NDV单苗,NDV／IBV联苗对鸡头部相关淋巴组织的影响

本文选用１０株ＮＤＶ疫苗、１０株ＮＤＶ／ＩＢＶ联苗，察接种２周龄雏鸡后对头部相关淋巴组织（ＨＡＬＴ）的影响。通过对接种鸡进行一系列体内试验，检测了哈德氏腺（ＧＨ）对布氏杆菌灭活抗原滴眼的反应情况。根据这一结果，对ＨＡＬＴ的几个部位和支气管进行组织学检查，并见到有微观变化。本研究表明：３种ＮＤＶ／ＩＢＶ联苗（１株Ｂ１／Ｍａｓｓ＆Ｃｏｎｎ、２株ＬａＳｏｔａ／Ｍａｓｓ＆Ｃｏｎｎ）可干扰ＧＨ对布氏抗原的反     

我国鸡传染性支气管炎病毒地方性流行毒株S1基因的RT-PCR扩增及其克隆与鉴定

采用ＲＴ－ＰＣＲ方法,以ＩＢＶＳ１全基因特异性引物分别从我国华东（ＨＤ）、华北（ＨＢ）、华中（ＨＺ）、华南（ＨＮ）、西北（ＸＢ）及东北（ＤＢ）等地的ＩＢＶ流行株基因组中扩增出预期的１．７ｋｂ左右的ＤＮＡ片段。ＰＣＲ产物的ＨａｅＩＩ酶切分析及其与英国ＩＢＶＳ１全基因核酸探针的分子杂交证实所获６个ＩＢＶ流行株的ＰＣＲ产物为ＩＢＶＳ１基因。将此６个毒株的Ｓ１基因ＰＣＲ产物分别进行５’和３’端的ＢａｍＨＩ和ＨｉｎｄＩＩ酶切识别位点的分子修饰之后插入到克隆质粒ｐＵＣ１８的ＢａｍＨＩ／ＨｉｎｄＩＩ位点,在大肠杆菌中实现了目的基因的分子克隆。Ｓ１基因的ＲＦＬＰ分析表明我国ＩＢＶ已有分子水平的变异。     

禽用生物制品外源病原监测研究：鸡新城疫LaSota活苗中污染IBV的检测研究

使用ＳＰＦ鸡制备的抗ＮＤＶ（新城疫病毒）高免血清可中和ＮＤＶ种毒或鸡新城疫疫苗ＬａＳｏｔａ株１０~７ＥＩＤ５０／０．１ｍｌ（即１０个使用剂量），并具有高度持异性。对于ＮＤＶ疫苗实验室模拟污染ＩＢＶ传染性支气管炎病毒）研究表明，用ＮＤＶ高免血清中和ＮＤＶ疫苗１０个使用剂量后，可检测到ＩＢＶ１０~（－６）污染水平。对于某生药厂ＮＤＶＬａＳｏｔａ疫苗中疑似ＩＢＶ污染的样品进行检测，排除了ＩＢＶ污染。文章同时证明了免疫胚接种ＮＤＶＬａＳｏｔａ毒后胎儿表现出类似感染了ＩＢＶ的病变。     

鸡败血霉形体SC克隆致弱株免疫原性试验

在透明塑料隔离器中进行了鸡败血霉形体人工发病试验，结果３０日龄ＳＰＦ来航鸡在ＮＤＶ、ＩＢＶ弱毒诱导和７０／１００００００（质量分数）氨环境刺激的联合作用下，致病率可达１００％（７／７）。经鸡败血霉形体Ｓ６克隆致弱株ＳＣＦ１５６代培养物点眼、滴鼻免疫后１０，２０，３０ｄ的ＳＰＦ来航鸡再以ＭＧ强毒攻毒，结果，保护率分别达８０．０％（４／５），７５．０％（３／４）和８７．５％（７／８）。近期免疫效果证明，鸡败血霉形体Ｓ６克隆致弱株ＳＣ有良好的免疫原性。     

PCR检测鸡减蛋综合征病毒

根据已报道的鸡减蛋综合征（ＥＤＳ－７６）病毒ＤＮＡ序列，设计合成了１对引物，建立了ＥＤＳ－７６病毒的双温式聚合酶链反应（ＰＣＲ）诊断方法。该方法对ＥＤＳ－７６病毒长春株、河南株和广东株扩增结果均为阳性；而对致死鸡胚孤儿病毒（ＣＥＬＯＶ）、鸡病毒性关节炎病毒（ＶＡＶ）、鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）、鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）和鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）的扩增结果均为阴性。可检测ＥＤＳ－７６病毒ＤＮＡ为０．３×１０－４ｐｇ。结果表明该方法特异且敏感。此外，将常规的三温式ＰＣＲ的操作规程改为双温式，反应体积由常规５０～１００μＬ改为２０μＬ，使其更加快速、简便、经济     

