苗株高的生长,当其质量浓度为150mg/L时,对榆叶梅幼苗株高的抑制程度最大;GGR6促进了榆叶梅幼苗株高的生长,当其质量浓度为100mg/L时,对榆叶梅幼苗株高的促进程度较大。PP333和GGR6均能明显促进榆叶梅幼苗基径增粗及冠幅的增加。随着PP333和GGR6质量浓度的增加,榆叶梅幼苗的叶绿素含量及叶绿素荧光参数ETR、ΦPSⅡ、qP、Fv/Fm均呈现先增大后减小的趋势,且PP333和GGR6质量浓度分别为150和100mg/L时达到峰值,均与对照(CK)有显著差异(P0.05);qN呈现先减小后增大的趋势。相关分析表明,Chl a、Chl b、Chl(a+b)与叶绿素荧光参数ETR、ΦPSⅡ、qP、Fv/Fm呈现极显著正相关关系(P0.01),与qN呈现极显著负相关关系(P0.01)。各处理隶属函数平均值大小顺序为G100 P150 P200 P100G50G200G150P50CK。【结论】榆叶梅最佳促进剂为GGR6,且当其质量浓度为100mg/L时,对榆叶梅幼苗生长发育的综合促进作用最佳。     

新疆棉花枯萎病菌营养亲和群的初步研究

从新疆各植棉区采集棉花枯萎病病株,经分离纯化获４９个单胞菌株。接种试验表明：４９个菌株均使棉花产生枯萎病症状。利用氯酸钾诱变棉花枯萎病菌,产生抗氯酸盐的硝酸盐营养突变株,４９个菌株共诱发获得３３６个ｎｉｔ突变株,将获得的ｎｉｔ突变株作营养亲和性配对反应,可将４９个菌株分为４个亲和群,其中４６个菌株属同一亲和群,它们均与７号小种的ｎｉｔ突变株相亲和,其余３个菌株分别属于其它亲和群。     

西瓜枯萎病菌和哈茨木霉的GFP标记及根部动态定殖比较

为明确西瓜枯萎病菌和生防哈茨木霉在西瓜根部动态定殖的差异,采用PEG-CaCl₂介导的原生质体转化法,将携带绿色荧光蛋白基因的pCT74质粒分别与尖镰孢菌西瓜专化型和哈茨木霉M3菌株的基因组整合获得相应的转化子;将转化子接种于土壤,利用激光共聚焦显微镜示踪并比较两菌株转化子对西瓜幼苗根部的侵染动态过程。结果表明,转化子连续传代6次仍能发出绿色荧光且荧光强度稳定,能够稳定遗传,经PCR验证绿色荧光蛋白基因转入成功。盆栽试验中,两种转化子均能成功定殖于西瓜幼苗根部,在定殖初期,尖镰孢菌西瓜专化型在根内的扩散速度快于哈茨木霉M3菌株。     

新疆棉花枯萎病菌的RAPD分析

将供试新疆棉花枯萎病菌32个代表菌株及3个标准菌株进行RAPD分析，筛选出14个随机引物，共产生252个RAPD分子标记，其中79.4％具有多态性。通过聚类分析将供试菌株划分为5个RAPD组，此结果与常规鉴别寄主反应法划分生理小种的结果基本一致，RAPD分析为传统方法的结果提供了分子水平的证据，从分子水平上证明新疆棉花枯萎菌群体内7号小种占绝对优势。RAPD可作为一种标记手段用于棉花枯萎病菌生理小种及遗传分化的检测。     

小麦条锈菌MFLP分子标记体系的建立与优化

【目的】建立并优化小麦条锈菌的MFLP技术体系。【方法】以小麦条锈菌混合菌种为材料,通过对DNA提取、限制性内切酶2次酶切、PCR双重扩增等试验因素的选择优化,建立适用于小麦条锈菌的MFLP分析体系。【结果】改良的CTAB/SDS法有较好的破壁效果,所提取的DNA品质良好,完全符合MFLP的操作要求。优化确定的最佳MseⅠ酶切反应时间为4h,预扩增最适退火温度为55℃,选择性扩增使用的模板为预扩增产物的100倍稀释物,其最适退火温度为58℃。【结论】建立的MFLP技术体系可提供清晰、稳定的MFLP指纹图谱,为小麦条锈菌等专性寄生菌的群体遗传学与流行学研究提供了新的技术手段和方法。