苏云金杆菌可溶性增效物质的回收工艺

通过对Bt MP-342菌株发酵液上清液增效活性的热稳定性的研究，确定了减压浓缩－喷雾干燥工艺回收原粉制备工艺中离心废液。获得的浓缩液最高含固量可达45％。浓缩上清喷干条件为进口风温300℃，出口风温85℃。不同减压浓缩条件及喷雾干燥对上清浓缩液和上清粉的增效作用无显著影响。对增效粉的组成成分分析表明，增效粉含糖为10.68%，总氮为5.82%，氨态氮含量为1.57%，脂肪含量为1.15%,含丰富的氨基酸和无机盐。     

苏云金杆菌GC—91发酵上清液的增效作用

利用生物测定，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ方法对苏云金杆菌ＧＣ－９１发酵液的上清液进行了研究。研究表明，上清液中含有增效物质，离心丢弃上清液是导致毒力收率大幅度下降的根本原因。上清液对粉剂增效明显，本实验中最高增效倍数为２３．５倍，且上清液对不同菌种粉剂增效力不同，对ＧＣ－９１菌粉增效极为显著，对ＨＤ－１菌粉增效较为缓慢。上清液中含有的增效物质是一种热稳定物质，能耐１５分钟沸水浴，在ｐＨ２～１０范围内稳定，证明不是β－毒素     

苏云金芽胞杆菌杀虫蛋白增效物质与增效机理

苏云金芽胞杆菌的主要特征是在芽胞形成的同时,能产生对多种昆虫具有特异杀虫活性的晶体蛋白,该蛋白对人畜和环境安全无害。但因在应用过程中杀虫毒力有限,影响了其巨大潜力的发挥。因此,如何提高杀虫蛋白的毒力,寻找更有效的增效物质成为新的研究热点。本文主要综述目前对苏云金芽胞杆菌杀虫蛋白具有增效作用的物质与增效机理的研究进展。     

苏云金杆菌杀虫剂增效途径研究进展

本文从不同方面简要综述了苏云金杆菌杀虫剂增效途径的研究进展。     

松毛虫质型多角体病毒对苏云金杆菌的增效作用

苏云金杆菌 (Ｂｔ)和昆虫杆状病毒是两种开发应用较广的高效、无毒的生物杀虫剂。Ｂｔ相对杆状病毒 ,具有杀虫广谱、速效 ,但残效期短 ,易产生抗性 ;杆状病毒具有杀虫专一、效果好、有继代传播的后效作用 ,但杀虫速度慢。Ｂｔ与昆虫病毒混用可产生增效作用[1] 。本实验室研制了松毛虫质型多角体病毒 (ＤｅｎｄｒｏｌｉｍｕｓｐｕｎｃｔａｔｕｓＣＰＶ ,ＤｐＣＰＶ)和Ｂｔ加上适宜助剂和填充料混配而成的松毛虫微生物杀虫剂。作者通过以松毛虫作供试虫 ,采用孙云沛[2 ] 法 ,对Ｂｔ和ＤｐＣＰＶ进行了联合毒力测定。1　材料和方法1 .1　供试虫…     

苏云金杆菌在我国研究和应用进展

苏云金杆菌在我国研究和应用进展董濯清（中国农科院生物防治研究所１０００８ｌ）苏云金芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）简称苏云金杆菌（Ｂ．ｔ．），其制剂是目前世界上产量最大的微生物杀虫剂，已有１００多种商品制剂。它广泛用于防治农业、...     

苏云金杆菌（B.t.）的分析测定技术

本文介绍了主要杀虫活性成分,分析方法发展历史以及毒蛋白的纯化,溶解和定量分析方法。     

论苏云金杆菌（Bt）制剂的增效措施

论苏云金杆菌（Ｂｔ）制剂的增效措施湖北省农科院Ｂｔ研究中心（４３００６４）吴继星从１９１１年Ｂｅｒｌｉｎｅｒ在德国苏云全省一个面粉厂分离到苏云金杆菌以来，至今已有８４年的历史。苏云金杆菌的真正实用化始于７０年代高效菌株ＨＤ—１的发现，特别是１９９２年...     

苏云金芽孢杆菌研究和开发的最新动向

第六届国际无脊椎动物病理学和微生物防治学术讨论会、第二届国际苏云金芽孢杆菌会议和第二十七届无脊椎动物病理学会年会于１９９４年８月２８日至９月２日在法国Ｍｏｎｔｐｅｌｉｅｒ召开。有５５个国家的５８０多人出席了会议，共收到学术论文近６００篇，出版了两卷论...     

