玻璃化液对泥鳅胚胎成活率的影响

玻璃化液作为一种比较理想的低温保护剂 ,对鼠胚胎和牛胚胎保存已获成功 ,但对适合于鱼类胚胎保存的至今未看到报道。为了研究玻璃化液对鱼类胚胎的低温保存效果 ,使鱼类胚胎低温冷冻保存获得成功 ,作者开展了利用不同的低温保护剂 ,采用不同浓度的组合 ,经超低温冷冻筛选后找出了能形成玻璃化的最低浓度 ,并利用这些能形成玻璃化的抗冻剂对泥鳅胚胎进行了毒性实验 (1998) ,但还没有找出对胚胎保存效果好、毒性小、“高渗”损伤小的最佳玻璃化液。本文进一步利用这些玻璃化液对在不同条件下 ,对不同发育时期的泥鳅胚胎延长玻璃化对胚胎的作…     

玻璃化液对泥鳅胚胎的渗透及毒性作用

通过不同抗冻剂组成的玻璃化液在室温和低温下对泥鳅胚胎的平衡处理，证实了抗冻剂在室温下对胚胎的渗透比在低温下迅速。不同组合的抗冻剂渗透速度不同，但对胚胎的作用均表现为使胚胎从一开始的透明状态逐步变成乳白色不透明状态，从乳白色不透明状态逐步变成透明状态，再从透明状态逐步变成乳白色不透明状态。在一定的时间范围内，更换解冻液后，这种反应呈“可逆反应”，胚胎能够成活。证明了胚胎在抗冻剂中，当第一次变成不透明时并不是真正死亡，真正的死亡是胚胎达到完全透明以后，第二次变成乳白色不透明状态。     

泥鳅胚胎玻璃化液超低温冷冻保存研究

泥鳅胚胎（胚孔封闭期）用10＃玻璃化液作为低温保护剂，经低温（－196℃）冷冻保存17h后，38℃水浴解冻，解冻后的胚胎获得了成活。在稀释液B1、B2、B3中分别有26．7％，15．0％，3．0％成活的胚胎。解冻后的胚孔封闭期胚胎经过50h的培养，胚胎从胚孔封闭期发育至尾鳍出现期。     

不同抗冻剂对牙鲆胚胎毒性研究以及玻璃化颗粒冷冻保存方法的应用

以牙鲆(Paralichthys olivaceus)不同发育期胚胎为实验材料,研究了7种渗透性和5种非渗透性抗冻剂对牙鲆尾芽期和心跳期胚胎的毒性,同时对玻璃化液在不同胚胎发育期的毒性作用,以及玻璃化颗粒冷冻过程中,冷冻颗粒降温和解冻的时间进行了研究。结果表明,单一渗透性抗冻剂对牙鲆胚胎的毒性随着抗冻剂浓度的升高、平衡时间的延长而提高,其毒性由大到小依次为乙二醇(EG)、酒精(EtOH)、甘油(Gly)、二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基亚砜(DMSO)、甲醇(MeOH)、1,2-丙二醇(PG)。非渗透性抗冻剂中聚乙烯吡咯酮(PVP)对牙鲆尾芽期胚胎的毒性最强,其次是蔗糖和D果糖,葡聚糖和葡萄糖毒性最弱。在总体积分数一定的情况下,PG、MeOH与DMSO体积比为9∶6∶5的混合抗冻剂对牙鲆尾芽期胚胎毒性最低;各发育期胚胎经过玻璃化液平衡后,尾芽期以前胚胎的成活率随胚胎发育期逐渐升高,心跳期以后逐渐降低,尾芽期和心跳期成活率最高。含胚胎的玻璃化颗粒冷冻降温时间最短为15.09 s,解冻时间最短为6.22 s;而不含胚胎的玻璃化颗粒冷冻降温和解冻时间分别为(13.83±1.86)s和(7.20±0.90)s。将PG、MeOH与DMSO按体积比9∶6∶5配成总体积分数为35%的混合溶液,再添加5%的蔗糖配制成玻璃化液,采用此玻璃化颗粒冷冻方法对173粒牙鲆尾芽期至心跳期胚胎进行超低温冷冻保存,解冻后共获得4粒成活胚胎。     

