发根农杆菌Ri质粒转化康乃馨初步研究

利用具有Ri质粒的发根农杆菌（Agrobacterium rhizogenes）Pri15834对康乃馨组培苗的带叶茎节进行转化试验。转化后的外植体在K0附加500mg/L羧苄青霉素培养基上培养2～3周后，受感染的伤口部位长出无向地性的毛状根，频率为37.07%。将毛状根切碎分别在K0、K1、K2培养基上继续培养3周，毛状根在K0上表现为无限生长，在K1上主要表现为长愈伤组织，频率为51.42%，而在K2上则主要表现为长绿苗，频率为25%。这说明发根农杆菌的Ri质粒已整合到康乃馨细胞基因组中并得到表达。     

发根农杆菌介导的花生遗传转化体系的建立

[目的]为花生的转基因研究和白芦藜醇的生物技术生产奠定基础。[方法]利用发根农杆菌R1601分别侵染花生的子叶、叶片和茎段,诱导毛状根;利用PCR技术检测毛状根。[结果]叶片和茎段在发根农杆菌R1601侵染后产生毛状根,但叶片诱导率较高,其诱导率达65.6%,更适合作为转化外植体。毛状根除菌后,能在MS培养基上自主生长。PCR扩增表明,T-DNA序列整合进花生的基因组中。[结论]建立了发根农杆菌介导的花生遗传转化体系。     

发根农杆菌Ri质粒T-DNA对杜仲的遗传转化研究

杜仲是中国特有的经济树种,杜仲毛状根能够合成与杜仲含量相当的次生代谢产物。本实验用发根农杆菌ATCC15834分别感染杜仲Eucommia ulmoides Oliv的子叶、叶片、叶柄、下胚轴和根5个营养器官,结果表明杜仲植物的5个营养器官均能单独诱导出大量的毛状根。经PCR检测,发根农杆菌ATCC15834Ri质粒的rolB基因已转入杜仲毛状根基因组中。说明用发根农杆菌诱导杜仲产生大量的毛状根的方法有效,为大规模用发根农杆菌Ri质粒转化到杜仲植物中提供了理论基础。     

发根农杆菌转化三倍体毛白杨

分别用发根农杆菌30148,ATCC 15834和ZALF3种菌株感染三倍体毛白杨叶外植体,获得毛状根。建立三倍体毛白杨毛状根离体培养系统,在含不同激素的培养基上诱导毛状根再生植株。利用PCR方法分别对转化再生植株ro lC,ro lD,及m as基因进行了检测,表明R i质粒的T-DNA已整合进再生植株中。     

发根农杆菌对非洲紫罗兰的转化初报

利用农杆碱型发根农杆菌R1601对非洲紫罗兰无菌苗叶片进行了转化,转化后叶片产生白色茸状毛根,与对照相比有明显的形态差异,离体根能在不含激素的MS液体培养基上自主生长。     

发根农杆菌对栝楼的遗传转化

利用5种发根农杆菌1.2556、A4、LBA9402、R1000、R1601对栝楼组培苗茎段和叶片进行感染,诱导出毛状根,PCR检测结果表明,发根农杆菌Ri质粒的rolB基因已经整合到栝楼的基因组中.     

发根农杆菌诱导毛状根研究进展

检索国内外相关文献,从发根农杆菌的性质、其中含有的Ri质粒、发根农杆菌诱导植物形成毛状根的机制、诱导植物产生毛状根的特点、毛状根的转化方法及鉴定和毛状根的应用等方面进行综述,为其广泛深入研究提供参考。     

发根农杆菌介导的橡胶树遗传转化体系的建立

[目的]建立新的橡胶树遗传转化体系,为利用基因工程技术研究橡胶树提供基础。[方法]利用发根农杆菌R1601、15834和1.2556 3个株系分别侵染橡胶树热研7-33-97的叶片和茎段,诱导毛状根,并利用PCR技术检测诱导得到的毛状根。[结果]在相同的条件下,仅橡胶树茎段在发根农杆菌R1601侵染后产生毛状根,其诱导率达36.6%;PCR结果表明,T-DNA序列已整合进橡胶树的基因组中。[结论]初步建立了发根农杆菌介导的橡胶树遗传转化体系。     

