亚洲薄荷内生真菌多样性研究

采用纯培养的方法对广西所采50株健康亚洲薄荷150茎段、350片叶子中分离纯化内生真菌。用形态学分类鉴别方法依据产孢内生真菌在标准培养基的菌落颜色、菌落形态及孢子的着生方式进行鉴定。部分不产孢内生真菌利用促孢培养基培养结合分子生物技术对不产孢子内生真菌进行比对鉴定。结果从亚洲薄荷中分离出481株内生真菌,隶属1纲5目6科20属。丛梗孢科Moniliaceae是其优势科,其中拟青霉属Paecilomyces、轮枝孢属Verticillium、枝顶孢属Acremonium为主要菌群,分别占11.88%、7.92%和8.91%。叶子明显以叶点霉属Phyllosticta(17.21%)、小齿梗霉属Rhinotrichum(13.49%)、黑团孢属Nigrospora(11.16%)、枝顶孢属Acremonium(10.70%)为优势菌株,而茎则以拟青霉属Paecilomyces(18.60%)、轮枝孢属Verticillium(13.95%)为优势菌株。表明亚洲薄荷内生真菌具有丰富的多样性,其中拟青霉菌属是其优势菌落,其中还分离培养到枝顶孢属内生真菌,拟青霉菌和枝顶孢属菌物有抗菌活性,和薄荷的抗菌活性是否有联系还需进一步研究。     

辽宁省药用植物根际土壤木霉属真菌的多样性

对采集于辽宁省药用植物62份土壤样品的木霉属真菌进行分离,获得木霉属真菌78株,采用形态学方法从中鉴定出9种木霉属真菌,分别是哈茨木霉(Trichoderma harzianum)、绿色木霉(T.viride)、粗壮木霉(T.strigosum)、长枝木霉(T.longibrachiatum)、卷曲木霉(T.spirale)、钩状木霉(T.hamatum)、康氏木霉(T.koningii)、顶孢木霉(T.fertile)和多孢木霉(T.polysporum).其中哈茨木霉分离到34株,占分离到木霉菌总数的43.6%.采用对峙培养法,共筛选出对5种靶标菌抑制率大于70%,对靶标菌菌丝抑制作用明显的菌株4株,其中哈茨木霉2株,绿色木霉1株,钩状木霉1株.     

产喹诺里西啶碱苦豆子内生真菌的筛选与鉴定

从健康苦豆子植株中分离到214株内生真菌,通过薄层色谱法检测筛选到4株内生真菌产喹诺里西啶碱.用3种培养基分离菌株,根据菌株的菌落形态、大小、颜色、生长速率、质地、生长培养基颜色变化以及菌丝体和孢子的形态特征进行鉴定.结果表明:4株内生真菌分别属于亚大茎点霉属(Macrophoming)、卵形孢霉属(Oospora)、镰孢霉属(Fusarium)和头孢霉属(Cephalosporium).     

蓝莓采后病原真菌的分离鉴定及抑制研究

以兔眼蓝莓(品种名为灿烂)为材料,采用组织分离法从自然腐败蓝莓中分离、纯化病原真菌,通过形态学观察及分子生物学技术进行鉴定,并考察肉桂醛、柠檬醛、牛至精油、香芹酚和丁香酚等对4种病原菌的抑制效果。结果表明,分离得到6株病原真菌,分别为1株稻黑孢霉(Nigrospora oryzae)、1株青霉属(Penicillium sp.)、3株枝孢属(Cladosporium sp.)和1株链格孢属(Alternaria sp.)真菌,经致病性试验确定链格孢霉为主要病原菌。牛至精油对4种病原真菌均具有较好的抑制效果,对链格孢霉的半最大效应浓度(EC_(50))为37 mg/L。     

枣果病原真菌的分离鉴定及特性分析

对云南省蒙自市6个主要枣树栽培品种储藏期的腐烂果实表面的病原真菌进行分离和鉴定,得到25株优势病原真菌,分别扩增得到核糖体DNA转录间隔区(Internal transcribed spacer,ITS)序列,通过对ITS的生物信息学和系统发育分析,并结合菌落形态特征,鉴定病原真菌分别为链格孢属(Alternaria sp.)、曲霉属(Aspergillus sp.)、葡萄座腔菌属(Neofusicoccum sp.)和脉纹孢菌属(Neurospora sp.)。     

中国枝孢属研究(Ⅺ)

 报道枝孢属Cladosporium 4个国内新记录种:褐色枝孢C.brunneum Corda,多主枝孢柳生变种C.herbarum(Pers.) Linkvar.saxicolum Saccardo,细枝孢C.subtileRabenhorst和豇豆枝孢C.VignaeM.W.Gardner,附有形态特征及显微结构图,研究标本收藏于云南农业大学植物病理真菌标本室(MHYAU)。     

