活性干酵母流加培养的动力学研究

研究了活性干酵母(ADY)流加培养的动力学,前期主要采用分批培养的形式,当总糖降至10 g.L-1时,进入补料流加阶段.通过动力学分析得到了2个不同阶段的模型方程,通过理论计算与试验数据的比较,表明该模型能较好地对培养过程进行描述.在流加培养的动力学模型的基础上,确定了优化补料的方程,在实际应用中可采取指数逼近的方法实现补料的优化流加.     

流加培养方式对大肠杆菌XD-12发酵的影响研究

[目的]研究大肠杆菌流加培养方式,提高转氨酶供体——大肠杆菌XD-12的发酵浓度。[方法]通过研究碳源流加、氮源流加、pH控制流加对发酵的影响,获得了优化的培养条件。[结果]产转氨酶大肠杆菌的最佳培养条件为：温度37℃,搅拌转速500 r/m in,通气量1.5 L/m in,培养基初始pH为7.0,控制发酵过程pH为7.5,初始葡萄糖浓度5 g/L,初始氮源为5 g/L蛋白胨＋1.5 g/L牛肉膏,从葡萄糖浓度下降为2 g/L开始每隔2 h间歇流加120 g/L的糖,从8 h起每隔2 h间歇流加15 g/L蛋白胨＋4.5 g/L牛肉膏。在此条件下培养24 h,大肠杆菌的菌体干重浓度达9.66 g/L,较分批培养提高了104.7%。[结论]这对降低酶法制备L-苯丙氨酸的生产成本、提高生产效率、满足日益增长的市场需求具有重要的现实意义。     

用流加培养技术在光生物反应器中培养新月菱形藻的研究

应用微生物流加培养技术对新月菱形藻Nitzschia closterium分别进行恒速流加培养、变速流加培养,并与一次性培养进行了比较.结果表明:不同的流加方式对新月菱形藻的生长、蛋白质、胞内多糖产量影响显著;恒速流加培养10 d的藻密度、蛋白质及多糖的含量分别为(1.901±0.050)×107cell/mL、(42.82±4.03)mg/L、(95.68±3.99)mp/L,是一次性培养的2.29、1.62、2.15倍;在变速流加培养中,当流加控制因子K=0.167时,藻密度、蛋白质、多糖的含量分别是一次性培养的4.83、6.23、6.12倍.     

甲基叔丁基醚对斑马鱼及中国仓鼠卵巢细胞的毒性效应

[目的]研究甲基叔丁基醚(MTBE)对斑马鱼和中国仓鼠卵巢细胞的毒性作用及氧化应激效应,为其科学、合理应用提供依据。[方法]应用半静态试验法研究不同浓度MTBE对斑马鱼的急性毒性效应,以中国仓鼠卵巢(CHO)细胞为模型,分析不同浓度MTBE对CHO细胞增殖水平和氧化应激相关酶活力水平的影响。[结果]MTBE对斑马鱼的48 h LC50值为71.5 mg/L;在细胞试验中,当MTBE暴露浓度高于5.0 mmol/L时,CHO细胞增殖水平受到明显抑制(P0.05);当MTBE暴露浓度达到50.0 mmol/L时,SOD活力明显上升(P0.05)。当MTBE浓度达到25.0 mmol/L时,CAT活力达到最大值且与对照组差异显著(P0.05);当MTBE浓度达到25.0 mmol/L时,CHO处理组GSH-Px活力明显上升(P0.05)。[结论]MTBE暴露可以诱导斑马鱼和CHO细胞的毒性作用,而氧化应激酶活力水平的改变可能是MTBE毒性作用之一。     

分批与流加培养对萼状粒毛盘菌生物量和胞外多糖产量的影响

通过摇瓶实验对萼状粒毛盘菌(Lachnumcalyculiforme)生物量及其产胞外多糖的发酵条件进行研究;并在5L发酵罐中进行分批与流加培养,比较二者对萼状粒毛盘菌生物量及其多糖产量的影响.结果表明:在25℃时,粒毛盘菌生物量和产胞外多糖的最佳碳、氮源及其浓度为葡萄糖30g L-1、酵母膏5g L-1,pH值为6.0;10g L-1橄榄油能显著加速菌丝体的生长,而10g L-1大豆油能明显提高胞外多糖的产量;分批培养时粒毛盘菌的最大生物量和多糖产量分别为6.40和8.28g L-1,而在葡萄糖浓度低于5g L-1时进行流加培养可以显著提高粒毛盘菌的生物量和多糖产量,最大生物量和多糖产量分别为7.72和11.82g L-1.     