发根农杆菌诱导苦参毛状根的研究

[目的]为苦参有用成分的大量生产提供新的途径。[方法]利用发根农杆菌R1601分别对药用植物苦参的根段、茎段、叶片、子叶进行侵染。[结果]在相同条件下,叶片、茎段和根段成功诱导出毛状根,但诱导频率不同,茎段作为外植体诱导率最高,达到26.7%,更适合作为外植体选用。毛状根除菌后,能在MS培养基上自主生长。[结论]发根农杆菌的RiT-DNA基因已经整合到苦参基因组中。该研究为采用生物技术生产苦参活性成分奠定了基础。     

发根农杆菌诱导栝楼毛状根的研究

栝楼是一种重要的药用植物,提取物具有多种活性。以栝楼的无菌苗为材料,用A4、15834和LBA9402等3种发根农杆菌浸染茎段,诱导毛状根生成,并研究毛状根分化不定芽的条件。结果显示,3种农杆菌都能诱导栝楼毛状根产生,其中LBA9402诱导率最高,达到52%,且毛状根在6-BA 2.0 mg.L-1 KT 2.0 mg.L-1 NAA 0.5 mg.L-1的培养基上,不定芽分化率达到了24%。对毛状根进行基因组DNA提取,PCR扩增检测出rolB基因的存在,初步证明R i质粒T-DNA已经整合到栝楼基因组中。     

茶树品种利川红不定根的解剖和屏障结构时空发育特征研究

对茶树品种利川红[Camellia sinensis(L.)O.Ktze.cv.Lichuanhong]不定根的解剖和屏障结构时空发育特征采用不同组织化学染色方法,在光学和荧光显微镜下观察形态结构。结果表明,利川红不定根初生结构由表皮、皮层和维管柱组成,皮层有内、外皮层分化,维管柱由初生木质部和初生韧皮部组成。次生结构由次生维管组织和木栓层组成,次生维管组织结构由次生木质部和次生韧皮部组成,以次生木质部为主。利川红不定根初生结构的屏障结构由外侧的具凯氏带、木质化和栓质化的表皮与外皮层组成,内侧为凯氏带和栓质化,微弱木质化的内皮层组成。次生结构的屏障结构为栓质化和木质化的木栓层。利川红不定根屏障结构具有适应旱生环境的特征,并可调节根尖的水与离子运输,对根系具有保护作用。     

茶树新梢“持嫩性”研究进展

通过探讨嫩度与“持嫩性”的关系、总结前人关于嫩度评价方法的研究进展,提出了嫩度评价体系的建立是开展“持嫩性”专项研究的基础与前提,认为质构仪可以用于评价新梢的嫩度,“持嫩性”将成为茶业科学领域的研究热点。     

碧螺春茶树单株的选择研究

[目的]以洞庭碧螺春专用茶树品种选育为目标,开展碧螺春优质茶树[Camellia sinensis(L.)O.Ktze.]单株选择研究。[方法]根据茶叶品质、产量、芽叶发育期、抗性等性状指标,筛选洞庭群体种优良单株。[结果]d-x-1、d-x-8、d-x-24单株的感官审评总得分和单个香气得分均较对照和其他株系高,春茶开采期比其他株系稍早(d-x-24稍晚2 d),春茶发芽密度高于对照和其他株系,鲜叶产量、百芽重、抗逆性等与对照和其他株系相差不多。总体上,这3个株系综合性状比对照和其他株系优异。[结论]筛选出d-x-1、d-x-8和d-x-24共3个优质碧螺春茶树新株系,为碧螺春品种选育奠定了基础。     

