大田软海绵酸对HL-7702肝细胞毒性效应的研究

[目的]探讨大田软海绵酸（okadaic acid,OA）对HL-7702肝细胞的毒性效应。[方法]通过细胞计数试剂盒（Cell Counting Kit-8,CCK-8）、细胞形态学观察及流式细胞术等方法,从细胞增殖、细胞凋亡等方面探讨OA对HL-7702肝细胞的毒性效应。[结果]与溶剂对照组相比,OA对HL-7702肝细胞增殖有明显的抑制作用,细胞增殖抑制率随着OA浓度的增加而增加,同时随着染毒时间的延长,细胞增殖抑制率也明显增加;与对照组相比,作用HL-7702肝细胞24h后,5nmol/LOA可明显诱导细胞发生凋亡。[结论]OA可以通过抑制细胞增殖及诱导细胞凋亡的方式对HL-7702肝细胞产生毒性效应,且呈现剂量-效应关系。     

蝉蜕水提物对小鼠D-氨基半乳糖急性肝损伤的保护作用

探讨不同浓度蝉蜕水提取物对小鼠D-氨基半乳糖(D-GalN)急性肝损伤的保护作用。将60只小鼠随机分为空白对照组、D-GalN模型组(模型组)、联苯双酯滴丸组、蝉蜕水提取物低、中、高3个剂量组,共6组。每组小鼠均按每千克体重剂量灌胃给药,连续给药13 d,末次给药12 h后,按600 mg/kg腹腔注射10%D-GalN诱导急性肝损伤模型。造模24 h后,计算小鼠肝指数,测定血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性及心肌组织、肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,HE染色观察肝组织病理学变化。结果表明,与空白对照组比较,模型组小鼠肝脏指数及血清ALT、AST活性升高(P0.01),肝脏、心肌组织中SOD活性降低,MDA含量增高(P0.01),肝组织炎症坏死广泛。与模型组比较,蝉蜕水提取物的低、中、高剂量组及联苯双酯组小鼠肝脏指数及血清ALT、AST活性降低(P0.01或P0.05),肝脏、心肌组织中SOD活性升高,MDA含量降低(P0.01或P0.05),肝组织损伤程度显著改善。蝉蜕水提取物对D-GalN诱导的小鼠急性肝损伤有一定的保护作用。     

橙皮苷对D-氨基半乳糖小鼠急性肝损伤氧化应激的影响

目的:研究橙皮苷对D-氨基半乳糖(D-GalN)小鼠急性肝损伤氧化应激的影响。方法:40只小鼠随机分为正常组、模型组、橙皮苷低、高剂量组,各组分别灌胃给药7d后,通过腹腔注射D-GalN诱导急性肝损伤模型,计算小鼠肝指数,测定血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)以及肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)。结果:模型组与正常组比较小鼠肝指数显著升高,血清ALT、AST及ALP水平显著升高,肝组织匀浆中GSH-Px、SOD活性显著降低,MDA含量显著升高。橙皮苷低、高剂量组与模型组比较,降低了D-GalN致肝损伤小鼠肝指数,降低血清中ALT、AST及ALP水平,提高肝组织匀浆中GSH-Px、SOD活性,降低MDA含量。结论:橙皮苷对D-GalN诱导的小鼠急性肝损伤具有明显保护作用,其机制可能与减轻小鼠肝损伤氧化应激反应有关。     

纳米氧化锌对人正常肝细胞HL-7702的毒性作用研究

[目的]研究食品添加剂纳米氧化锌对人正常肝细胞HL-7702的毒性作用。[方法]采用不同浓度（5、10、25、50、100、250μg/ml）的纳米氧化锌对HL-7702细胞进行染毒;光学显微镜下观察细胞的形态学变化;采用MTT法检测纳米氧化锌对HL-7702细胞生长活性的影响;应用荧光探针活性氧检测技术检测细胞内活性氧（ROS）的生成情况。[结果]纳米氧化锌可引起HL-7702细胞形态变化;MTT检测显示,纳米氧化锌对HL-7702细胞的生长活性具有明显的抑制作用;荧光探针活性氧检测发现,染毒后HL-7702细胞内ROS的生成量增加。[结论]纳米氧化锌作为一种新型锌源,建议控制其添加量或使用量。     