苏云金杆菌杀虫剂新进展

苏云金杆菌杀虫剂新进展苏云金杆菌简称Ｂ．Ｔ．，是一类产晶体芽孢杆菌，属好气性蜡状芽孢杆菌群，在芽孢囊内产生晶体，有１２个血清型，１７个变种。可用于防治直翅目、鞘翅目、双翅目、膜翅目，特别是鳞翅目的多种害虫。苏云金杆菌可产生两大类毒素：内毒素（即伴孢晶...     

用离子交换吸附法回收Bt发酵液上清中的增效物质

采用阳离子交换树脂进行了回收Bt发酵废弃上清液中增效物质的初步研究 ,确定了最适的离子交换树脂。其最适回收条件为pH5,流速 1 .5倍v/h ,废弃上清液中增效物质的回收效率可达 83%。回收的浓缩上清液与去上清菌浆比例为 1 6∶1时对棉铃虫毒杀作用最强 ,表现出最好的增效作用。     

苏云金芽孢杆菌抗蝗虫生物测定模式建立

在人工饲养条件下,研究了蝗虫种群的消长规律与环境因子的关系。结果表明,蝗虫每雌可产卵3～10块,每块达55.0粒,孵化率为76.32%,蝗蝻雌雄比为1.5～2∶1。建立了以蝗虫为试虫,苏云金芽孢杆菌的毒力生物测定模式。选择的最佳生测条件与蝗蝻的最适生长条件一致,温度30±1℃,湿度65%～75%,500～600lx光照14～15h。同时分析了蝗虫的饲料选择及各种环境因子对生测结果的影响。     

噬菌体在苏云金芽孢杆菌发酵中的感染因素

采用4类噬菌体对9株不同血清型苏云金杆菌菌株进行了敏感试验。结果表明，不同菌株敏感性差异较大，其中CZE99985菌株在35～37℃下对4种噬菌体具有明显的抗性。通过对噬菌体的侵入时间和侵入量的测定，结果表明噬菌体侵入时间越早，侵入量越高，其感染造成的危害越大。培养12h前，接入一定量的TP-1型噬菌体会导致发酵异常；在发酵初期，侵入量达到0．5ml（4PFUs／m1）以上便发生严重的感染现象。     

苏云金芽胞杆菌晶体毒素的多样性

苏云金芽胞杆菌是生物防治中应用最为广泛的一种杀虫剂,它对多种昆虫和其他一些无脊椎动物具有特异的毒杀活性。苏云金芽胞杆菌的杀虫活性主要来自于菌体在形成芽胞期间生成的伴胞晶体毒素,这些晶体毒素在结构和生物学功能方面表现高度的多样性。本文介绍了苏云金芽胞杆菌晶体毒素的分类、命名方法,深入讨论了晶体毒素的氨基酸序列、三维结构、靶标生物和杀虫机理的多样性。评价了各种分类方法的特点,并展望了晶体毒素作用机制研究和未来晶体毒素新基因的发掘。     

苏云金芽孢杆菌晶体蛋白对北方根结线虫生物测定方法的建立和杀虫效果评价

 A bioassay procedure was developed to assess the toxicity of Bacillus thuringiensis crystal protein against Meloidogyne hapla,a root-knot nematode,under laboratory conditions.Reproducibility and precision of the bioassay results were optimal when forty 2nd stage juveniles were incubated in the dissolved crystal protein solution at 25℃,pH9.0 for 7 days.The juveniles were stained with 1% KMnO₄ for 2 hours or methylene blue solution for 1 hour to distinguish living and dead ones.By the bioassay procedure,the LC₅₀ value of strain YBT-1532 crystal protein against M.hapla was determined as 0.304±0.086 mg/mL(LC₅₀±1.96SE).Moreover,the strain YBT-1532 showed toxicity to Caenorhabditis elegans,a free-living nematode.All results indicated that YBT-1532 is a toxic strain to plant-parasitic nematode,and has the potential to control plant-parasitic nematode.     

利用双亲灭活原生质体融合技术选育高效苏云金芽胞杆菌和枯草芽胞杆菌融合菌株

苏云金芽胞杆菌B7发酵液在药后96 h对小菜蛾2龄幼虫致死率高达85.06%;枯草芽胞杆菌TL2对黄瓜枯萎病和辣椒疫霉病有显著拮抗活性(对峙培养5 d对病原菌的平均抑制率在60%以上)。本文对菌株B7和TL2的原生质体形成、完全灭活及融合的最佳条件分别进行了筛选,研究结果表明菌株B7在溶菌酶1.0 mg/m L、酶解70 min的条件下,原生质体形成率和再生率最佳,分别为85.0%和29.41%;菌株TL2在溶菌酶1.25 mg/m L、酶解50 min的条件下,原生质体形成率和再生率最佳,分别为80.00%和25.00%。菌株TL2原生质体完全灭活的最佳条件为60℃水浴35 min,菌株B7原生质体完全灭活的最佳条件为紫外照射25 min。灭活后的两亲本融合最佳条件为30℃水浴融合20 min后涂布再生培养基,用影印法连续传代10次以上,最后筛选出17株稳定的融合子,经过杀虫防病检测最后筛选到一株兼具两亲本特性的高效融合子TLB15。TLB15发酵液在药后96 h对小菜蛾2龄幼虫校正死亡率为93.44%,TLB15发酵液对黄瓜枯萎病和辣椒疫霉病(对峙培养5 d)的平均抑制率分别为60.00%和62.79%。     