大菱鲆胚胎玻璃化方法研究

用大菱鲆(Scophthalmus maximus)神经期胚对6种抗冻剂的毒性进行检测,发现其毒性排列为1,2-丙二醇(PG)<甲醇(MeOH)<甘油(Gly)<二甲基甲酰胺(DMF)<乙二醇(EG)<二甲亚砜(DMSO).以DMF为主因子配制和筛选出11种玻璃化程度较好的玻璃化液,并用大菱鲆肌节期胚对其中5种玻璃化程度最好的玻璃化液进行检测,结果显示,A4(DMSO 20%+DMF 25%)、A7(DMSO 25%+DMF 20%)较适合于大菱鲆胚胎的平衡处理,利用A4和A7平衡处理神经期胚、肌节期胚、心跳期胚、出膜前期胚,结果显示大菱鲆神经胚和肌节胚对玻璃化液的适应能力较强.实验测试出不同时期胚胎在两种玻璃化液中的成活率,为大菱鲆各期胚胎在玻璃化液中的平衡处理提供了依据.利用大菱鲆肌节胚对不同的平衡步骤进行了筛选,发现五步法的平衡效果较好.     

大菱鲆胚胎的玻璃化冷冻保存

Vitrification solutions were examined for their suitability of cryopreservation of turbot (Seophthulnms maximus) embryos. PMPI gave higher survival rate (75.68%) than other vitrification solutions and was considered to be suitable liar the cryopreservation of turbot embryos. The freezing point of the vitrification solutions consisted of PG and MeOH in the proportion of 3:2 was measured when the vitrification solutions were cryopreserved. It showed that the vitrification solutions with a cryoprotectant concentration of over 41% have no freezing point and the freezing points of vitrification solutions containing 33.33%-40% cryprotectants were between -32.4℃ and -65.4℃, The freezing point decreased with the increase of cryoprotectant concentration. The resistance of turbot embryos at different stages to the cryoprotectants was studied, It was found that the turbot embryos from 4-5 pairs somite to tail bud were more resistant to cryoprotectants and suitable to vitrify. A live embryo was obtained after cryopreservation in liquid nitrogen for 14h and was hatched out。     

牙鲆胚胎玻璃化冷冻及解冻过程中的温度因子与玻璃化率

为避免鱼类胚胎玻璃化冷冻过程中脱玻璃化现象发生,本文对冷冻过程中温度变化及解冻方法进行了研究.在室温13℃下,将含有玻璃化液FVS3的麦管直接投入到-196℃的液氮中,麦管内温度达到-196℃时,所用的时间为15.46±1.38s,降温速率为800℃/min.对玻璃化麦管在35～45℃水浴中解冻时间进行测定.结果显示,解冻所需时间在6.17～7.94s之间,麦管从-196℃升高到13℃的解冻速率为1500～2000℃/min.当水浴温度从37℃逐步升高到72℃时,对水浴表面蒸气温度的变化进行了测定,相应水温下蒸气温度从25.47℃升高到38.6℃.在麦管中加入不同浓度的玻璃化液FVS1、FVS2、FVS3和FVS4进行玻璃化冷冻,然后将麦管分别在37℃水浴中和28.6℃的蒸气中解冻时玻璃化率进行研究.结果显示,在蒸气中解冻时的玻璃化率明显高于水浴中解冻;麦管玻璃化率在水浴中解冻时不稳定,在蒸气中解冻时表现稳定,玻璃化率随着玻璃化液浓度的升高有逐渐升高的趋势.对含有牙鲆胚胎的玻璃化冷冻麦管分别在37℃水浴和28.6℃蒸气中解冻,结果表明,蒸气中解冻时的玻璃化率同样明显高于水浴中解冻.     

中华绒螯蟹胚胎的玻璃化冷冻保存

研究了中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)4个不同发育时期胚胎对A号玻璃化液的耐受性和玻璃化冷冻保存。结果表明,不同时期的胚胎对玻璃化液的耐受能力不同,其中卵裂期胚胎对玻璃化液的耐受能力较差(20~30 min),前无节幼体期和原溞状幼体期胚胎在玻璃化液中的适应时间较长(40~60 min);随着平衡时间的延长,中华绒螯蟹各个时期的胚胎成活率逐渐下降。中华绒螯蟹前无节幼体期胚胎在A号玻璃化液中平衡40 min,0.25mol/L的蔗糖分别洗脱5、10、15、20 min后,胚胎成活率无显著性差异(P>0.05)。前无节幼体期胚胎在A号玻璃化液中平衡40 min,在–196℃冷冻40 min,快速解冻后用0.25 mol/L的蔗糖洗脱10 min,有8个胚胎成活,成活率为(9.3±2.5)%,胚胎培养至第4天死亡;原溞状幼体期胚胎在A号玻璃化液中平衡40 min,在–196℃冷冻35 min,经相同浓度的蔗糖洗脱相同的时间,有7个胚胎成活,成活率(11.3±3.6)%,培养至第6天时,1个胚胎孵化出膜,出膜胚胎成活1d后死亡。     