丹栀逍遥散对D-氨基半乳糖所致大鼠急性肝损伤保护作用的研究

目的探讨丹栀逍遥散对D-氨基半乳糖(D-GaIN)所致大鼠急性肝损伤的保护作用机制。方法将60只SD雄性大鼠随机分为空白组,模型组,联苯双酯组,丹栀逍遥散高、中、低剂量组,每组10只。连续灌胃给药7 d后,除空白组腹腔注射等体积生理盐水外,其余大鼠均腹腔注射D-GaIN。24 h后,检测血清中天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、肝匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-PX)、丙二醛(MDA)的含量。结果丹栀逍遥散能明显抑制由D-GaIN所致的血清中ALT、AST以及肝匀浆中MDA含量的升高,并提高肝匀浆中SOD和GSH-PX的含量,其中大部分差异有统计学意义(P<0.05)。结论丹栀逍遥散对D-GaIN所致的大鼠急性肝损伤具有保护作用。     

异硫氰酸丙烯酯对大鼠肝细胞凋亡的影响

为研究异硫氰酸丙烯酯对细胞活性的影响,试验以20mg·L-1的内毒素(LPS)和1.25×10-5mol·L-1的异硫氰酸丙稀酯(AITC)分别或共同处理大鼠肝细胞3h后,用AnnexinV/PI双染色,流式细胞术分析细胞凋亡;反转录酶聚合酶链反应(RT-RCR)分析FasL和Caspase-8的表达情况。结果表明,AITC能有效抑制LPS(20mg·L-1)诱导的肝细胞凋亡,且在此过程中,FasL、Caspase-8的表达量均有减少。结果提示AITC可以通过Fas途径抑制LPS诱导的肝细胞凋亡,其作用有可能导致肿瘤的发生。     

橄榄苦苷对D-半乳糖致衰老小鼠衰老相关生化指标的影响

为了研究橄榄苦苷对D-半乳糖致衰老小鼠的抗衰老作用及其机制,将40只健康小鼠随机分成正常组、衰老模型组、橄榄苦苷组和维生素E组,采用D-半乳糖建立亚急性衰老小鼠模型,测定每组小鼠的脏器指数,比色法检测心、肝和脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、及丙二醛(MDA)含量,PCR-ELISA检测心、肝和脑组织端粒酶活性,ELISA检测小鼠血清中Ig G、Ig M和补体C3、C4含量,放射免疫法测定血清中IL-2含量。结果显示,与模型组比较,橄榄苦苷能增加小鼠脏器指数(P0.05);提高SOD、GSH-Px活性,降低MDA含量(P0.05,P0.01);提高心、肝和脑端粒酶活性、血清中Ig G、Ig M和补体C3、C4及IL-2的含量(P0.05,P0.01),上述衰老相关生化指标基本恢复到正常水平,且与维生素E的治疗结果无显著差异(P0.05)。表明橄榄苦苷能通过拮抗自由基损伤,增强衰老小鼠心、肝和脑组织端粒酶活性和机体免疫功能发挥抗衰老作用。     

松蘑提取液对D-半乳糖致衰老小鼠抗氧化作用的研究

[目的]研究松蘑提取液对D-半乳糖所致衰老小鼠的抗氧化作用。[方法]将50只小鼠随机分成空白对照组、模型组和松蘑提取液低、中、高剂量组,采用D-半乳糖复制衰老模型,试验6周后处死动物,测定血清、脑及肝脏中的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)的含量。[结果]松蘑提取液可明显提高衰老小鼠血清、脑及肝脏中的SOD和GSH-Px的活性,降低MDA的含量,且呈剂量依赖性。[结论]松蘑提取液有一定的抗衰老作用,其机制可能与抗氧化作用有关。     