中国红豆杉内生真菌的分离鉴定及其产紫杉醇的特性

为筛选出微生物工业化发酵生产紫杉醇类药物的优良菌株,采用高效液相色谱(HPLC)及液质联用(HPLC-MS)等方法,对秦巴山区中国红豆杉进行了内生真菌的分离鉴定及其紫杉醇含量测定。结果表明:分离到1株内生真菌(H-21),为极细孢枝孢霉(Cladosporium tenuissimum);其代谢产物中存在紫杉醇,含量为163.5μg/L。     

信阳野生枸杞枝栖内生真菌多样性研究

为了解枸杞(Lycium chinense Mill.)枝栖内生真菌菌群多样性及分布规律,通过采样、分离、培养与鉴定,对信阳野生枸杞内生真菌的群落结构及生态分布特点进行了研究。结果显示,内生真菌广泛分布于枸杞健康枝内,定殖率达56.8%。共分离得到真菌717株,产孢真菌归于12个属,大多数属半知菌,少数属子囊菌,其中,拟茎点霉属(Phomopsis)、链格孢属(Alternaria)、镰刀菌属(Fusarium)和刺盘孢属(Colletotrichum)真菌为枸杞枝栖优势真菌,漆斑菌属(Myrothecium)、枝孢属(Cladosporuum)、长蠕孢属(Helminthosporium)、拟茎点霉属(Phomopsis)、壳梭孢属(Fusicoccum)、毛壳菌属(Chaetomium)、木霉属(Trichoderma)为枸杞属(Lycium)植物内生真菌新记录。枸杞生境是影响其枝栖内生真菌多样性的重要因素。     

小麦煤污病菌的种群组成与分布研究

对山东省7个小麦主要产区的小麦煤污病样品进行了分离培养,共获得1458个分离物,经鉴定分属11属14种真菌。其中属于煤污菌范畴的有5属8种:链格孢(Alternariaalternata),枝状枝孢(Cladosporium clodosporioides),尖孢枝孢(C.oxysporrium),草本枝孢(C.herbarum),球孢枝孢(C.sphaerosporum),出芽短梗霉(Auroeobasidium pullulans),黑附球菌(Epicoceum nigrum)和葡柄霉菌(Stemphylium botryosum)。各地的优势种群均为 Alternariaalternata 和 Cladosporium spp.两者的分离频率之和均在60％以上,但枝孢属中的具体种因地而异。对泰安市小麦不同生育期煤污病的种群变化进行研究表明,不同时期小麦煤污病菌的种群组成不同,灌浆后期种类最多,成熟期则减少,灌浆前期种类也较少,优势种群基本保持稳定。     

枝孢属、钉孢属及柱隔孢属真菌内蒙新记录种

对采自内蒙的真菌标本进行研究,报道枝孢属、钉孢属及柱隔孢属的15个内蒙新记录种,包括枝孢属(Cladosporium Link)9个种,分别为C.acaciicola、C.aecidiicola、C.allii-cepae、C.digitalicola、C.eriobot-rys、C.macrocarpum、C.miyakei、C.mori和C.tenuissimum;钉孢属(PassaloraFr.)3个种,分别为P.dubia、P.lonicerigena和P.polygoni;柱隔孢属(RamulariaUnger)3个种,分别为R.heraclei、R.plantaginis和R.sambucina。记述这些种的形态特征、寄主植物、采集地点及中国已报道分布情况。研究的标本保存于吉林农业大学菌物标本室(HMJAU)。     

哈尔滨市室内空气真菌多样性

采用曝皿法,选用孟加拉红培养基(RBC)对东北林业大学的办公室、教室和食堂内空气真菌进行取样调查.经过7个月的研究分析,共得到6 040个真菌菌落,又进一步分离、纯化后得63个真菌菌株,经鉴定得到 20属或群、57种不同真菌(包括无孢菌群3种真菌).室内空气真菌的优势菌属依次为枝孢属(Cladosporium)占总菌落数的27.21%、曲霉属(Aspergillus)占总菌落数的19.7%、青霉属(Penicillium)占总菌落数的14.86%、链格孢(Alternaria)占总菌落数的8.57%、无孢菌群占总菌落数的7.02%)、附球菌属 (Epicoccum)占总菌落数的4.74%、木霉属(Trichoderma)占总菌落数的4.61%.不同采样时间对室内外空气真菌的种类没有影响,仅对菌落的数量有一定的影响,总菌落数从早至晚也逐渐增加,但差异不大.不同采样地点空气真菌的种类差异不大,但菌落数量有较大差异,菌落数量依次为食堂＞办公室＞教室.     

