1株解淀粉芽孢杆菌HN011抑菌次级代谢产物的分析

[目的]分离和鉴定生防菌HN011在YPD条件下发酵的次级代谢产物.[方法]HN011少量(1 L)发酵,分别用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇进行液-液萃取,通过金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus的活性试验跟踪确定活性部位;通过放大发酵,对活性部位进行分离得到单体化合物.利用核磁共振和质谱等手段,鉴定单体化合物.[结果]生防菌HN011少量发酵后,发酵液经不同极性的有机溶剂液-液萃取,萃取物的活性试验表明,乙酸乙酯部位活性最强,其次氯仿部位,正丁醇部位活性较弱,石油醚部位、水部位活性不明显.通过放大发酵,在活性部位分离出15个单体,结构鉴定表明,主要为小分子的环二肽.[结论]生防菌HN011在YPD的发酵条件下,次级代谢产物主要为一些小分子的环二肽.     

1株解淀粉芽孢杆菌HN011抑菌次级代谢产物的分析

【目的】分离和鉴定生防菌HN011在 YPD条件下发酵的次级代谢产物。【方法】HN011少量 (1 L) 发酵,分别用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇进行液-液萃取,通过金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus 的活性试验跟踪确定活性部位;通过放大发酵,对活性部位进行分离得到单体化合物。利用核磁共振和质谱等手段,鉴定单体化合物。【结果】生防菌HN011少量发酵后,发酵液经不同极性的有机溶剂液-液萃取,萃取物的活性试验表明,乙酸乙酯部位活性最强,其次氯仿部位,正丁醇部位活性较弱,石油醚部位、水部位活性不明显。通过放大发酵,在活性部位分离出15个单体,结构鉴定表明,主要为小分子的环二肽。【结论】生防菌HN011在YPD的发酵条件下,次级代谢产物主要为一些小分子的环二肽。     

功能基因组注释探讨解淀粉芽孢杆菌的益生机制

旨在利用功能基因组注释的方法,深入挖掘解淀粉芽孢杆菌BLCC1-0238基因组中与益生作用密切相关的功能基因。结果表明,解淀粉芽孢杆菌BLCC1-0238的基因组大小约为3.88 Mb,含有3 941个编码序列,有8个基因簇参与聚酮类化物、非核糖体脂肽和芽孢杆菌素的生物合成,部分基因簇参与环状脂肽罗克霉素的合成;该菌还具有1个编码肽基脯氨酰异构酶的基因,12个与耐酸相关的基因和7个参与编码水解酶的基因。综上所述,这些基因的存在有助于动物机体对抗病原菌和胁迫因素,还有利于对营养物质的消化和吸收。     

解淀粉芽孢杆菌抗病机制研究进展

[目的]了解解淀粉芽孢杆菌抑病机制研究现状,以期为其生物类制剂研究与相关产品开发提供依据。[方法]通过文献检索,综述了解淀粉芽孢杆菌的生物学特性及主要代谢产物、抗病作用机理、对病害的拮抗和对土壤的改良效应等方面的研究进展。[结果]解淀粉芽孢杆菌通过分泌次生代谢产物破坏病原菌细胞结构;能够诱导寄主防御,提高与抗病性相关酶的酶活性;能产生抑制病原菌生长发育的挥发性物质;能够分解环境中难溶性微量元素,提高土壤肥力。[结论]解淀粉芽孢杆菌抑菌促生方面已有许多研究成果,应进一步提升其应用效果。建议对解淀粉芽孢杆菌进行多组学研究,并优化其生物制剂质量及使用方法,开发混合生物制剂等,使其微生物产品更加高效。     

醉马草内生解淀粉芽孢杆菌MY6的抑菌促生功能测定

本试验对醉马草内生解淀粉芽孢杆菌MY6抑菌和促生功能进行了测定.结果表明,解淀粉芽孢杆菌M Y 6对马铃薯褐腐病菌和番茄早疫病菌等7种病原菌的最高抑菌率达97.68％,最低也为55.56％,具有显著的抑制作用,且对小麦和玉米等8种作物的萌发均有促生作用,总体表现出良好的开发前景.     

