不同凝乳酶对羊奶干酪成熟期间蛋白质降解和感官品质的影响

以西农萨能山羊鲜奶为原料,采用Colby羊奶干酪加工工艺,研究了羔羊皱胃酶、微生物凝乳酶和猪胃蛋白酶对羊奶干酪成熟期中蛋白质降解和感官品质的影响。蛋白质降解测定结果表明,在干酪成熟过程中残留微生物凝乳酶对酪蛋白分解能力最强,猪胃蛋白酶最低,羔羊皱胃酶居中。感官品质评定三种酶处理在滋气味和组织状态上存在明显差异,以羔羊皱胃酶处理组打分最高,猪胃蛋白酶处理组打分最低。在纹理图案、外形、色泽三方面三种酶间无显著差异。综合评定认为羔羊皱胃酶对干酪蛋白质分解速度适中,容易控制成熟,产品感官品质良好,在三种酶中应用效果最佳,可广泛使用。     

乙醇法沉淀茶多糖的抗氧化活性评价

以粗茶多糖提取物(TPs-CK)为原料,设置70%和80%2个乙醇浓度沉淀制备茶多糖样品TPs-70和TPs-80,通过检测其DPPH清除活性和还原力变化,对茶多糖样品进行抗氧化活性评价。结果表明,70%浓度乙醇更适宜于沉淀茶多糖,可溶性蛋白含量低,DPPH清除率和还原力变化试验表明,茶多糖TPs-70和TPs-80极显著性低于TPs-CK和抗坏血酸,两者之间未见显著性差异,TPs-80略低于TPs-70;检测分析茶多糖样品中抗氧化组分含量发现,茶多糖、茶多酚、总黄酮等组分皆有析出,与TPs-CK相比,茶多糖样品TPs-70和TPs-80中茶多酚和总黄酮含量呈极显著性降低。相关性分析表明,茶多糖、茶多酚和总黄酮与茶多糖样品抗氧化活性表达呈正相关,茶多酚呈显著性正相关。综上所述,70%浓度乙醇更适宜于沉淀制备茶多糖样品,且抗氧化活性强。     

不同凝乳酶加工的羊奶干酪成熟期微生物变化

以西农莎能奶山羊的新鲜奶为原料 ,用微生物酶、牛皱胃酶和胃蛋白酶等 3种凝乳酶加工硬质干酪 ,检测其不同成熟期细菌总数、乳酸菌、大肠菌群、酵母和霉菌含量的变化 ,并对不同成熟期间的干酪进行感官综合评定。结果表明 ,微生物酶加工的干酪 ,在成熟第 60天其品质达到优良 ,而另 2种凝乳酶加工的干酪 ,在成熟第 90天其品质可定为优良。数据统计分析表明 ,不同凝乳酶加工的干酪 ,在其成熟期间各种微生物变化规律以及干酪品质明显不一致 ,并且干酪品质与微生物的数量和种类密切相关     

不同沉淀方法提取柚皮果胶的研究

柚皮经盐酸溶液提取而得果胶提取液，分别以醇沉法和盐析法从提取液中沉淀果胶．研究并获得了两种沉淀方法的最佳沉淀条件，比较了不同沉淀方法的乙醇消耗量，探索了不同沉淀方法对果胶沉淀得率和品质的影响．结果表明：醇沉法所消耗的乙醇量几乎为盐析法乙醇消耗量的两倍．盐析法能大大降低乙醇使用量，省去稀酸提取液浓缩工序和减少乙醇回收量，节省能耗，降低生产成本．并能保证较高的沉淀得率和果胶品质。     

海带中褐藻糖胶的不同提取纯化方法的研究

[目的]探讨提取条件对褐藻糖胶得率的影响,比较CTAB沉淀法和传统的乙醇沉淀法纯化褐藻糖胶的效果。[方法]以采自山东青岛海域的海带为原料,以褐藻糖胶得率为指标,考察了热水酸提法单因素实验的时间,温度,pH值,V/W(用水体积/干海带质量)4个因素对褐藻糖胶得率的影响;以褐藻糖胶得率和纯度为指标,比较了乙醇沉淀法和CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)沉淀法这2种纯化方法。[结果]褐藻糖胶得率随着时间的延长,pH值升高,V/W增大呈先升高后下降的趋势;而随着温度的上升,褐藻糖胶得率则不断升高。CTAB沉淀法所得的多糖得率和纯度分别为1.44%和45.3%,均高于乙醇沉淀法的。[结论]CTAB沉淀法提取褐藻糖胶优于传统的乙醇沉淀法。     