Vero细胞体外培养条件的优化

为了优化一种适合Vero细胞体外快速生长,且生长状态良好的培养条件,笔者对比了2种不同培养条件下的细胞生物学观察结果,Vero细胞经台盼兰活体染色,改进培养条件后细胞活体率为97.8%,比原始培养条件下活体率明显增高,且该方法具有简便、易行、成本低等优点,值得进一步推广应用。     

中国仓鼠卵巢细胞和人胚肾T细胞骨架及其迁移特性的比较

【目的】比较中国仓鼠卵巢(CHO)细胞和人胚肾T(HEK293T)细胞的迁移能力,筛选适用于细胞骨架形态和外源基因对细胞迁移影响研究的细胞系。【方法】通过免疫荧光组织化学比较CHO和HEK293T细胞骨架的形态差异,通过延时成像和划痕试验比较细胞迁移能力,通过免疫印迹比较2株细胞系细胞骨架基因的相对表达,并从细胞骨架差异和结构基因的选择性表达方面解释细胞迁移能力的差异。【结果】CHO和HEK293T细胞系的细胞骨架在形态上存在较大差异,HEK293T细胞系的核质比是CHO细胞的2.25倍;CHO细胞比HEK293T细胞的迁移能力强,是HEK293T细胞的2.9倍;2种细胞内α-Tubulin/β-Actin的比率存在较大差异,CHO是HEK293T的1.2倍。【结论】细胞中微管微丝的差异性分布及结构基因Tubulin和Actin的选择性表达是细胞迁移特性不同的关键因素。CHO细胞适用于涉及细胞骨架形态和外源基因对细胞迁移影响的研究,HEK293T细胞不适用于此类研究。     

台湾金线莲细胞悬浮培养及其培养条件优化的研究

[目的]研究台湾金线莲细胞悬浮培养B5培养基的配方.[方法]以新鲜叶片为材料,经过初代培养、固体培养和继代培养,建立悬浮细胞培养体系,正交设计试验优化培养基配方.[结果]B5培养基中,影响悬浮培养因素的大小依次为大量元素浓度、6-BA、2,4-D、蔗糖、IAA.[结论]选用2％蔗糖、0.5 mg/L 6-BA、0.2 mg/L IAA、0.6 mg/L 2,4-D、1/2浓度大量元素的B5培养基培养悬浮细胞,15 d后吸光度达4.425.     

草莓细胞悬浮培养条件优化及植株再生的研究

以不同基因型草莓花药为试材,建立草莓细胞悬浮系,研究结果表明:悬浮培养初期的褐化程度和褐化恢复的快慢可作为判别建成稳定悬浮细胞系的一个重要指标,并采用分步培养法获得了明旭的植株再生。     

基于PK15细胞的猪圆环病毒2型全悬浮培养工艺

[目的]筛选1株适合PCV2病毒生产的悬浮细胞株,摸索PCV2悬浮生产工艺(病毒种毒来源、MOI及收获时间),为大规模悬浮培养技术制备疫苗提供试验依据.[方法]使用有限稀释法对PK15原细胞稀释后接种于96孔板,每2 d观察细胞生长和形态,待细胞90％长满后,将细胞从96孔板陆续扩至24孔板、12孔板、6孔板,最后到方...     

基于加性DEA-Tobit模型的中国水资源利用效率分析

选取了我国2004~2013年31省市的数据,并依据改进的加性DEA模型对我国的水资源利用效率进行了评价,然后采用Tobit模型分析了我国水资源利用效率的影响因素。研究结果表明:在时间序列上,我国的水资源利用效率呈U型;东、西部的水资源利用效率在2008年之后呈上升趋势,并且与中部的差距不断拉大;上海、江苏的水资源利用效率逐年上升,在2013年之前达到了DEA有效;经济水平对水资源利用效率有明显的正相关关系,产业结构、政策因素和基础设施建设水平对水资源利用效率有明显的负相关关系。     

基于加性DEA-Tobit模型的中国水资源利用效率分析

选取了我国2004²013年31省市的数据,并依据改进的加性DEA模型对我国的水资源利用效率进行了评价,然后采用Tobit模型分析了我国水资源利用效率的影响因素。研究结果表明:在时间序列上,我国的水资源利用效率呈U型;东、西部的水资源利用效率在2008年之后呈上升趋势,并且与中部的差距不断拉大;上海、江苏的水资源利用效率逐年上升,在2013年之前达到了DEA有效;经济水平对水资源利用效率有明显的正相关关系,产业结构、政策因素和基础设施建设水平对水资源利用效率有明显的负相关关系。     

新生牛睾丸支持细胞的体外培养及鉴定分析

为探究支持细胞的体外培养特性,以新生牛睾丸组织为试验材料,利用组合酶消化法将其解离成单细胞悬液,并采用差速贴壁法纯化支持细胞后进行体外培养与鉴定.结果表明:支持细胞体外培养能够传至第20代,并且随着传代次数的增加,支持细胞的增殖速度越来越慢;添加2％血清浓度的DMEM/F-12的培养基即可用于支持细胞的体外培养;免疫组化染色显示,所培养的细胞内波形蛋白呈阳性;RT-PCR检测结果可见支持细胞标志基因SCF和GDNF的表达;第15代的支持细胞内含有正常的二倍体核型.     