鱼类胚胎冷冻保存前几个因子对其成活率影响的研究

1.稀释液渗透压升高是影响胚胎成活的主要因素,在达到480mOsm/L时胚胎全部死亡。2.在室温和0℃条件下几种抗冻剂对胚胎的极限浓度分别为二甲亚砜16％和20％,甘油4％和5％,乙二醇12％和12％,甲醇0℃下为20％。3.原肠期以前的胚胎为敏感期胚胎,不宜进行低温冷冻保存。4.冻前处理超过180分钟后胚胎出现畸形变化。     

EFS40和EFS60对青鳉胚胎毒性的研究

以青鳉受精卵为试验材料,研究了2种抗冻液EFS40和EFS60对5个不同发育期的胚胎的毒性作用.试验结果表明,青鳉的囊胚期胚胎对EFS40和EFS60的毒性耐受力最差,在EFS40 和EFS60中处理2 min后的成活率分别为41.7%和35.6%,孵化率分别为38.2% 和31.9%,与对照组成活率(96.7%)与孵化率(93.3%)差异极显著(P<0.01);6肌节、16肌节和24肌节胚胎对EFS40 和EFS60的耐受力依次增强;发眼期胚胎的耐受力最强,其胚胎在EFS40中处理30 min后的成活率仍为93.3%,孵化率为77.3%,其余各时期胚胎成活率均显著地降低(P<0.01),发眼期胚胎在EFS60中处理20 min的成活率为75.9%,孵化率70.6%,其余各时期胚胎的成活率都显著地降低(P<0.01).各时期的青鳉胚胎在EFS40和EFS60中都随着毒性处理时间延长其成活率和孵化率逐步降低.EFS60对青鳉胚胎的毒性大于EFS40.     

不同磷酸盐对冻白鲢品质影响的研究

本文研究了不同磷酸盐处理对冻结白鲢品质的影响。通过质地、持水能力和ＥＰＮ值等指标的测定，结果表明：多聚磷酸钠（３％）＋氯化钠（３％）溶液为一种较为有效的添加剂。     

“四大家鱼”对暴发性鱼病的抗病力的种间差异↑（*）

嗜水气单胞菌所引起的暴发性鱼病，是近年来危害我国淡水养殖业的主要病害之一。本文报导草鱼、青鱼、鳙、鲢对该病的抗病力的差异及机理的研究结果。在菌液浓度为６．０×１０￣８ＣＦＵ／ｍｌ（１０°，１０￣（－１），１０￣（－２），１０￣（－３）四个稀释度），注射剂量为０．３ｍｌ／尾时，半数致死生（ＬＤ＿（５０））分别是草鱼１０￣（－０．４８），青鱼１０￣（１．２５），鳙１０￣（－１．３７），鲢１０￣（－２．１９），差异显著（Ｐ＜Ｐ＿（０．０５））。四种鱼的白细胞吞噬百分率存在极显著差异（Ｐ＜Ｐ＿（０．０１）），其中草鱼极显著地（Ｐ＜Ｐ＿（０．０１））强于其他三种鱼。四种鱼的补体替代途径（Ｃ＿３旁路）杀菌力１２小时测定结果的大小顺序是草鱼＞青鱼＞鳙＞鲢，差异显著（Ｐ＜Ｐ＿（０．０５））。草鱼的补体总量极显著地（Ｐ＜Ｐ＿（０．０１））低于鲢、鳙。四种鱼的红细胞Ｃ＿３ｂ受体花环率存在显著差异（Ｐ＜Ｐ＿（０．０５）），顺序为鳙＞鲢＞草鱼＞青鱼。“四大家鱼”对暴发性鱼病的抗病力的种间差异，不仅同它们的免疫力的大小有关，也同它们对特定病原的易感性的大小有关。     

异育银鲫胚胎受电场辐照后的理化特性

在异育银鲫胚胎的发育初期，进行短时间的强电场辐照，不仅能提高胚胎的孵化出苗率、发育期的抗低温能力、抗病能力和成活率，而且能加快其后期生长发育的速度。为探索其机理，我们选用这种鲫鱼的肌蛋白作为材料，进行了SDS-梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳和氨基酸组分分析，还测量了它们的冷冻固化电子自旋共振波谱(ESR谱)，并对其外形特征作了观察比较。     