农杆菌介导水稻转化条件的优化

应用TAC（transformation-competition artificial chromosome)载体和pCAMBIA1300分别与农杆菌LBA4404组合转化水稻成熟胚愈伤组织，探索了农杆菌转化的有关因素。结果表明：共培养培养基上铺上1张滤纸有利于控制农杆菌的过度生长；粳稻品种转化率明显高于籼稻；干燥处理能有效杀死农杆菌，并有利于提高转化率，预再生可提高抗性愈伤组织的再生率而提高转化率。     

茶小孢子及雄配子体的超微结构

①从茶的造孢细胞到成熟花粉粒,细胞质内的细胞器结构经历了简单→复杂→简单→复杂的周期性变化过程,其数量亦表现少→多→少→多的周期性。②生殖细胞刚形成时,外面具拱形壁,当它游离在营养细胞中时,此壁消失。在成熟花粉粒中生殖细胞外又出现波浪状扭曲的壁。二梭花粉粒初期生殖细胞中的质体有淀粉积累。③在花粉母细胞和二细胞花粉初期的营养细胞的细胞质中有大量同心内质网复合体结构,其内常包裹着质体、线粒体、核糖体和小泡等细胞器。讨论了细胞器的结构和复合体数量周期性变化的意义和同心内质网复合体的功能等。     

茶树特色新品种乌蒙早的选育

茶树特色新品种——‘乌蒙早’是从乌蒙山野生大茶树群体品种中经变异单株系统选育而成,其品种性状突出,特色明显,与对照福鼎大白茶比较,具有发芽早,生长势强,产量高,发芽整齐,芽叶嫩绿肥壮,用其加工的扁形和毛峰形名优茶,其外形绿润显毫,香气栗香浓郁持久,滋味醇厚回甘,产品风格十分突出,是四川省近几年来新育成的早生、优质、高香和适制名优绿茶的突破性优良品种.     

农杆菌介导的MADS-box基因转化黄瓜初步研究

试验通过叶盘转化法,利用根癌农杆菌介导,将从黄瓜中克隆到的MADS-box同源基因—CSMADS06基因,转化到烟草和2种不同品系的黄瓜S06和S52中,经过除草剂筛选获得14株转化烟草和28株转化黄瓜。PCR检测和GFP荧光检测证实,外源的CSMADS06基因已转入这些植株中。阳性率分别为2.36%(烟草),4.1%和2.9%(黄瓜)。抗性植株已开花结果并获得子一代植株。     

广西姑辽野生茶树叶片解剖结构及特性分析

采用改良石蜡切片方法制片、光学显微镜观察,对广西姑辽野生茶树资源13个株系叶片进行解剖学研究,通过叶片解剖结构特征鉴定和分析它们的潜在生产力、适制性和抗逆性.结果表明,姑辽野生茶树资源的生产力指数为2 471.31～4 295.05,潜在生产力普遍较高,达到或超过广西茶树新品种品系的水平;茶多酚含量特别高,主要适制红茶;叶片均具有明显的抗旱、抗寒和抗病虫结构特征,表现出较强的抗逆力;生产性状在株系间存在着一定的差异.其中,生产力指数高、抗逆性强、红茶品质兼优等综合性状较好的株系是姑辽41、姑辽37和姑辽39.     

发根农杆菌菌株和烟草品种对毛状根诱导率的影响

采用3×3双因子设计,研究发根农杆菌菌株和烟草品种对烟草毛状根诱导率的影响。结果表明:各菌株在不同烟草品种上均诱导出毛状根,经PCR技术检测,确定了发根农杆菌Ri质粒的rolB基因已整合到烟草基因组中。不同烟草品种和发根农杆菌菌株均显著影响毛状根的诱导率;Sumxun毛状根平均诱导率最高,达到了53.4%,其适宜菌株为A4和ATCC15834;K326为34.2%,其适宜菌株为R1000;云烟85为25.6%,其适宜菌株为ATCC15834。