牛妊娠相关糖蛋白检测技术研究进展

妊娠诊断是牛繁殖过程中的重要环节。为了提高牛群繁殖效率,牛养殖场从业人员不断引入更高效的发情揭发、同期发情、妊娠诊断等技术。妊娠相关糖蛋白（PAGs）法作为近年来在规模化牛养殖场开始应用的妊娠诊断技术,被证明具有较高的诊断效率和准确率。本文针对牛妊娠相关糖蛋白检测技术研究现状,对该技术研究进展进行综述。     

牛妊娠相关糖蛋白ELISA对早期妊娠诊断效果的影响

选取273头荷斯坦奶牛,在人工输精后的28d和75d分别采用牛妊娠相关糖蛋白(PAG)ELISA和直肠检查的方法进行妊娠诊断,比较PAG ELISA和直肠检查法的结果,旨在评价PAG ELISA对配种28d的奶牛进行早期妊娠诊断的准确性。结果表明,PAG ELISA法妊娠诊断的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值和准确性分别为100%、75.5%、86.5%、100%和90.5%,与75d直肠检查结果相同,可用于母牛的早期妊娠诊断。妊娠诊断对于母牛保胎、分群管理及提高繁殖效率等具有非常重要的意义。     

牛妊娠相关糖蛋白的研究进展

妊娠相关糖蛋白(pregnancy associated glycoprotein, PAG)是由反刍动物胎盘表达的一种天冬氨酸蛋白酶家族,在反刍动物滋养外胚层的单核和双核细胞中合成。在牛科动物中,PAG家族蛋白种类较多。PAG家族各蛋白成员在分子质量、氨基酸序列和生理功能等方面有一定差别,还需要大量的科学研究来揭示这些蛋白质的功能和作用。PAGs在奶牛妊娠过程中发挥了重要作用,可以作为检测奶牛妊娠及诊断妊娠丢失的标志物,同时还可以作为监测胎盘功能的指标。笔者综述了PAG家族的起源、在牛体内的生物学功能及在牛妊娠监测中的应用,旨在为奶牛早期妊娠诊断研究提供理论参考。     

家畜妊娠相关糖蛋白的研究进展

妊娠相关糖蛋白（ＰＡＧ）是一类孕期出现的特异蛋白质,在维持妊娠中发挥着重要的作用。本文综述了ＰＡＧ的发现、表达规律,结构特征,基因序列,同时还简要介绍了它们的生理作用和临床意义。     

绵羊妊娠相关糖蛋白PAG3的制备

妊娠相关糖蛋白(pregnancy-associated glycoprotein,PAG)是一类动物妊娠后胎盘产生的特异性蛋白质,是判断妊娠的重要信号物质。为了获得绵羊妊娠相关糖蛋白PAG3的制备方法,以期通过检测绵羊体内的妊娠相关糖蛋白的含量来进行早期妊娠诊断。本试验通过原核表达生物工程合成的方法,将绵羊妊娠相关糖蛋白编码基因序列插入到表达载体pET20b中,利用原核表达转化大肠杆菌获得了融合His标签的目的蛋白PAG3。经过超声波裂解、His标签亲和层析的方法纯化获得了妊娠相关糖蛋白PAG3。     

妊娠相关糖蛋白(PAG)在奶牛早期妊娠诊断上的应用现状

妊娠相关糖蛋白(pregnancy associated glycoproteins,PAG)是反刍动物妊娠后外周血液出现的特异性蛋白,在妊娠过程中发挥着重要的作用。目前,在生产上通过检测PAG在血清中浓度能够进行奶牛的妊娠诊断。作者综述了PAG的发现、分离纯化及其在奶牛体内的代谢水平和近年奶牛早期妊娠诊断上的应用情况。     

3种ELISA试剂盒检测抗牛支原体抗体的比较

为比较3种抗牛支原体(M.bovis)血清抗体的ELISA试剂盒检测效果,本实验应用3种检测M.bovis血清抗体ELISA诊断试剂盒对38份阳性样品(自然感染19份,人工感染18份)和37份阴性样品进行检测.结果表明:本实验室制备的HVRI试剂盒与商品化试剂盒Kit 1的检测结果和综合检测结果符合率分别达到92%和96%;而商品化试剂盒Kit 2的检测结果与综合检测结果符合率仅为74.67%.一致性检验结果显示:HVRI试剂盒与Kit 1的一致性较高;Kit 2与HVRI试剂盒、Kit 2与Kit 1有中度的一致性.此外,3种试剂盒对牛传染性胸膜肺炎国际标准血清(PS2)的检测结果显示HVRI试剂盒和Kit 1均为为阴性,Kit 2为阳性.因此,HVRI试剂盒与Kit 1更适于M.bovis检测和开展流行病学调查.     