高效微生物杀虫剂对蚊虫的杀灭作用

新疆阿勒泰北屯地区位于额尔齐斯河下游,夏季蚊虫泛滥,严重威胁当地人民的身体健康.本研究跟踪调查了各种水体的幼蚊滋生情况,确定了幼蚊发生的2个高峰期分别出现在5月下旬至6月上旬及6月下旬至7月上旬,同时确定了洪水型积水、排碱渠积水和漫灌林带积水是幼蚊高发的孳生地类型.采集并对蚊虫样品进行形态学鉴定,确定了该地区的优势蚊种为刺扰伊蚊Aedes vexans.用苏云金芽胞杆菌以色列亚种Bacillus thuringiensis subsp.israelensis(Bti)水剂对该蚊种进行了室内生测,其LC50和LC90分别为0.055和0.198 mg/L.分别选取3种高发孳生地的3处积水进行野外试验,发现48 h后该药剂对幼蚊的杀灭率均在96％以上,对大面积孳生地也有很好的杀灭作用.监测显示成蚊出现的高峰时间是每年的6月上旬至6月中旬及7月中旬至7月下旬.连续施药3年后,2013年的成蚊数量相比2011年时下降幅度超过50％.本研究对于北屯地区蚊虫的进一步控制以及Bti制剂在新疆的推广有重要的意义.     

Engineering of Bacillus thuringiensis insecticidal proteins

Bacillus thuringiensis (Bt) has been used as sprayable pesticides for many decades. Bt strains utilized in these products produce multiple insecticidal proteins to complement a narrow insect specificity of each protein. In the late 1990s, genes encoding Bt insecticidal proteins were expressed in crop plants such as cotton and corn to protect these crops from insect damage. The first Bt protein used in transgenic cotton was Cry1Ac to control Heliothis virescens (tobacco budworm). Cry1Ab was applied to corn to control Ostrinia nubilalis (European corn borer). Since these insects have developed resistance to Cry1Ac and Cry1Ab, new Bt proteins are required to overcome the resistance. In order to protect corn furthermore, it is desired to control Diabrotica virgifera (Western corn rootworm), Helicoverpa zea (corn earworm) and Spodoptera frugiperda (fall armyworm). Recently, many new Bt insecticidal proteins have been discovered, but most of them require protein engineering to meet the high activity standard for commercialization. The engineering process for higher activity necessary for Bt crops is called optimization. The seed industry has been optimizing Bt insecticidal proteins to improve their insecticidal activity. In this review, several optimization projects, which have led to substantial activity increases of Bt insecticidal proteins, are described.     

对草地贪夜蛾高毒力的苏云金杆菌菌株筛选

筛选对草地贪夜蛾高毒力Bt菌株,对于开发绿色高效防治草地贪夜蛾新产品具有重要意义。本研究从自行筛选的对夜蛾科害虫高毒力的Bt菌株资源中,选取9株菌株进行草地贪夜蛾室内毒力测定,并对高毒力菌株进行杀虫基因分析;选取室内毒力测定活性最高的3株菌株进行田间小区药效试验。结果表明,9株Bt菌株在药后7 d对草地贪夜蛾初孵幼虫均表现出显著的毒杀效果,LC50范围在0.07~3.38μg/g,其中毒力最高的3个菌株分别是KN50、KN11和KNR8,LC50分别为0.07、0.23和0.43μg/g,表现非常显著的致死效果;对KN50、KN11和KNR8等6种高毒力的Bt菌株的杀虫基因分析发现,他们都含有vip3Aa、cry2Ab、cry1Ac、cry1Ia杀虫基因。KN50、KN11和KNR8菌株的32000IU/mg制剂在田间对草地贪夜蛾表现出不同程度防效,其防效高低与室内毒力结果一致,其中KN50药后7 d防效最高,在200和400 g/667 m2下对1~3龄幼虫防效分别可达86.09%和95.22%,对不同龄期幼虫混发的防效为72.61%和86.59%。因此KN50、KN11和KNR8这3个菌株能作为备选高效菌株用于防治草地贪夜蛾新产品开发,为实现草地贪夜蛾的绿色防控、化学农药合理减替提供重要保障。