油樟内生真菌多样性与对植物病原菌的抑菌活性

从油樟(Cinnamomum longepaniculatum)根、茎、叶分离出104株内生真菌,形态学鉴定表明,其中100株分属于2个纲、4个目、8个科、23个属,4株不能确定其分类地位.其中,组丝核菌属(Phacodium Pers.)、痂圆孢属(Sphaceloma de Bary)、简梗孢霉属(Chromosporium Corda)为优势属.通过检测发现,104株内生真菌中有33株对8种植物病原真菌中至少1种具有不同程度的抑制效果.     

血散薯内生真菌的分离鉴定及其抗菌活性研究

从血散薯(Stephania dielsiana Y.C.Wu)中寻找活性内生真菌,为血散薯植物资源的保护及活性天然产物的开发提供依据,对其茎、叶中内生真菌进行分离鉴定,并研究其抗菌活性。结果表明,从血散薯茎、叶中共分离得到38株内生真菌,其中31株经形态学结合分子生物学的方法鉴定表明,其归为14个不同的属,包括链格孢属(Alternaria)、炭团菌属(Hypoxylon)、枝孢属(Cladosporium)、茎点霉属(Phoma)、镰刀属(Fusarium)、Stagonosporopsis、Ascomycete、毛壳菌属(Chaetomium)、拟盘多毛孢属(Pestalotiopsis)、弯孢霉属(Curvularia)、短梗霉属(Aureobasidium)、Annulohypoxylon、小光壳属(Leptosphaerulina)、刺盘孢属(Colletotrichum)。其中,优势属为链格孢属和茎点霉属。基于前期对峙拮抗预试验结果,选取14株内生真菌进行发酵培养,并测定其对9种植物病原真菌和10种动物病原细菌的抗菌活性。结果表明,内生真菌发酵产物粗提物对供试病原菌具有不同程度的抑制作用。其中,7株内生真菌(叶-8、Y-66、YB-12、J-12、J-34、J-36、J-55)的粗提物对5株或5株以上供试植物病原真菌具有明显抗菌活性。叶-8、J-12分别对玉米大斑病菌、金橘砂皮病菌表现出最佳的抗菌活性,EC_(50)值分别为0.063 1、0.006 2 mg/mL;J-34对甘蓝黑斑病菌、甘蔗凤梨病菌表现出最佳的抗菌活性,EC_(50)值分别为0.018 1、0.004 2 mg/mL。10株内生真菌的粗提物对金黄色葡萄球菌均具有抑制作用,MIC值介于0.500～10.000 mg/mL,4株内生真菌的粗提物对大肠杆菌具有抗菌活性,MIC值介于0.156～4.000 mg/mL。上述结果表明,血散薯茎叶中存在丰富的内生真菌资源,且其次生代谢产物具有广谱抗菌活性。     

华木莲叶中内生真菌的群落结构

为了解我国特有珍稀植物华木莲叶片的内生真菌菌群结构特征,以华木莲叶片为材料,采用组织分离法分离华木莲的内生真菌。结果表明,PDA改良培养基(PDA培养基内加20 g/L华木莲叶汁液、30 mg/L链霉素)的分离效果最好。从华木莲的叶中共分离得到87株内生真菌,经显微形态鉴定,鉴定菌株74株,为4目5科10属,分别为青霉属、木霉属、曲霉属、小孢霉属、交链孢属、枝孢属、长蠕孢属、镰孢霉属、拟茎点霉属、丝核菌属,结果显示叶中内生真菌菌群多样性较丰富,优势属为无性丝孢类菌群中青霉属、木霉属、交链孢属和无性腔孢类拟茎点霉属;分离率分别为17.2%、12.6%、10.4%和11.5%,对开发和利用植物内生真菌及丰富真菌的物种具有重要意义。     

薯蓣内生真菌的分离及其抑制植物病原真菌的活性

从盾叶薯蓣(Dioscorea zingiberensis C.H.Wright)各部位共分离到50株内生真菌,初步鉴定有19株分属于曲霉属(Aspergillus Micheli ex Fr.)、须壳霉属(Pyrenochaetade Not)、刺孢壳属(Chaetomella Fuckel)、侧孢霉属(Sporotrichum Lk.ex Fr.)、棒束梗霉属(Isaria Pers.ex Fr.)、假黑粉霉属(Coniosporium Lk.ex Fr.)和简梗孢霉属(Chromosporium Corda),其余菌株因不产孢而暂未鉴定。利用生长速率法和孢子萌发法检测到分离于根茎的EDT3、EDT4、EDT5和分离于种子的EDS1、EDS3、EDS4等6株菌株的发酵液对棉花黄萎病菌(Verticillium dahliaeKleb.)等6种植物病原真菌的菌丝生长有抑制作用,其中EDS3和EDS4发酵液的混合液E-y对这6种植物病原真菌的菌丝生长和孢子萌发均有较强的抑制作用。     