应用三重聚合酶链反应同时检测鉴别鸡３种病毒性呼吸道传染病的研究

根据鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）、鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）和鸡传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）的基因文库，设计了３对分别与ＮＤＶ、ＩＢＶ和ＩＬＴＶ某段基因序列互补的引物。用这３对引物对同一样品中的ＮＤＶ、ＩＢＶ、ＩＬＴＶ核酸模板进行三重ＰＣＲ扩增，结果均同时得到了３条与设计相符的３１０bp（ＮＤＶ）、１７２０bp(ＩＢＶ）和６４７bp(ＩＬＴＶ）三重ＰＣＲ扩增带，而对其他６种禽病病原的ＰＣＲ扩增结果均为阴性；敏感性测定结果表明，该三重ＰＣＲ技术能检出１０pg的ＩＢＶ、１pg的ＮＤＶ ＲＮＡ模板和１０pg的ＩＬＴＶ ＤＮＡ模板。     

鸡传染性支气管炎(IB)病毒变异型研究近况

鸡传染性支气管炎（ＩＢ）是鸡的一种急性、高度接触性传染病。传支病毒（ＩＢＶ）是冠状病毒科冠状病毒属代表种，它以多血清型和高变异性的特征给该病的免疫预防造成很大困难。近几年ＩＢＶ的变异株引起鸡的肾型和腺胃型病在我国广泛流行，而在英国首次发现的变异株７９３／Ｂ引起鸡的胸肌出血型病给欧洲养鸡业带来了很大损失。近１０多年来对ＩＢＶ的变异型的研究已成为兽医界研究的重点课题。下面对该病病毒变异性研究近况介绍如下：一ＩＢＶ的基本构造ＩＢＶ是有囊膜的病毒，呈多形性或椭圆形的病毒粒子，表面有较稀疏的杆状突起。构…     

应用反转录聚合酶链反应检测鸡传染性支气管炎病毒核酸的研究

根据国外报道的鸡传染性支气管炎病（ＩＢＶ）Ｇｒａｙ株的纤突蛋白（Ｓ１）核苷酸序列，自行设计合成了Ｓ１蛋白主要抗原决定簇基因两侧的１对引物，跨幅为１．０ｋｂ。用该引物对从内蒙古、天津、山东等地分离的３株ＩＢＶ进行ＲＮＡ提取，反转录后ＰＣＲ，经琼脂糖凝胶电泳结果表明，３株毒株均获得了与预期一致的ＰＣＲ产物；此外，ＩＢＶＰＣＲ灵敏度的测定结果表明，ＰＣＲ方法可检测出１０ｐｇ的模板，ＰＣＲ酶切结果为，ＨａｅⅢ、ＴａｇⅠ酶对３株ＰＣＲ产物均有１个酶切位点，而ＭｓＰⅠ酶无酶切位点     

传染性法氏囊病病毒VP2基因高变区序列分析

根据传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）ＶＰ２基因ＣＤＮＡ序列,在ＶＰ２基因高变区设计一对引物,用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增ＩＢＤＶ分离株ＪＳ３和ＪＳ４。将扩增片段克隆后以双脱氧链末端终止法测定核苷酸旬。ＪＳ３和ＪＳ４的同源性最高达９８％。与已发表的ｖｖＩＢＤＶ,ＩＢＤＶ变异要ＢＤＶ经典株为ＩＢＤＶ弱毒株核苷酸序列的同尖拨天９２￣９８％之间,根据ＩＢＤＶ的大ＯＲＦ推导出该片段蛋白的氨基酸序更,ＪＳ３和ＪＳ４的     

分泌抗禽呼肠孤病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立与鉴定

采用腹腔的接种１次脾内注射禽呼肠孤病毒（ＡＲＶ）蛋白免疫小鼠，经３次融合后，共筛选８株分泌抗禽呼肠孤病毒（单克隆抗体杂交瘤细胞株，这８株ＭｃＡｂ均可与ＡＲＶＳ１１３３株，ＦＤＯ株发生反应，而与ＩＢＤＶ，ＭＤＶ，ＥＤＳ－７６病毒不发生反应，经亚类鉴定，ＡＥ７，ＡＦ８，ＢＤ１，ＤＨ１０，ＥＥ５为ＩｇＧ１；ＡＤ６，ＣＧ４为ＩｇＣ２ａ，ＡＧ７为ＩｇＧ２ｂ。腹水效价在１０＾３～１０＾５之间。     