解淀粉芽孢杆菌的研究进展

本文论述了解淀粉芽孢杆菌在生物防治方面的研发和应用概况,以及其作用机制的研究进展。     

解淀粉芽孢杆菌的研究进展

解淀粉芽孢杆菌是具有良好生物防治功能的益生菌,广泛应用于植物病原真菌和细菌的防治,其功能基因组、蛋白组和代谢组学的研究已取得了一定的进展。综述了解淀粉芽孢杆菌在分类学鉴定、抗菌物质、抗菌机理以及与植物互作等方面的最新研究进展。     

抗苹果树腐烂病解淀粉芽孢杆菌TS-1203的抑菌活性物质稳定性及抑菌谱测定

【目的】研究将抗苹果树腐烂病解淀粉芽孢杆菌TS-1203开发成高效低毒生防制剂的潜力.【方法】采用生长速率法测定解淀粉芽孢杆菌TS-1203的生长曲线和抑菌活性物质稳定性.【结果】解淀粉芽孢杆菌TS-1203生长曲线呈"S"型,13h后进入对数生长,43h后趋于稳定期;物理因素光照、温度与紫外照射对抑菌活性物质影响不大,只有当温度与紫外照射时间分别为100℃、60s时,其粗提液对苹果树腐烂病菌(Valsa mail)抑菌率显著下降,与对照达到显著差异水平(P0.05);化学因素中,只有强酸强碱,金属离子为Mg~(2+)时,其抑菌率显著下降,与对照达到显著差异(P0.05);不同饱和度硫酸铵对粗提液抑菌率影响也不明显;粗提液抑菌谱测定发现其对多种病原菌有抑制作用,其中对立枯丝核菌和链格孢抑菌率均达80%以上.【结论】解淀粉芽孢杆菌TS-1203粗提液有良好的稳定性,且抑菌谱广.     

一株有抑菌活性解淀粉芽孢杆菌的鉴定

为了研究环境中芽孢杆菌对常见细菌的抑菌能力,从池塘底泥中分离出6株芽孢杆菌进行了鉴定和抗菌能力研究。以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌和嗜水气单胞菌为研究对象,采用管碟法测定了细菌发酵上清液的抑菌活性,测定了发酵上清液和病原菌共培养的生长曲线,并采用生化和16S rRNA基因序列分析对细菌进行鉴定。结果发现其中1个菌株的发酵上清液对嗜水气单胞菌和藤黄微球菌的生长具有抑制作用,进一步通过生化和分子鉴定发现该菌株为解淀粉芽孢杆菌。结果表明:分离的解淀粉芽孢杆菌的发酵产物对嗜水气单胞菌和藤黄微球菌具有抑制作用,可以作为一种潜在的益生菌用于防治嗜水气单胞菌和藤黄微球菌感染。     

10亿芽孢／g解淀粉芽孢杆菌可湿性粉剂的研究

[目的]初步确定解淀粉芽孢杆菌可湿性粉剂的制备工艺。以解淀粉芽孢杆菌lyxjj-1为研究对象,对填料、润湿剂、分散剂、稳定剂、UV保护剂进行筛选。[结果]其工艺配方为:硅藻土10%为填料,PVA 7.2%为分散剂,D425 4.8%为润湿剂,CMC-Na 2.0%为稳定剂,FWA 0.1%为保护剂。该粉剂的芽孢含量达1.2×109cfu/g,悬浮率为80%,润湿时间为47 s,热贮分解率为23.2%。[结论]该制剂质量符合相关要求,可进一步研究。     

