土壤微生物多样性研究中总DNA提取技术进展

综述了在土壤微生物多样性研究中总DNA提取技术的研究进展,分析了DNA提取过程中的主要影响因素及存在的问题.     

三角梅总DNA提取方法比较研究

为了选择一种快速、有效、简单的三角梅总DNA的提取方法,分别采用DNA提取试剂盒法、CTABmini法、改良SDS-KAC法、CTAB大量法提取三角梅嫩叶片的总DNA,用紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳对所提取的总DNA进行检测。结果表明：CTABmini法提取的三角梅总DNA纯度高,浓度高,并且简单省时。CTABmini法是较为理想的三角梅总DNA提取方法,该法提取的总DNA适用于三角梅的分子生物学研究。     

甜瓜总DNA提取方法比较研究

分别以甜瓜品种"东方蜜1号"的成熟干种子、萌动种子、子叶和真叶为材料,选用4种不同的提取方法进行总DNA提取试验.结果表明:包括干种子在内的不同生长期的材料均能提取到总DNA,刚展平子叶的提取效果最好;4种提取方法中以尿素提取法最为简便,效果最佳.经PCR检验,干种子和子叶提取的总DNA均可用于PCR扩增.     

马蹄金总DNA的快速提取

利用E .Z .N .A微量植物DNA提取试剂盒 ,在 1h内可快速可靠地从马蹄金 (DichondrarepensForst)植物样本或组织中提取纯度较高的总DNA。这套系统利用速度和多变的旋转技术来结合DNA吸附旋转柱中基质的核酸内容物 ,从而除去植物组织中的多糖、酚化合物、酵素抑制剂。所得DNA产物纯度高可直接用于PCR ,RAPD、AFLP等各种下游分析技术     

雷公藤总DNA提取方法的研究

由于雷公藤叶片富含多糖及酚类物质,要获得高质量的DNA有一定难度。本研究以雷公藤植物叶片为材料,对传统提取方法进行改进、优化,比较了4种不同的提取方法,最终获得了一种以CTAB法为基础,试剂盒纯化的获得高质量DNA的方法。试验结果表明,使用该方法从雷公藤叶片中分离的DNA,纯度高、杂质少,且相对于其他方法,试验成功率明显提高,适用性强。     

甜菜总DNA不同提取方法的研究

采用CTAB法、SDS法、改进CTAB法和改进SDS法提取甜菜总DNA,并对提取得到的DNA进行质量鉴定和PCR扩增效果检测.结果表明：用改进的CTAB法提取的甜菜总DNA OD260/OD280在1.8左右,DNA纯度好,产率高,CTAB法和改进的SDS法产率次之,SDS法最低.同时对改进的CTAB法的提取条件进行优化,即用5.0 mL细胞提取液,0.8 mL无水乙醇, 0.6倍体积的异丙醇,可从1.0 g甜菜叶片中提取到高质量高纯度的DNA 764 μg/g.     

月季总DNA提取方法的比较研究

以月季的幼叶为材料,分别采用CTAB法、SDS法、高盐低pH法、氯仿-异戊醇法对DNA的提取方法进行研究,结果表明:CTAB法适合叶片DNA的提取,所得DNA纯度较高.     

月季基因组DNA与总RNA提取方法的优化研究

[目的]优化月季基因组DNA与总RNA的提取方法。[方法]通过对经典提取方法的改进与筛选,获得月季DNA和总RNA。[结果]经过改进与筛选的方法提取的月季DNA和总RNA可用于酶切、PCR和RT-PCR等一系列分子生物学的研究。[结论]该研究为其他以次生代谢物含量丰富植物为材料的研究提供了技术参考。     

辣椒病原真菌总DNA提取方法比较

比较了2种方法对辣椒病原真菌总DNA的提取效果。PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳检测表明,液氮研磨法提取的DNA中杂质较少,但需要时间较长,试剂消耗较多;冻融法则可有效提取极微量病原真菌DNA,对于无条件进行单克隆培养而无法得到足量真菌样本的植物病原真菌总DNA提取,冻融法是一种快速、简捷而适用的方法。     

水稻纹枯菌总 DNA 提取方法的比较

DNA的浓度,尤其是DNA的纯度严重影响后续基因组酶切等结果。为寻找一种高质量的水稻纹枯菌总DNA的提取方法,采用CTAB法、CTAB改良法、SDS法、蜗牛酶法、蛋白酶K法5种方法分别提取水稻纹枯菌总DNA。通过紫外吸光度测定DNA的纯度和浓度、琼脂糖凝胶电泳、PCR扩增、限制性内切酶酶切反应及Southern杂交评价DNA的质量,最终得出蛋白酶K法是获取高质量水稻纹枯菌基因组DNA的最佳方法。     

核果类果树基因组DNA提取方法的研究

以核果类果树油桃、扁桃、杏、山桃、榆叶梅和樱桃的幼叶为试材,进行了基因组DNA的提取方法的比较研究,其中改良SDS法效果最好;采用改良SDS法提取油桃的幼叶、花蕾和韧皮部基因组DNA的效果表明,三者均可以作为基因组DNA提取的材料,且以幼叶效果最理想;采用改良的SDS法可在自然阴干的扁桃和油桃叶片中提取到完整的DNA;将改良SDS法提取的油桃不同部位和自然阴干的扁桃和油桃叶片基因组DNA,经SSR-PCR检测发现,扩增效果清晰稳定,完全可以应用于果树分子生物学研究.     