野生山药与栽培品种内生真菌多样性研究

从野生山药(Dioscorea opposita Thunb.)的地下茎、茎、叶组织中共分离获得内生真菌48株,鉴定出46株,分别属于12属、7科、5目、2纲,另外两株因不产孢未被鉴定。在鉴定的12属内生真菌中,以青霉属(Penicillium)为优势属,其次是顶枝孢属(Acremonium)和枝孢霉属(Dacylium);从栽培品种瑞昌山药(Dioscorea spp.)中分离获得内生真菌10株,分别属于4属、4科、3目、2纲。在鉴定的4属内生真菌中,头孢霉属(Cephalosporium)4株,拟茎点霉属(Phomopsis)3株,青霉属(Penicillium)2株,酵母菌属(Saccharomyces)1株。结果显示,野生山药(Dioscorea opposita Thunb.)内生真菌物种多样性明显高于栽培品种瑞昌山药。     

产银杏内酯B内生真菌的分离与筛选

研究了银杏内生真菌与其宿主产生具生理活性物质银杏内酯B之间的关系,并对部分银杏内生真菌进行了形态学鉴定。结果表明:从银杏植株不同组织中共分离到109株内生真菌;在马铃薯葡萄糖液体培养基上发酵后对发酵液进行薄层层析,有16株菌的斑点和标品有相同的迁移率,用HPLC-UV方法对该16株菌发酵样品进行分析,其中有3株内生真菌(G10、Y30和Y40)的浓缩发酵液的保留时间和标品保留时间一致,确定菌株G10能产生银杏内酯B;菌株G10、Y30和Y40分别为卵形孢霉属(Oospora Wallr.)、枝链孢霉属(Sirodesmiumde Not)和青霉属(Penicillium LK.ex Fries)。     

福建省蔬菜根结线虫卵囊寄生真菌鉴定

调查了福建省部分地区的蔬菜根结线虫卵囊寄生真菌.从8种蔬菜病根上采集根结线虫卵囊样品624份,分离到真菌401株,除34株不产孢及疑难种未鉴定外,已鉴定的真菌有18个属:镰孢菌、拟青霉、根霉、曲霉、厚垣孢普可尼亚菌、丝核菌、弯孢、毛霉、刚毛孢、木霉、链格孢、拟盘多毛孢、青霉、炭疽菌、黑孢霉、小克银汉霉、枝孢霉、横隔霉....     

3种沙生药用植物内生真菌的分离鉴定及其拮抗菌株筛选

采用3种消毒时间对沙冬青、老瓜头、甘草3种沙生药用植物内生真菌进行分离.结果表明:消毒3min来消除非内生菌的影响,效果较好;同一植株分离出内生真菌的数量,以根部最多,其次是茎部,叶部最少.合并形态相同的分离物,分离出的124株内生真菌除24株无孢菌属外,经初步鉴定分属于13个属,卵形孢霉属(Oospora)和串珠霉属(Monilia)各占18.63%;交链孢霉(Alternaria)占12.96%;间毛孢霉属(Septosporium)占10.53%;镰孢霉属(Fusarium)占9.72%;而头孢霉属(Cephalosporium)、束丝菌属(Ozonium)、青霉属(Penicillium)、曲霉属(Aspergillus)、地霉属(Geotrichum)、亚大茎点菌属(Macrophoming)、丝核菌属(Rhizoctonia)分离数均小于5%.以4种植物病原菌为靶标菌,筛选出5株高活性拮抗菌株,抑菌带宽度达14.99mm.     

蓝莓帚梗柱孢枝枯病病原菌鉴定及生物学特性

【目的】2015年6月在来自湖北随州的蓝莓苗木中,发现一种由帚梗柱孢霉引起的枝枯病。本研究开展了致病菌的鉴定工作,为病害的防治提供指导。【方法】病样分离物通过组织分离、单孢分离及纯化后,用柯赫氏法则进行了致病性测定。致病菌的鉴定采用形态学、ITS序列比对及基于EF-1α,β-tubulin和Histone 3三段基因的系统发育树的联合确定,同时本研究对病原菌的生物学特性进行了测定。【结果】通过分离及致病菌测定后,选取代表菌株HBSZ05Ba进一步研究。形态学特征及ITS比对结果均将代表菌株划分入帚梗柱孢霉属球状囊泡组,三段基因联合系统发育树结果表明,该病害的病原菌为Cylindrocladium canadense(有性态为Calonectria canadensis)。生物学特性试验结果表明:菌丝生长最适温度为25℃,最适培养基为PDA,光照对菌落生长无明显影响,最适氮源为NaNO_3,最适碳源为可溶性淀粉。【结论】湖北随州蓝莓枝枯病病原菌经鉴定为C.canadense,该种真菌在蓝莓上的为害属首次报道。