大蒜有机硫化物对解淀粉芽孢杆菌的 抑菌作用及机理

【目的】明确大蒜有机硫化物(GOS)对豆制品优势腐败解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens的抑菌活性及作用机理。【方法】通过抑菌圈法和二倍稀释法测定GOS对菌株的抑菌活性、最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC),并分析其对细菌生长曲线及胞外蛋白酶活性的影响;分析GOS处理后解淀粉芽孢杆菌代谢活性、碱性磷酸酶活性、β–半乳糖苷酶活性及胞外溶液电导率的变化,并结合扫描电镜观察菌体形态变化,探讨GOS对解淀粉芽孢杆菌的抑菌机理。【结果】3 g/mL的GOS对解淀粉芽孢杆菌DY1a和DY1b的抑菌圈直径分别为31.7和25.7 mm,MIC均为30 mg/mL,MBC分别为240和480 mg/mL。30 mg/mL GOS对菌株DY1a和DY1b胞外蛋白酶活性的抑制率分别为47.3%和15.6%,使细菌细胞代谢活性(D490 nm)分别下降了2.771和4.091,胞外碱性磷酸酶活性分别提高了0.029和0.036 U/mL,胞外β-半乳糖苷酶活性(D420 nm)分别提高了0.047与0.016,胞外溶液电导率分别提高了0.060和0.031 mS/cm。扫描电镜结果显示,GOS处理后的菌株细胞表面出现皱缩、孔洞式塌陷和破裂。【结论】大蒜有机硫化物对解淀粉芽孢杆菌抑制作用明显,其抑菌机理与影响细菌细胞壁、细胞膜的通透性和完整性,干扰细菌生理代谢活动有关。     

Bacillus amyloliquefaciens YM6对盐胁迫条件下玉米幼苗生理及生化的影响[JZ）][ST][WT]

为了解淀粉芽孢杆菌YM6菌株（Bacillus amyloliquefaciensYM6）对盐胁迫条件下玉米幼苗生理生化的影响,采用水培法培育玉米,水培营养液中含75 mmol/L NaCl作为盐胁迫条件,接种YM6后可以显著提高玉米耐盐能力。用透射电镜观察YM6菌株对盐胁迫下玉米幼苗根尖细胞核、线粒体、胞间连丝等组织结构的变化;利用微量法测定YM6菌株对玉米幼苗内超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）、过氧化氢酶（CAT）酶活;还测定玉米组织内过氧化氢（H₂O₂）、丙二醛（MDA）、脯氨酸（Pro）。结果表明：接种YM6菌株可有效缓解盐胁迫对玉米幼苗根尖亚细胞结构的损伤;与不接种对照组相比,玉米植株地上和地下组织内的H₂O₂质量分数显著降低（P<0.05）;而Pro质量分数、SOD、CAT、POD活性均显著提高 （P<0.05）。YM6菌株可通过提高玉米植株内抗氧化酶活性,降低氧化物质量分数以及提高Pro质量分数,从而缓解盐胁迫对玉米根尖细胞损伤,提高玉米对盐胁迫的耐受性。     

尖孢镰刀菌HG-11响应解淀粉芽胞杆菌B501胁迫的机制分析

前期研究发现生防拮抗菌解淀粉芽胞杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）B501能够显著抑制尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）HG-11,检测发现B501可以形成生物膜,具备产生纤维素酶和淀粉酶的能力。目前生物防治主要着眼于生防微生物的抑菌机制,而病原菌如何应对生防微生物胁迫的机制却常被忽略,因此旨在利用RNA-seq技术研究HG-11对B501生防胁迫响应的分子机制。结果表明,与对照HG-11样品相比,B501发酵液处理的HG-11样品中共有3 171个基因显著差异表达,其中2 106个基因上调表达,1 065个基因下调表达。上调表达有与细胞壁和细胞膜结构相关的基因如甾醇3-β-葡萄糖基转移酶基因、脂肪酸合成酶基因等,与抗氧化相关的上调表达基因有氧化物酶基因、P-P-键-水解驱动的跨膜转运蛋白基因等,以及与核糖体和线粒体相关的上调表达基因,如核糖体蛋白复合物、异柠檬酸脱氢酶等基因;下调表达的酰基转移酶基因、DNA连接酶基因等均为与细胞修复相关的基因。推测B501的抗菌物质通过破坏细胞壁及细胞膜的结构,并进入细胞内部破坏核糖体和线粒体从而抑制真菌生长。而HG-11通过调节与此相关的多个靶标蛋白或合成途径的基因表达,以缓解B501的生防胁迫作用。初步明确了尖孢镰刀菌应对生防解淀粉芽胞杆菌胁迫的基因表达差异,病原菌的自我防御机制或许是生防菌株易变表现的一个重要因素,提高了对病原菌与生防菌互作结构的认识。     