苍白杆菌SY286抑菌活性蛋白稳定性分析

利用饱和硫酸铵沉淀法从苍白杆菌(Ochrobactrum sp.)SY286发酵滤液中提取抑菌活性蛋白,通过温度、酸碱度、紫外线以及蛋白酶对活性物质的影响,测定活性物质的稳定性.结果表明,经60％饱和硫酸铵溶液盐析出的活性蛋白对葡萄霜霉病菌的抑菌活性最强,抑制率达81.98％.温度、酸碱度以及紫外线对抑菌粗提蛋白的活性...     

西农萨能羊凝乳酶原基因的克隆与原核表达

【目的】克隆西农萨能羊凝乳酶原基因并进行原核表达,对表达产物凝乳酶原复性后进行活性检测,为西农萨能羊凝乳酶制剂的微生物发酵生产奠定基础。【方法】从西北农林科技大学西农萨能羊原种场新生公羔羊的皱胃组织中提取总RNA,通过RT-PCR方法获得西农萨能羊凝乳酶原前体的编码序列,纯化后与pMD-18T载体连接,转化大肠杆菌JM109,通过双酶切和序列测定,获得了凝乳酶基因全长编码区序列。将该基因连接到原核表达载体pET-30a中,构建重组菌pET-30a/Chymosin,经酶切、测序鉴定后进行凝乳酶的小量表达、大量表达、Western杂交鉴定、纯化、复性和活性测定。【结果】通过RT-PCR方法获得了西农萨能羊凝乳酶原前体的编码序列,并构建了重组菌pET-30a/Chymosin;通过体外原核表达获得了西农萨能羊凝乳酶原,将酶原进行复性后测得重组菌酶活力为93.2U/mL。【结论】利用西农萨能羊凝乳酶原基因,通过构建原核表达载体和体外表达可以得到凝乳酶原,通过蛋白纯化和复性可得到有活性的凝乳酶。     

微小毛霉凝乳酶的分泌表达、产物纯化及鉴定

采用基因工程的方法对微小毛霉(Mucor pusillus)凝乳酶进行分子改造,获得适于乳品工业生产用的凝乳酶,克隆到了微小毛霉凝乳酶基因,构建了酵母表达质粒pPIC9K/M。线性化后电击转入毕赤酵母GS115,在甲醇诱导下进行凝乳酶的初步发酵试验,通过pH反应及酶抑制反应试验证明,重组凝乳酶获得了分泌表达。SDS-PAGE分析表明重组凝乳酶的分子量约为46 kD,与理论值(45.3 kD)基本相符,培养基上清液中凝乳酶的活性为311.8 U/mL,纯化的总回收率为51.89%,纯度达到92%。     

不同浓度乙醇对桦褐孔菌提取物抗氧化活性的影响

以样品的总还原力、抗氧化能力、DPPH自由基清除能力为评价指标,研究了不同浓度的乙醇对桦褐孔菌提取物抗氧化活性的影响。结果表明:当乙醇浓度为65%时,桦褐孔菌提取物的抗氧化活性较强,其多酚含量和总还原力分别为(12.04±0.53)mg/g、(124.56±2.81)mg/g(维生素C相当量),FRAP值为(1.42±0.04)mmol/g(FeSO4.7 H2O相当量)。提取物浓度为400μg/mL时,DPPH自由基清除率为(78.05±3.41)%。     

不同保存方法对重组大肠杆菌菌株活性的影响

[目的]探讨不同重组大肠杆菌菌株保存的方法,找出其保存的最适条件。[方法]以携带质粒pcDNA3的大肠杆菌DI-lSct为研究对象,分析了4oC冷藏和一70℃冷冻保存对菌株活性的影响。[结果]4℃条件下,高稀释度的菌液中活细胞教随着时间的延长而逐渐上升,到第7天时达到最高峰,随后呈现逐渐下降的趋势-70℃条件下,菌液OD600值为0．8,甘油终浓度为8％的处理组,在各保存时间段的活细胞数均显著高于其他组.[结论]4℃短期保存重组菌株时,菌液最佳存放时间为7d左右;-70℃长期保存时,宜采用对数生长期的细菌,且保持甘油工作浓度8％为宜。     