半粒小麦种子DNA提取的研究

本研究以半粒小麦无胚种子为材料,提取DNA并进行PCR扩增检测,同时将剩下的半粒小麦有胚种子进行催芽试验.结果表明:从半粒小麦无胚种子和小麦幼叶中都能提取出质量较高的DNA;用λDNA进行浓度检测发现,小麦幼叶提取的DNA浓度高于半粒小麦无胚种子提取的DNA浓度;分别用所提取的小麦DNA作为PCR扩增模板均能够得到理想的特异条带,满足分子检测的需要;催芽试验表明,半粒小麦有胚种子也能够正常生根发芽,可作为染色体分选、原位杂交和繁殖的材料.     

悬铃木叶片DNA提取方法研究

以悬铃木组织培养苗叶片为材料,比较了提取叶片DNA的4种方法:SDS-Ⅰ,SDS-Ⅱ,CTAB-Ⅰ,CTAB-Ⅱ,并用紫外光谱吸收、凝胶电泳、限制性内切酶酶切、RAPD等方法进行鉴定.研究结果表明,4种方法提取的DNA的得率约为0 347～0 518μg·mg-1,分子量约为23kb,均可被酶切.此外,CTAB-Ⅰ和CTAB-Ⅱ提取的DNA可用于RAPD分析.综合考虑得率、纯度等因素,作者认为CTAB-Ⅱ法可作为悬铃木叶片DNA提取的最佳方法.     

大豆不同组织材料的DNA提取

以大豆叶片、愈伤组织和干种子为材料进行大豆基因组DNA提取的比较试验.结果表明:从以上3种组织材料中均能提取到较高质量的DNA,利用愈伤组织为材料提取的DNA质量比叶片和种子略好,从愈伤组织中可以提取到质量较高的模板DNA.     

大豆DNA提取基本原理的探讨

大豆 DNA提取是进行大豆分子生物学研究的基础。大量、高质量的 DNA提取一直是大豆科学研究者探讨的问题。根据实验经验和查阅有关文献总结了大豆 DNA提取各个步骤的基本原理     

神秘果基因组DNA提取方法比较研究

在CTAB法及SDS法的基础上设计了6种提取方法,比较了不同方法对神秘果幼嫩叶片DNA的提取效果。结果表明:改进的SDS法,通过提高提取缓冲液中重要成分的含量,与二次纯化的方法相结合,提取的DNA无明显降解、杂质少,OD260/OD280值为1.62,接近标准值,是有效提取神秘果基因组DNA的方法。     

苹果黑星病菌DNA提取方法研究

采用CTAB法、SDS法、Parker法及改进的SDS法提取苹果黑星病菌的DNA,经紫外分光光度计测定,改进SDS法提取的DNA得率较其他3种方法高,约为Parker法的2倍。改进SDS法提取的DNAA260nm/A280nm值为1.700～1.900,DNA纯度较高,而其他3种方法提取的DNAA260nm/A280nm值均高于1.900,DNA中所含RNA的量较高。4种方法提取的DNA在230nm波长处的吸收值分别为0.658,0.257,0.926和0.208,说明DNA不同程度地被酚类物质所污染,但改进的SDS法提取的DNA受污染程度最小。     

木薯总RNA提取初步研究

为了筛选适合木薯不同部位总RNA提取的方法,采用常规CTAB法、TRIZOL和RNAplant试剂对木薯叶片和块根总RNA进行提取,并采用两步法进行RT—PCR检测。结果表明,采用常规CTAB法提取木薯总RNA耗时长、效率低,不利于提取大批量材料,但其RNA纯度较高,能产生理想的条带。TRIZOL有利于提取木薯叶片的总RNA而不能提取块根总RNA;RNAplant试剂可以提取木薯各部位的RNA,但纯度不高,且有DNA污染,需要用DNase I处理才能进行RT—PCR检测。TRIZOL和RNAplant试剂混合可以很好地提取木薯各部位总RNA,条带清晰,很少出现降解现象,但仍然无法消除DNA。因此,可根据木薯不同部位要求,选用合适的方法提取总RNA。