根霉A03α-半乳糖苷酶的分离及其酶学性质初步研究

根霉（Rhizopus sp.A03）发酵豆渣产α-半乳糖苷酶,粗酶液依次经过三相分离、Sephadex G-100凝胶过滤获得了电泳纯的α-半乳糖苷酶,纯化了2.3倍,总酶活回收率达到25.9%,SDS-PAGE显示其相对分子质量为168.8 kDa。该酶水解对硝基苯-α-D-吡喃半乳糖苷的最适pH值为4.5,最适温度为45℃,表观Km值为0.340±0.026 mmol/L,表观kcat/K_m值为2.866×10⁴ mol-1/（L·s）;水解蜜二糖和棉子糖的表观速率均为10.0μmol/（h·mg）;水解活性受Fe³⁺、Cu²⁺、Mn²⁺和Hg⁺等离子的强烈抑制,但Fe²⁺对酶活性具有显著的激活作用。该酶活性在pH4.0～8.9保持稳定,在45℃时保温60min,残余酶活达到了77.4%。     

黄芩苷通过上调miR-126诱导乳腺癌细胞凋亡的机制研究

目的 用黄芩苷干预人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,观察黄芩苷对乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响及作用机制。方法 用qRT-PCR检测miR-126的表达变化,Western-blot检测Bcl-2、Caspase-9、Caspase-3、p-p38和p53的表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。结果 miR-126在乳腺癌MDA-MB-231细胞中的表达比正常乳腺细胞低,黄芩苷干预乳腺癌细胞后miR-126上调最为明显（P<0.05）。用miR-126 mimics、miR-126 inhibitors转染乳腺癌细胞,Western-blot显示黄芩苷及miR-126 mimics作用于人乳腺癌细胞后Bcl-2表达水平下降,Caspase-9和Caspase-3的裂解产物、p-p38、p53表达增加,差异有统计学意义（P<0.05）。MTT法显示黄芩苷和miR-126 均可抑制乳腺癌细胞的增殖,流式细胞术显示黄芩苷与miR-126 mimics促进癌细胞凋亡。结论 黄芩苷可以抑制乳腺癌细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与通过上调miR-126调节凋亡相关基因有关。     

氧化苦参碱对去甲肾上腺素条件下兔心室肌细胞膜电位改变的影响

目的探讨氧化苦参碱对去甲肾上腺素(NE)条件下兔心室肌细胞膜电位改变的影响。方法应用常规细胞内玻璃微电极记录法,观察正常灌流液组、NE(90μmol·L-1)组及氧化苦参碱(Oxy 40mg·kg-1、80mg·kg-1、160mg·kg-1)+NE(90μmol·L-1)组兔心室肌细胞静息电位(resting membrane potential,RP)、动作电位幅值(action potential amplitude,APA)、0相最大除极速率(maximal rate of depolarization,Vmax)、复极10%及50%、90%时间(10%and 50%、90%of duration of action potential,APD10and APD50、APD90)的变化。结果与正常对照组相比,NE灌流心室肌细胞15 min后Vmax明显增加(P0.01),APD10、APD50、APD90均明显延长(P0.01)。NE灌流15min待各项指标明显改变后,加入不同浓度氧化苦参碱,与NE组相比40mg·kg-1氧化苦参碱组膜电位各项指标无明显变化;80mg·kg-1氧化苦参碱组APD10、APD50、APD90延缓(P0.05),Vmax减慢(P0.05);160mg·kg-1氧化苦参碱组APD10、APD50、APD90明显延缓(P0.01),Vmax明显减慢(P0.01)。结论 NE可明显影响兔心室肌细胞电活动,氧化苦参碱能减弱NE的影响,缩短动作电位时程,阻断NE诱发的心室肌细胞异常电生理所致的心律失常效应。     

狼牙刺中氧化苦参碱积累规律研究

[目的]研究狼牙刺中氧化苦参碱积累规律。[方法]采用高效液相色谱法（HPLC）,对同一植株狼牙刺各器官中氧化苦参碱积累规律进行研究。[结果]结果表明,每年5月初幼果形成是氧化苦参碱从叶向果实转运的转折点,幼果形成后,叶中氧化苦参碱水平从1.1%持续降至8月的0.5%,而幼果中氧化苦参碱水平从最初的0.77%持续增加到成熟果实的3.6%。[结论]狼牙刺叶器官是氧化苦参碱合成的主要器官,成熟果实是氧化苦参碱积累的主要器官。     