解淀粉芽孢杆菌L-S60生物学特性及其固态发酵工艺研究

以优良植物生防菌解淀粉芽孢杆菌L-S60为研究对象,通过单因素试验研究酸碱、盐浓度、温度对该菌株生长的影响;检测解淀粉芽孢杆菌L-S60的产酶和抑菌特性;并研究优化解淀粉芽孢杆菌L-S60的固态发酵工艺。结果表明:解淀粉芽孢杆菌L-S60具有较宽的酸碱耐受性,盐的质量分数10%时菌落数会显著下降,80℃以下菌落数无明显变化。解淀粉芽孢杆菌L-S60能产生蛋白酶、纤维素酶和淀粉酶,且对多种病原真菌有抑制作用。L-S60的最佳固体发酵条件为:温度35℃、接种量30%、料水质量比1∶0.45、装瓶量40%和发酵时间42h;最佳固体培养基组成为,m(花生饼粉)∶m(麦麸)∶m(棉粕)=53∶35∶12,外源物质蛋白胨、葡萄糖和MgSO4·7H2O添加量分别为3.00、2.00和0.20g/kg,此时,解淀粉芽孢杆菌L-S60菌落数达到2.42×1010 CFU/g。解淀粉芽孢杆菌L-S60具有很好的开发利用价值。     

解淀粉芽孢杆菌gfj-4发酵上清液及与化学杀菌剂混配对玉米大斑病病菌的抑制作用

【目的】探究解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens菌株gfj-4次级代谢产物及与化学杀菌剂的复配剂对玉米大斑病病菌Exserohilum turcicum的抑制活性。【方法】采用菌丝生长速率法,测定了种子液培养时间、发酵时间对抑菌物质产生的影响以及发酵上清液、脂肽粗提物、发酵上清液与7种化学杀菌剂混配对病菌的抑制效果。【结果】解淀粉芽孢杆菌gfj-4种子液最佳培养时间为6 h,最适发酵时间为72 h;发酵上清液和脂肽粗提物对病菌的EC_(50)分别为0.32和0.11μL·mL~(-1)。玉米大斑病菌对苯醚甲环唑、戊唑醇、腐霉利和腈菌唑的敏感性较高,其中苯醚甲环唑对病菌的EC_(50)达0.10μg·mL~(-1);代森锰锌和福美双对病菌的EC_(50)分别为12.03和12.08μg·mL~(-1),而丙森锌对病菌的抑制活性较差,EC_(50)为24.73μg·mL~(-1)。生防菌gfj-4发酵上清液和苯醚甲环唑混配主要表现为相加作用,其中以体积比3∶7混配的毒性比最高,为1.28;发酵上清液与代森锰锌、丙森锌都以体积比2∶8混配的毒性比最高,分别为1.28和1.67。【结论】解淀粉芽孢杆菌gfj-4及其与苯醚甲环唑、丙森锌的混配剂在农药减量增效方面具有重要的利用价值。     