BWEL-SPF鸡群对鸡传染性法氏囊病强毒的敏感性试验

用三种不同鸡传染性法氏囊病强毒株,对ＢＷＥＬ－ＳＰＦ鸡群１－１０个家系３周龄鸡进行敏感性试验,观察比较鸡群各家系对不同敏感性,测定不同毒株的毒价。广西强毒株（ＩＢＤＶ－ＧＸ株）〈ＬＤ５０为１０＾５．０／０．２ｍｌ;湖南强毒株,ＬＤ５０为１０＾５．２／０．２ｍｌ;吉林强毒株（ＩＢＤＶ－ＪＬ株）,ＬＤ５０为１０＾５．５／０．２ｍｍｌ,以１００ＬＤ５０攻毒剂量,对ＢＷＥＬ－ＳＰＦ鸡１￣１０家系的致死率为     

PCR法检测血清I型马立克氏病病毒及其敏感性试验的研究

以人工合成的针对血清Ｉ号马立克氏病病毒（ＭＤＶ１）Ａ抗原基因（ｇＡ）部分序列的两端寡聚核苷酸为聚合酶链反应（ＰＣＲ）的引物，分别对马立克氏病病毒血清Ｉ型（京－１株，ＭＤ１１／７５Ｃ株）；２型（ＳＢ－１株）；３型（火鸡疱疹病毒的ＦＣ１２６株）毒株和ＧＡ株ＢａｍＨＩ Ｂ片段的ＰＡＣＹ１８４克隆重组质粒ＤＮＡ进行基因扩增反应及其敏感性试验。结果表明，该引物不仅对ＭＤＶ１具有较强的特异性，而且由此引物引导     

抗鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体中和株的建立

将纯化的鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）组织毒免疫的ＢＡＬＢ／ｃ鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，用ＥＬＩＳＡ，病毒中和试验检测分泌抗体，获得了６株稳定分泌抗ＩＢＤＶ单隆抗体的杂交瘤细胞，命名为ＮＩＢ－１，ＮＩＢ－２，ＮＩＢ－３，ＮＩＢ－４，ＮＩＢ－５，ＮＩＢ－６；６株ＭＣＡｂ均具ＥＬＩＳＡ特性和免疫沉淀特性，亚类鉴定表明，前４株属于ＩｇＧ２ａ，后２株属于ＩｇＧ１。杂交瘤细胞冻存６个月后复苏，均     

IBD抗体与IBDV混合组建的新型IBDV疫苗最佳组合的测定

作者研制了一种新型抗ＩＢＤＶ疫苗。该疫苗是将抗血清中所含的抗ＩＢＤＶ抗体（ＢＤＡ）与活的ＩＢＤＶ在冻干前混合制成。为设置ＢＤＡ与ＩＢＤＶ的不同组合，５￣８０ｕＢＤＡ／５０μｌ与１００ＥＩＤ５０／５０μｌ的ＩＢＤＶ悬液在试验１中混合；在试验２中，１０￣９７７ＥＩＤ５０／５０μｌＩＢＤＶ悬液与２４ｕＢＤＡ／５０μｌ混合。疫苗制备物颈部皮下注射于１日龄ＳＰＦ鸡，利用囊重、囊眼观检查和ＩＢＤＶ抗体效价对不     

禽病原性大肠杆菌I型菌毛单克隆抗体的研制及其对分离株的检测

从禽病原性大肠杆菌分离株ＴＫ３（Ｏ１）提取Ｉ型菌毛免疫ＢＡＩＢ／ｃ小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,获得４株能稳定分泌针对Ｉ型菌毛的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为ａＢ６、ｂＧ５、ｃＦ３和ｃＧ３。单克隆阻断甘露糖敏血凝试验,免疫胶体金和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ试验证明,单抗是Ｉ型菌毛特异的。这些单抗培养上清及腹水的ＥＬＩＳＡ效价为分别为１０＾－２～１０＾－３和１０＾－５～１０＾－６;腹水的平     