南五味子不同提取方法的乙醇提取物抑菌活性研究

以金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、乙型副伤寒沙门氏菌等3种食品常见致病菌为供试菌,探讨南五味子三种不同提取方法(超声波、微波、回流)所得乙醇提取物对致病菌的抑制作用。结果表明:南五味子超声波、微波、回流提取法所得乙醇提取物对3种致病菌均具有良好的抑制作用,抑菌圈直径均在20 mm以上。其中,南五味子超声波提取所得乙醇提取物对金黄色葡球菌、大肠杆菌、乙型副伤寒沙门氏菌的抑菌圈和MIC分别为25.51 mm和3.2 mg·m L-1、22.43 mm和6.4 mg·m L-1、20.19mm和25.6mg·m L-1。结论:南五味子超声波提取法所得乙醇提取物对3种致病菌的抑制作用最强,其次为回流法和微波法。     

不同品种辣椒乙醇提取物抑菌活性的研究

[目的]为研究不同品种、不同部位辣椒素的抑菌效果提供依据。[方法]采用碱性乙醇法分别提取3种辣椒果皮和籽粒中的辣椒素,以金黄色葡萄球菌、酿酒酵母、黑曲霉作为供试菌对乙醇提取物进行抑菌活性的测定。[结果]3种辣椒中辣椒素含量大小依次为朝天椒野山椒长辣椒。辣椒皮中的辣椒素含量是辣椒籽中的1.5～3.9倍。在试验浓度范围(0.5～1.5 mg/ml)内,3种辣椒的乙醇提取物对3种供试菌都具有明显的抑菌活性,其中野山椒的抑菌活性最高,朝天椒和长辣椒的抑菌活性基本相同。[结论]3种辣椒的果皮和籽粒都含有辣椒素类物质,并具有较好的广谱抑菌活性。     

微小毛霉凝乳酶基因的克隆及在毕赤酵母GS115中的表达

以微小毛霉基因组为模板,PCR扩增得到凝乳酶结构基因,经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切后,连接穿梭载体pPIC9K,转化大肠杆菌感受态细胞DH5α,并测定其核苷酸序列。测序结果证实扩增得到的片段为凝乳酶基因,与GenBank报道的序列（No.X06219）存在6对碱基的区别。将重组质粒电转化毕赤酵母GS115,构建重组菌P.pastorisGS115/pPIC9K-m cp,通过筛选得到抗G418浓度达到3.0 mg/m l、具有多拷贝基因的整合重组菌pPIC9K-m cp-03。用甲醇诱导进行初步发酵试验,测得该重组菌凝乳酶活力为5 660 U/m l,比微小毛霉发酵液提高50多倍,且发酵液电泳结果表明毕赤酵母自身分泌的蛋白很少,只能看到约38.5 ku的凝乳酶蛋白条带。     

玉米须不同浓度乙醇提取物的抗氧化活性比较

目的:优选出玉米须乙醇提取物抗氧化活性的最佳浓度。方法:分别取20%、40%、60%、80%和无水乙醇经超声提取后的浓缩液,利用2种体外抗氧化模型对他们的抗氧化活性进行比较分析。方法:精密称取等量干燥后的玉米须粗粉,分别用5种不同浓度乙醇超声提取,提取液经浓缩,利用DPPH法和FRAP法测定其抗氧化作用。结果:从20%乙醇到80%乙醇提取液的抗氧化能力依次增强,而无水乙醇最弱。结论:80%乙醇抗氧化能力最强,这主要是玉米须中黄酮类成分。     

酵母乙醇提取物对重组大肠杆菌外源蛋白表达的影响

酵母乙醇提取物是利用啤酒干酵母经培养发酵后提取的富含多种活性物质的混合物。初步实验研究发现,该物质对大肠杆菌蛋白表达有明显促进作用。为了进一步研究其对蛋白表达的作用,以E.coli BL21(DE3)/p GEX-4t-1-ggt为主要研究菌,以2 g·L-1乳糖作为诱导剂,研究酵母乙醇提取物对γ-GGT蛋白表达的作用。研究发现,分批添加终浓度10 g·L-1的酵母提纯提取物到2 g·L-1的乳糖为诱导剂的培养基中可以显著提高γ-GGT蛋白的表达及宿主菌的生长,蛋白表达量比1 mmol·L-1 IPTG诱导效果高10%~50%,菌体密度提高1.75~3倍左右。对于其他的重组蛋白及表达宿主有相似的作用。酵母乙醇提取物与乳糖组成的复合制剂可以有效替代有毒性的IPTG作为诱导剂的使用,为大规模诱导蛋白表达奠定了基础。     