解淀粉芽孢杆菌F11抗真菌活性研究

解淀粉芽孢杆菌F11对核盘病菌、玉米大斑病菌、猕猴桃软腐病菌、烟草炭疽病菌等12种作物病原菌具有高效、广谱的抑菌效果,研究其生物防治机理可为该菌株应用于植物病害防治提供理论依据。本研究采用混菌法、牛津杯法及显微镜观察法探究了菌株F11发酵液不同稀释倍数、发酵液3种分离液（菌株发酵液离心分离获得上清液A,上清液A继而进行酸沉淀和甲醇提取分别获得发酵上清液B和胞外代谢物粗提液）对病原菌的抑制效果及抑菌特性。混菌法结果表明,菌株F11的抑菌效果随稀释倍数的增加而逐渐下降,但1 000倍稀释液对樟树炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides）的相对抑制率和10倍稀释液与发酵原液对烟草黑胫病菌（Phytophthora parasitica var.nicotianae）、核盘病菌（Sclerotinia sclerotiorum）、玉米大斑病菌（Setosphaeria turcica）、猕猴桃软腐病菌（Botryosphaeria dothidea）的相对抑制率均达100%,且所列稀释液与发酵原液间无显著差异。牛津杯法结果表明,上清液B中不含抑菌活性物质,而上清液A与胞外代谢物粗提液中均含有抑菌活性物质。显微镜观察结果显示,胞外代谢物粗提液中的抑菌活性物质可使病原菌菌丝消融、断裂、扭曲、缠绕变形、原生质体凝集渗漏、形成泡囊结构等。研究表明,菌株F11病原菌的抑菌效果随发酵液稀释倍数增加而下降,其对樟树炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides）的防治效果最好,发酵液经1 000倍稀释后相对抑制率仍达100%;对烟草黑胫病菌、核盘病菌、玉米大斑病菌、猕猴桃软腐病菌四种病原菌则可采用10倍稀释液代替发酵原液进行防治。其抑菌活性物质存在于胞外代谢物粗提液中,该物质的抑菌特性和脂肽抗生素的作用基本一致,推测为一类脂肽抗生素。     

环境因素对Bacillus amyloliquefaciens TF28在土壤中定殖的影响

为了明确生防菌株Bacillus amyloliquefaciens TF28在土壤中的定殖动态,采用活菌计数及菌株特异PCR验证相结合的方法,研究温度、含水量、pH、接种量、土壤类型和病原菌对其在离体土壤中定殖的影响。结果表明,适于菌株TF28定殖的温度、pH、含水量范围较广,在20～35℃,pH 4.5～8.6,含水量5%～35%范围内均能有效定殖;25℃、弱酸性和中性、15%含水量更利于其定殖;接种量和病原菌显著影响其定殖,接种量越大,定殖能力越强;病原菌在接种后14 d内显著促进其定殖;另外,土壤有机质质量分数高更利于其定殖。该研究为菌株TF28的推广应用提供了理论依据。     

高寒草地牧草内生细菌262AG6拮抗功能测定及鉴定

为明确高寒草地牧草矮生嵩草(Kobresia humilis)内生细菌262AG6的生防潜力,采用平皿对峙法测定其抑菌功能,并综合形态学特征和16SrDNA序列分析对其进行鉴定。结果表明,262AG6对马铃薯炭疽病菌(Colletotrichum coccodes)的抑制效果达到81.33%,对其他多种病原真菌也具有良好抑制能力,且抑菌能力稳定;在含100mg·L~(-1)色氨酸和不含色氨酸的King培养液中分泌IAA的量分别为8.04mg·L~(-1)和7.98mg·L~(-1);具有溶解无机磷和固氮的能力;262AG6革兰氏染色呈阳性,杆状,菌体大小为(1.63~3.65)μm×(0.38~0.95)μm,综合形态特性、16SrDNA和gyrB DNA序列分析将菌株262AG6鉴定为解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。     

大豆疫霉生防菌解淀粉芽孢杆菌JDF3的鉴定

分离获得1株细菌JDF3，它能有效地抑制大豆疫霉菌丝的生长和孢子囊的形成。该菌株对细极链格孢、小麦全蚀病菌和西瓜炭疽病菌的抑制率高于70%。盆栽结果显示细菌JDF3对大豆疫病的防治率为70.7%。菌株形态特征、18项生理生化和gyrB基因测序结果鉴定菌株JDF3为解淀粉芽孢杆菌。