复方中药制剂预防IBD的研究

将８０只３５日龄ＳＰＦ鸡随机分为四组：每组２０只，Ｉ组为复方中药制剂组，Ⅱ组为中药配方组，Ⅲ组为ＩＢＤ病变组织裂解物相，Ⅳ组为对照组，用药后第１０天对四且鸡同时用ＩＢＤ强毒攻击，各线的保护率为Ｉ组９５％（１９／２０），Ⅱ组６０％（１２／２０）Ⅲ组７０％（１４／２０），Ⅳ组１５％（３／２０），Ｉ组保护率比Ⅱ组和Ⅲ组高２５～３５％（ｐＨ〉０．０１），比Ⅳ组高８０％（Ｐ〈０．０１）。然后选择ＩＢＤ多发地     

表达嵌合性传染性法氏囊病病毒结构蛋白的重组杆状病毒…

作者对传染性氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）变异株ＧＥＳ的大基因片Ａ编码的ＶＰ３结构基因进行修饰，使之编码中和表位Ｂ６９。该表位只在ＨＢＤ古典株中发现，将可编码ＶＰ，ＶＰ４和修饰的ＩＢＤＶ变株ＶＰ３各结构蛋白的较大片段Ａ的嵌合性ｃＤＮＡ克隆在重组件状病毒中表达。用一组中和性单克隆抗体（ＭＡｂ）对所表达的嵌合性蛋白进行测定，表明该嵌合性蛋白不但包含ＧＬＳ变异株的所有表位，而且包含只在古典株中发现的Ｂ６９中和表     

禽流感RT-PCR诊断法的建立

根据禽流感病毒（ＡＩＶ）Ａ／Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｂｒｅｓｌｉｎ／１９０２（Ｈ７Ｎ７）株的血凝素（ＨＡ）基因参考序列设计合成一对Ｈ７ＨＡ特异引物,并应用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取病毒ＲＮＡ,建立了逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＡＩＶＲＮＡ的方法。应用此法对鸡胚培养的ＡＩＶ尿囊液、ＳＰＦ感染鸡粪便进行了检测,并与琼脂扩散试验和电镜技术作了对比。特异性试验以新城疫病毒（ＮＤＶ）、传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）、传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）、减蛋综合征病毒（ＥＤＳ－７６Ｖ）等的感染鸡胚尿囊液作为对照。结果表明,ＡＩＶ尿囊液ＲＴ－ＰＣＲ全部阳性,ＳＰＦ感染鸡粪便８７份,ＲＴ－ＰＣＲ检出６９份阳性,样品处理浓缩后琼脂扩散检出１１份,电镜检测了２３份样品,仅检出２份阳性。非特异性对照样品经ＲＴ－ＰＣＲ检测全部阴性。将ＡＩＶ感染鸡胚尿囊液作１０倍系列连续稀释,可检出稀释度为１０－２的病毒尿囊液。ＲＴ－ＰＣＲ最早检出时间为感染后第３天,而琼扩和电镜均是７天。该法具有高度的特异性和灵敏性,且节约时间（只需８小时左右）,可从分子水平上对ＡＩＶ进行早期快速诊断和流行病学调查     

分泌抗IBDV独特型抗体细胞株的建立

应用提取纯化的抗ＩＢＤＶ ＩｇＧ免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，其脾细胞与ＳＰ２／Ｏ细胞在ＰＥＧ作用下融合，应用ＥＬＩＳＡ法检测筛选，经有限稀释法克隆２次，获得了２株（２Ｂ６株、５Ｆ４株）分泌抗ＩＢＤＶ独特型抗体的杂交瘤细胞株，并能诱生Ｂａｌｂ／ｃ小鼠产生高效价的含抗ＩＢＤＶ独型抗体腹水。     

复方中药制剂预防IBD的研究

将８０只３５日龄的ＳＰＦ鸡随机分为４组，每组２０只。Ⅰ组为复方中药制剂组、Ⅱ组为中药配方组、Ⅲ组为ＩＢＤ病变组织裂解物组、Ⅳ组为对照组。用药后第１０ｄ对４组鸡同时用ＩＢＤ强毒攻击，结果各组的保护率分别为Ⅰ组９５％（１９／２０）、Ⅱ组６０％（１２／２０）、Ⅲ组７０％（１４／２０）、Ⅳ组１５％（３／２０）。Ⅰ组保护率比Ⅱ组和Ⅲ组高２５～３５％，差异显著；比Ⅳ组高８０％，差异非常显著。说明复方中药制剂对ＩＢＤ有很好的预防效果。