奶牛妊娠相关糖蛋白2的表达及结构功能预测分析

为了获得高效表达纯化并且抗原性较好的牛妊娠相关糖蛋白2（bovine pregnancy-associated glycoprotein 2,BoPAG2）,对该蛋白的结构与功能进行生物信息学预测分析。通过PCR扩增荷斯坦奶牛BoPAG2基因,并将该基因连接至表达载体pET-28a,转化至大肠杆菌（BL21）中诱导表达并纯化,通过SDS-PAGE和Western blotting验证与检测该蛋白的大小和免疫学特性,通过生物信息学对BoPAG2蛋白的糖基化修饰、B细胞抗原表位、亲水性、信号肽,蛋白二级结构和3D模型、保守结构域以及蛋白互作进行预测分析。结果表明,本研究成功克隆出BoPAG2基因,通过诱导表达并纯化相应蛋白,通过SDS-PAGE和Western blotting验证BoPAG2蛋白的大小与预期结果相符,通过生物信息学预测分析结果显示,BoPAG2蛋白有5个位点发生糖基化修饰,分别为Asp⁵¹、Asp⁷¹、Asp¹¹⁴、Asp²⁵²和Asp³⁴³,该蛋白含有15个B细胞抗原表位,在N端含有15个氨基酸组成的信号肽序列,二级结构主要以无规则卷曲和延伸链为主,并且成功建立了BoPAG2蛋白的3D模型,该蛋白含有4个超家族结构域,蛋白互作分析结果显示,与BoPAG2互作的蛋白有7个,该蛋白可能参与了消化和吸收,以及母体在妊娠期的调节功能等过程。综上所述,本试验成功表达并纯化获得了BoPAG2蛋白。通过对BoPAG2蛋白的结构及功能进行生物信息学预测分析,为BoPAG2蛋白抗体的制备以及功能的研究提供了理论基础。     

国产牛结核诊断试剂盒

<正>一种快速检测牛结核的方法及其相应检测试剂盒,近日通过国家发明专利申请。这项技术是由江苏省扬州大学兽医学院院长秦爱建教授带领的课题组,历时近3年研制出的。该技术的关键是获得特异性抗牛γ干扰素不同表位的特异性单克隆抗体以及夹心ELISA方法的建立,其创新之处在于应用细胞免疫学技术,通过特异性结核抗原体外刺激淋巴细胞,使其分泌干扰素,然后测定干扰素的量,判定牛只是否感染结核。牛结核病是由牛分支杆菌和结核分支杆菌所引起的     

妊娠相关糖蛋白及其在反刍动物早期妊娠诊断中的应用

妊娠相关糖蛋白(pregnancy-associated glycoprotein,PAG)是由胎盘组织产生并释放到母体外周血液中的大分子蛋白,在妊娠过程中发挥着重要作用.目前,母畜妊娠早期诊断的研究多集中在对奶牛伤害小、准确性高、特异性强的间接检测方法上,如检测血液或乳汁中孕酮等激素,而近年来发展起来的对血液中PAG的检测就是一种主流的方法.作者现就PAG的功能、生化特性、母畜怀孕期间PAG的浓度变化及其在反刍动物早期妊娠诊断中的应用情况进行综述.     

梅花鹿胎盘中妊娠相关糖蛋白(PAG)纯化与鉴定

梅花鹿胎盘妊娠相关糖蛋白对维持妊娠有重要作用。本研究首次利用硫酸铵沉降、透析和冻干法,从梅花鹿胎盘中分离出妊娠相关糖蛋白(PAG),20%⁵0%和50%50%和50%⁸0%硫酸铵梯度沉降蛋白,分子量分别在44.3 ku80%硫酸铵梯度沉降蛋白,分子量分别在44.3 ku⁶6.4 ku处,并通过Western blot分析证实其有反应原性。     

四种牛结节性皮肤病抗体ELISA检测试剂盒的比对

为筛选可靠的牛结节性皮肤病免疫抗体评价方法,以已知牛结节性皮肤病感染牛血清17份、羊痘疫苗免疫牛/羊血清77份和阴性牛血清20份作为样品盘,以病毒中和试验结果作为金标准,通过Kappa一致性和诊断效能评价,分别对市售的4种牛结节性皮肤病/羊痘抗体ELISA检测试剂盒进行分析比对.结果显示:4种ELISA检测试剂盒特异性...     

二种方法检测牛病毒性腹泻病毒的比较

荧光抗体试验(FA)是用于检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的传统方法。但由于此技术需要价格昂贵的荧光显微镜,复杂的操作程序及专门的试验人员,使该技术的应用受到限制。为克服FA的缺点,目前世界上一     

奶牛早期妊娠诊断及妊娠相关糖蛋白(PAG)ELISA检测技术进展

奶牛配种后,及时且准确了解奶牛的妊娠状况至关重要。奶牛早期妊娠诊断可显著缩短平均育种间隔,提高奶牛养殖效率。随着早期妊娠诊断技术不断发展,检测牛妊娠相关糖蛋白(PAG)逐渐被人们重视,尤其是酶联免疫吸附试验(ELISA)得到更多的开发与利用。目前国外已有PAG ELISA牛妊娠检测试剂盒用于检测怀孕早期PAGs,该方法快速、准确、灵敏,而国内现存的试纸条准确率低。本文综述了传统的奶牛早期妊娠诊断方法和PAG ELISA方法的发展现状,对ELISA检测方法在动物繁殖领域的应用进行展望。     