不同提取方法对北五味子提取物抑菌活性的影响

[目的]比较不同提取方法北五味子提取物抑菌活性,为进一步开发利用北五味子,增加其附加价值提供参考。[方法]采用超临界CO2萃取、乙醇提取和水提等方法对北五味子成分进行提取,研究其提取物抑菌活性。[结果]北五味子提取物对供试茵有一定抑制作用;乙醇提取物对2种菌的抑制效果均高于超临界提取物和水提取物。[结论]用醇提取法北五味子提取物抑菌活性较好,这为进一步开发利用北五味子,增加其附加价值提供了参考。     

四氢嘧啶对热变性凝乳酶复性作用的研究

[目的]加深对部分失活的凝乳酶复性作用的了解,为热稳定性研究中部分失活态凝乳酶的制备提供参考。[方法]研究了四氢嘧啶存在的条件下,复性时间、热处理时间和热处理温度等因素对凝乳酶复性作用的影响。[结果]随着复性时间的延长,凝乳酶的活力逐渐上升。凝乳酶的复性主要发生在前24 h,36 h后凝乳酶活力基本保持稳定,复性后凝乳酶相对酶活力最高可提升21.8百分点,能够测到凝乳酶活力(相对酶活力损失93.3%)的热处理时间,从6 min延长到12 min。在酶活力损失相近时,含四氢嘧啶的凝乳酶在较高温度下(68~70℃)保温较短时间(1~5 min),复性所致的相对酶活力提升显著高于在较低温度下(61~65℃)长时间保温(30~180 min)。[结论]酶的热失活处理的温度和时间对酶分子结构的影响效应并不相同,较长时间的热失活处理比短时高温对酶结构的破坏更彻底。     

不同品种辣椒乙醇提取物抑菌活性的研究(英文)

[目的]为研究不同品种、不同部位辣椒素的抑菌效果提供依据。[方法]采用碱性乙醇法分别提取3种辣椒果皮和籽粒中的辣椒素,以金黄色葡萄球菌、酿酒酵母、黑曲霉菌作为供试菌对其乙醇提取物进行抑菌活性的测定。[结果]3种辣椒中辣椒素含量依次为:朝天椒>野山椒>长辣椒。辣椒皮中的辣椒素含量是辣椒籽中的1.5～3.9倍。在试验浓度范围内(0.5～1.5mg/ml),3种辣椒的乙醇提取物对3种供试菌都具有明显的抑菌活性,其中野山椒的抑菌活性最高,朝天椒和长辣椒的抑菌活性基本相同。[结论]3种辣椒的果皮和籽粒都含有辣椒素类物质,并具有较好的广谱抑菌活性。     

不同提取方法对佛手多糖性质和乙醇脱氢酶活性的影响

[目的]研究不同提取方法对佛手多糖理化性质及乙醇脱氢酶活性的影响,为改进佛手多糖生产方式和佛手多糖解酒研究提供依据。[方法]分别采用传统水提法、超声辅助法、微波辅助法、超声-微波协同提取法和复合酶法提取佛手多糖,探讨5种提取方法对多糖得率、糖醛酸含量、分子量、单糖组成、红外光谱和乙醇脱氢酶活性的影响。[结果]水提法和超声-微波协同提取多糖得率最高,分别为(4.26±0.21)%和(4.15±0.14)%。不同方法提取的佛手多糖分子量大小存在差异,其中复合酶法提取多糖平均分子量为617.85 k D,约是水提多糖分子量的4倍。5种多糖均呈现出典型的吡喃型多糖和α型糖苷键吸收,单糖组成均以阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖为主。超声-微波协同提取多糖对乙醇脱氢酶激活能力最强,可达(46.58±1.76)%,而传统水提多糖抑制乙醇脱氢酶活性。[结论]超声-微波协同提取佛手多糖得率高且所需时间短,对乙醇脱氢酶激活能力强,推测乙醇脱氢酶激活能力与多糖分子量大小、半乳糖醛酸连接方式有关。