肝靶向氧化苦参碱毫微粒的制备工艺优化

［目的］优选氧化苦参碱聚氰基丙烯酸正丁酯毫微粒（OM-PBCA-NP）的制备工艺。[方法］以可生物降解的氰基丙烯酸正丁酯为聚合材料,采用乳化聚合、一步法载药制备OM-PBCA-NP;以包封率和载药量为评价指标,通过单因素试验初选、正交设计法精选,优化制备工艺;以RP-HPLC法测定氧化苦参碱含量。［结果］按优化工艺条件,制得载药毫微粒：平均粒径118.3 nm,分布范围90～130 nm,载药量16.9%,包封率72.7%,RSD 1.23%（n=5）。［结论］优化筛选后的处方工艺稳定可行,可为开发OM-PBCA-NP新剂型提供参考。     

HPLC法测定苦参不同器官氧化苦参碱含量

采用HPLC法测定苦参不同器官中氧化苦参碱的含量,结果表明,根中氧化苦以碱含量较高;茎、叶、花中含量较低。     

对乙酰氨基酚对大鼠原代肝细胞的损伤机制

胶原酶两步灌流法获取SD大鼠的原代肝细胞,并用不同剂量的对乙酰氨基酚处理.MTT法测定肝细胞的存活率,分光光度法测定培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量.Western blotting法测定大鼠肝细胞中细胞色素P450酶2E1(CYP2E1)的表达水平.结果表明,对乙酰氨基酚可导致肝细胞存活率降低,LDH含量显著升高,CYP2E1表达增加.说明达到一定的剂量时.对乙酰氨基酚可引起肝细胞的损伤.     

氧化应激在镉致大鼠肝细胞凋亡中的作用

 【目的】探讨氧化应激在镉诱导大鼠肝细胞凋亡中的作用。【方法】采用两步灌流法获得大鼠肝细胞,经过24 h培养,用醋酸镉处理细胞,或者Z-VAD-fmk、NAC和镉共同处理细胞。应用MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞内ROS水平和线粒体膜电位,分光光度法检测caspase-3活性、GSH和MDA含量。【结果】结果表明,肝细胞暴露于浓度为2.5、5、10 μmol•L-1的镉后,细胞相对存活率显著下降（P＜0.01）,凋亡率显著或极显著升高（P＜0.05或P＜0.01）,呈剂量-效应关系;2.5和5 μmol•L-1镉组在1.5 h之前导致细胞内ROS水平显著或极显著升高（P＜0.05或P＜0.01）;镉暴露可使肝细胞Δψm显著或极显著降低（P＜0.05或P＜0.01）;NAC能够显著减少镉引起的凋亡细胞数量和极显著降低凋亡率（P＜0.01）,可以显著降低单独镉暴露组ROS水平升高和阻止ΔΨm降低（P＜0.05）;细胞内GSH含量12 h时随镉剂量增高而降低,部分剂量组极显著低于对照组（P＜0.01）,24 h时随剂量增高而升高,部分剂量组显著或极显著高于对照组（P＜0.05或P＜0.01）;细胞内MDA含量随着镉浓度的增大而升高,10 μmol•L-1剂量组MDA的含量显著高于对照组（P＜0.05）;未见caspase-3活性升高,caspase抑制剂Z-VAD-fmk对镉致细胞凋亡无影响。【结论】醋酸镉致肝细胞凋亡与其引起ROS产生并导致氧化损伤的非caspase途径有关。     

吡啶甲酸铬对猪肝细胞生长的影响

对7日龄仔猪的肝脏细胞进行体外培养,研究不同浓度吡啶甲酸铬对猪肝细胞生长的影响。结果表明,随着吡啶甲酸铬添加浓度的逐渐升高,肝细胞密度先增多后减少,8μmol/L吡啶甲酸时细胞密度最多,400μmol/L吡啶甲酸铬细胞密度最少。