一致性检验比较牛口蹄疫病毒抗体LBE检测试剂盒

用660份牛血清比较牛口蹄疫病毒O型、A型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒检测结果的一致性,并用u检验排除抽样误差的影响。结果表明:待检血清最终稀释度数为1∶64时O型试剂盒联合检出523份口蹄疫抗体阳性和102份阴性,符合率为94.70%,结果一致性为极强(Kappa值=0.82);待检血清最终稀释度数为1∶128时O型试剂盒联合检出476份口蹄疫抗体阳性和125份阴性,符合率91.06%,结果为高度一致(Kappa值=0.75);血清最终稀释度数为164时A型试剂盒联合检出498份口蹄疫抗体阳性和120份阴性,符合率为93.64%,结果一致性为极强(Kappa值=0.81),血清最终稀释度数为1∶28时A型试剂盒联合检出354份口蹄疫抗体阳性和233份阴性,符合率为88.94%,结果为高度一致(Kappa值=0.77)。在不同包被方式下,LBE试剂盒检测待检血清牛口蹄疫病毒抗体结果一致性较好。兽医实验室可应用一致性检验,结合本单位人力、财力和物力等条件,选择适宜的牛口蹄疫病毒抗体检测试剂盒。     

3种ELISA试剂盒检测盐酸克伦特罗效果评价

用3种盐酸克伦特罗ELISA检测试剂盒对10份未知猪尿液样品及5份标准浓度猪尿液样品进行检测,以比较试剂盒的检测效果。结果表明,试剂盒A在盐酸克伦特罗浓度为0ng／mL-10ng／mL的范围内其检测结果较准确,当浓度大于10ng／mL时其检测结果偏小;试剂盒B对盐酸克伦特罗的检测结果较标准样品浓度有时偏高,有时偏低,结果不够准确;试剂盒C的检测结果与标准样品的实际浓度相近,结果较准确。稳定性方面,试剂盒B的稳定性差,而试剂盒A及试剂盒C的稳定性较好。总的来说,试剂盒C在检测结果的准确性和稳定性上均较好,是3种试剂盒中效果最为理想的盐酸克伦特罗检测试剂盒。     

6种非洲猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒的比较

为了比较市场上国产及进口非洲猪瘟病毒(ASFV)ELISA抗体检测试剂盒的产品质量和使用效果,本试验对B、C、D三种进口试剂盒和A、E、F三种国产试剂盒进行敏感性、特异性和重复性比较。结果显示,试剂盒B、D、E、F分析敏感性均为1∶512;试剂盒C分析敏感性为1∶256;试剂盒A分析敏感性为1∶128;诊断敏感性比较结果为试剂盒B>试剂盒D、F>试剂盒E>试剂盒C>试剂盒A;6种试剂盒对7份特异性质控血清的检测结果均为阴性,表明6种试剂盒均具有排除潜在交叉反应的病原抗体的能力;诊断特异性比较结果为试剂盒A、C、D>试剂盒F>试剂盒E>试剂盒B;批内重复性结果显示,6种试剂盒的批内变异系数(CV%)均在15%以内。结果表明,非洲猪瘟病毒ELISA抗体检测国产试剂盒与进口试剂盒的敏感性、特异性和批内重复性相差无几,国产试剂盒的兴起解决了以往过度依赖昂贵的进口试剂盒的问题,国产化替代进程在不断加速。     

牛结核病检疫新增检测试剂盒

近日,由中国农业科学院北京畜牧兽医研究所兽医公共卫生安全与管理团队参与研制的牛结核病IFN-γ夹心ELISA检测试剂盒获得二类新兽药证书。牛结核病IFN-γ夹心EI.ISA检测试剂盒的原理是基于细胞免疫建立的牛结核病检测方法结核病阴性牛淋巴细胞经牛型提纯结核菌素(PPDB)刺激后不产生IFN-γ.结核病阳性牛淋巴细胞经PPDB刺激后.产生大量IFN-γ.     

牛结核病两种检测方法的比较

1迟发性变态反应1.1原理目前测定牛结核病的标准方法是迟发性变态反应(delayed typehypersensitivity,DTH)试验,即结核菌素(即PPD,为提纯的结核菌蛋白衍生物,其中包括蛋白、脂肪类、糖类以及核苷酸等多种抗原成分)试验,也是国际贸易的指定方法。结核菌在刺激机体发生免疫应答的时候,迟发性变态反应也随之产生,二者均由T细胞介导产生,但诱导产生免疫和变态反应的物质不同,所以检测机体对结核菌是否发生变态反应,即可判断是否具有免疫力,进而就可得知机体是否感染过结核菌。对牛皮内注射结核菌素,并在3天后测量注射部位肿胀程度。美国就是…