鱼类胚胎低温冷冻保存降温速率研究

在低温下采用慢速降温速率，以０．２－０．５℃／分降至－４０℃以上温度，胚胎获得２０％以上成活率。在超低温下采用快速降温速率，以２℃／分降至－４０℃，再以１０℃／分降至－１９６℃，胚胎获得了９０％以上复活率。     

清水下塘的鲢苗生长试验

研究了清水下塘的鲢苗生长情况。结果表明，在15天的饲养期内，清水下塘的鲢苗相对生长率低于正常的鲢苗相对生长率。     

鱼类特异性代谢物对草鱼、鳙和尼罗非鲫耗氧率的影响

以草鱼、鳙和尼罗非鲫互为供体和受体,研究其特异性代谢物对耗氧率的影响。结果表明：①在草鱼“代谢水”中,草鱼耗氧率显著下降（P＜0．001）,鳙和尼罗非鲫耗氧率均显著上升（P＜0．001）;②鳙“代谢水”中,鳙耗氧率显著下降（P＜0．001）,草鱼耗氧率无显著变动（P＞0．05）;③在尼罗非鲫“代谢水”中,3种鱼的耗氧率均无显著变动（P＞0.05）。实验揭示了鱼类特异性代谢物对代谢影响的存在,且这种影响因种而异。     

鳜鱼、青鱼、草鱼、鲤、鲫、鲢消化酶活性的研究

鳜鱼、青鱼、草鱼、鲤、鲫、鲢肝脏蛋白酶活性低于肠蛋白酶。肠蛋白酶活性，鳜鱼最高，其余依次为青鱼、鲤、鲢、草鱼、鲫。鳜鱼、鲢的肠蛋白酶活性由前肠向后肠递减；而青鱼、鲤、草鱼的则由前肠向后肠递增；鲫则中肠活性最低。六种鱼不同组织的脂肪酶活性因鱼而异。青鱼、鳜鱼、鲤、鲢肝脏中脂肪酶活性低于肠脂肪酶活性（Ｐ＜０．０１）；而草鱼和鲫肝脏中脂肪酶活性与肠脂肪酶活性差异不明显（Ｐ＞０．０５）。六种鱼肝脏中脂肪酶活性由高到低依次为鳜鱼＞鲢＞鲫＞草鱼＞青鱼＞鲤；肠脂肪酶活性顺序为鳜鱼＞鲢＞青鱼＞鲤＞草鱼＞鲫。脂肪酶活性与鱼类食性无明显相关性。不同组织间淀粉酶活性存在差异。鳜鱼的肝脏和肠均有较高淀粉酶活性，青鱼和鲫肝脏中淀粉酶活性低于肠中的；草鱼、鲤和鲢肝脏中淀粉酶活性高于肠中的，但差异不显著。六种鱼中鳜鱼的肝脏淀粉酶活性明显高于其它五种无胃鱼，它们的淀粉酶活性顺序依次为鳜鱼＞鲢＞鲤＞草鱼＞青鱼＞鲫；肠淀粉酶活性顺序为鳜鱼＞鲫＞鲤＞青鱼＞鲢＞草鱼。     

鲢在低温冻藏时的生化和质地特性研究

本试验旨在通过测定鲢在低温冻藏时的生化和质地特性参数之变化规律,来考察几种冻藏方法对其品质的影响,从而对鲢的冻藏提出合理的工艺。生化特性参数以K值和EPN值来检验。质地特性采用具有样品测定室为挤压剪切室的 Ottawa 质地测定系统。试验结果表明:①冻结前的去内脏等处理可很显著地影响肌肉的鲜度K值(P<0.01);②快冻比慢冻可减少质地的损失,快冻后冻藏的肌肉鲜度很明显地比慢冻的好(P<0.01);③-30℃冻藏比-18℃冻藏可显著地减缓蛋白质变性的速度(P<0.05);④冻藏时是否镀冰衣,其K值和EPN 值在半年内无显著性差异(P>0.10)。     

低pH水平对鲤鱼生长及血糖浓度影响的研究

本文在实验室条件下，研究了低pH水平对鲤鱼生长及血糖浓度影响。暴露于pH4.5～5.0的鲤鱼血糖有明显升高，体重明显下降，抑制生长。低pH水平加铝试验中，暴露于pH≤5.5时，鲤鱼血糖浓度明显上升。