Marc-145细胞微载体悬浮培养及PRRSV增殖工艺的建立

采用分批式培养方法研究了Marc-145细胞微载体悬浮培养及猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)增殖工艺。结果表明,在3 g/L的微载体用量下,采用1 ml 3×105个细胞的初始接种密度及培养至第3 d进行换液操作工艺可以获得最佳的Marc-145细胞生长效能。采用感染复数为0.05的接毒比例及接毒后48 h收获毒液可获得最高的PRRSV增殖效价。在5 L反应器中重复验证上述工艺,获得较为稳定的试验结果,最大细胞密度均可高于1 ml 2×106个细胞,PRRSV的增殖效价均高于108.0TCID50/ml。为猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗的生物反应器规模化生产奠定了基础。     

霉形体污染培养细胞的救治试验

<正>随着现代生物技术的发展,细胞培养技术在单克隆抗体制备、病毒疫苗的研制、病毒病的诊断等领域的应用越来越广泛,但细胞培养污染尤其是霉形体的污染的问题一直没有理想的解决方法,大多被迫采用淘汰污染细胞株的办法,但对一些不可复得的珍贵细胞株,采用此法造成的损失往往是无法估量的。     

机械搅拌式生物反应器悬浮培养293T细胞生产慢病毒的工艺

采用L型大泡通气系统机械搅拌式生物反应器培养293T悬浮细胞和规模化生产慢病毒载体,通过4种方法驯化293T悬浮细胞,对其慢病毒包装能力进行验证,并建立种子扩增链,在5.5 L工作体积生物反应器中绘制悬浮细胞生长曲线和包装慢病毒.结果表明,采用体积分数50％的293 CD05 Medium无血清基础培养基和体积分数50...     

昆虫细胞BTI-Tn-5B1-4和Sf-9的无血清培养及其特性研究

本研究对目前应用最多的两种昆虫细胞BTI-Tn-5B1-4和Sf-9在无血清培养基Sf-900Ⅲ中进行驯化和培养,现已稳定传至45代以上。比较了两种细胞在Sf-900Ⅲ和有血清培养基TNM-FH中的细胞形态、生长速率、病毒产量和重组蛋白表达水平。结果表明,在Sf-900Ⅲ中Sf-9细胞比TNM-FH培养的略大,BTI-Tn-5B1-4的圆形细胞增多,BTI-Tn-5B1-4和Sf-9在Sf-900Ⅲ中生长速度快,群体倍增时间分别为18.5h和21.7h,而在TNM-FH中,BTI-Tn5B1-4和Sf-9的群体倍增时间分别为21.9h和25.4h;在两种培养基中BTI-Tn-5B1-4和Sf-9细胞的病毒感染率、多角体产量和β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)的表达水平均无明显差异,而碱性磷酸酶(secreted alkaline phosphatase,SEAP)在Sf-900Ⅲ中的表达水平明显高于TNM-FH中的水平。     

樟叶越桔悬浮培养细胞次生代谢产物的LC−MS分析

采用LC−MS联用技术,对樟叶越桔悬浮培养细胞的次生代谢产物进行分析鉴定;应用面积归一法计算出各代谢物的相对含量。结果表明：鉴定出208种化合物,包括酚酸类79个、黄酮类70个、萜类15个、原花青素类12个、苯丙素类12个、生物碱类11个和其他类衍生物9个,相对含量分别为33.244%、23.167%、19.786%、15.138%、1.401%、2.200%和5.064%。酚酸类化合物中包含酚苷34个和其他酚酸衍生物45个,相对含量分别为22.072%和11.172%,黄酮类化合物中包含黄酮苷类58个和其他黄酮类衍生物12个,相对含量分别为13.765%和9.402%。值得注意的是,相对含量大于1%的化合物共有26个,相对含量总和为72.180%,为樟叶越桔悬浮培养细胞的主要代谢产物。其中,含量最高的化合物为原花青素A2（8.655%）,其次为儿茶素（8.030%）、马斯里酸（7.503%）、2–羟基齐墩果酸（7.318%）和樟叶越桔苷B（3.705%）。研究结果将为进一步阐明樟叶越桔中咖啡酰熊果苷类物质的高产机制提供科学依据。