定性测定羊奶中黄曲霉毒素M1残留的高灵敏度检测卡的研制

为研制定性测定羊奶中黄曲霉毒素M1残留的高灵敏度检测卡,在硝酸纤维素膜上预包被黄曲霉毒素M1全抗原作为检测线,在硝酸纤维素膜上预包被羊抗鼠二抗作为质控线.将抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体用胶体金标记作为金标垫.将样品垫、金标垫、预包被黄曲霉毒素M1的硝酸纤维素膜以及吸水垫依次粘贴在PVC板上,切割成4 mm宽的试纸条,将试纸条装入塑料卡壳中扣紧组装成检测卡.样本中残留的黄曲霉毒素M1与硝酸纤维素膜上的检测线共同竞争胶体金标记的黄曲霉毒素M1抗体,检测线的颜色深浅与其残留物黄曲霉毒素M1呈负相关,从而判定样品中黄曲霉毒素M1的含量.结果表明,检测卡的检测限为0.5μg/L,黄曲霉毒素M1检测卡对黄曲霉毒素M1的交叉反应率为100％,而与同族的其他物质的交叉反应率小于5％,与不同族的其他物质的交叉反应率小于1％.假阳性率小于5％,假阴性率为0％,密封好的检测卡常温下储存,保质期18个月.本研究为快速准确地测定羊奶中黄曲霉毒素M1残留提供了物质基础.     

莱克多巴胺胶体金免疫层析法快速检测试纸条的研制

为研制一种快速、简便的基于胶体金免疫层析法的试纸条,快速检测猪尿中莱克多巴胺（ractopamine,RAC药物残留）,采用柠檬酸钠还原法制备胶体金颗粒,标记莱克多巴胺单克隆抗体并喷于玻璃纤维上制备胶金垫,RAC-BSA偶联抗原和羊抗鼠IgG分别结合于硝酸纤维膜上,依次将样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组装并切割成莱克多巴胺胶体金免疫层析快速检测试纸条。试验结果表明该快速检测试纸条的检测限为5 ng/mL,可在8~10 min内完成测试,肉眼即可判断,无需其他检测设备。该试纸条灵敏度、特异性、稳定性和重复性均达到临床使用要求,适用于现场快速检测和筛选工作。     

沙门氏菌胶体金免疫层析试纸条的研制与应用

本试验目的为提供一种食品中国家强制检验的沙门氏菌胶体金免疫层析试纸条,并对购自超市和农贸市场的肉蛋进行检测。该试纸条由吸收垫、样品垫、偶联垫和硝酸纤维素膜等组成,包被对照线和检测线,以及喷涂于偶联垫上的金标沙门氏菌多抗组装建立。结果表明该试纸条对沙门氏菌的最低检测量为1.07×107 cfu/mL,检测时间仅需5~10min。该试纸条特异性强,重复性好,可在4℃或室温存放9个月,检测结果稳定。     

定性测定羊饲料中黄曲霉毒素总量残留的高灵敏度检测卡的研制

试验研制定性测定羊饲料中黄曲霉毒素总量残留的高灵敏度检测卡。在硝酸纤维素膜上预包被黄曲霉毒素总量全抗原作为检测线,预包被羊抗鼠二抗作为质控线。将抗黄曲霉毒素总量单克隆抗体用胶体金标记作为金标垫。将样品垫、金标垫、预包被的硝酸纤维素膜以及吸水垫依次粘贴在PVC板上,切割成4 mm宽的试纸条,将试纸条装入塑料卡壳中扣紧组装成检测卡。样本中残留的黄曲霉毒素总量与硝酸纤维素膜上的检测线共同竞争胶体金标记的黄曲霉毒素总量抗体,检测线的颜色深浅与其残留物黄曲霉毒素总量呈负相关,从而判定样品中黄曲霉毒素总量的含量。结果表明:检测卡的检测限为10~30μg/kg,黄曲霉毒素总量检测卡对黄曲霉毒素B1的交叉反应率为100%,而与同族的其他物质的交叉反应率大于30%,与不同族的其他物质的交叉反应率小于1%。假阳性率小于5%,假阴性率为0%,密封好的检测卡常温下储存,保质期18个月。因此,本研究的定性测定羊饲料中黄曲霉毒素总量残留的高灵敏度检测卡,可快速准确地应用于羊饲料中黄曲霉毒素总量残留的定性检测,为快速准确地测定羊饲料中黄曲霉毒素总量残留提供了依据。     

犬细小病毒胶体金检测试纸条的制备与初步评价

为快速检测及诊断犬细小病毒及其引起的传染性疾病,应用胶体金免疫层析技术．采用柠檬酸三钠还原法制备25nm的胶体金颗粒,标记抗犬细小病毒单克隆抗体CPV—F1株后包被于玻璃纤维膜作为金标垫,在硝酸纤维素膜上分别包被羊抗小鼠IgG二抗和抗犬细小病毒单克隆抗体CPV—B6株作为质控线和检测线,将吸水垫、硝酸纤维素膜、金标垫和样品垫分别粘贴于背衬板上制成犬细小病毒抗原胶体金检测试纸条。特异性试验及与血凝试验的对比结果表明,该试纸条具有良好的特异性和敏感性,与进口产品的总符合率为98％。本研究为进一步研发犬细小病毒检测试纸奠定了基础。     

猪尿中莱克多巴胺残留量快速检测方法的建立

为了现场灵敏、特异、快速地检测猪尿中莱克多巴胺(RAC)的残留情况,试验用胶体金标记RAC单克隆抗体构建一种能够快速检测猪尿中RAC的免疫层析试纸条,通过正交试验优化试纸条中标记抗体的量、胶体金结合垫上胶体金单克隆抗体(CG-mAb)溶液的体积和牛血清白蛋白封闭的莱克多巴胺(RAC-BSA)的浓度得到最优组合,并测定试纸条的特异性、稳定性、检测时间和检测限。结果表明:经过优化后得到的最优组合为标记抗体的量1.5μg/mL,胶体金结合垫上CG-mAb溶液的体积1.5μL,RAC-BSA的浓度0.2 mg/mL;该试纸条可在3 min内特异性地检测RAC,检测限为3 ng/mL,在室温条件下能保存12个月。说明试验构建的快速检测猪尿中RAC试纸条能达到现场使用的要求,适用于快速筛查猪尿中RAC的残留。     

肉鸡组织中氟喹诺酮类抗生素快速检测的胶体金技术研究

为了建立一种简单、快速、灵敏、特异的肉鸡组织中氟喹诺酮类抗生素残留检测方法,试验采用胶体金标记单克隆抗体与竞争抑制方法,组装了检测氟喹诺酮类抗生素残留的胶体金免疫层析试纸条。结果表明:将具有氟喹诺酮类药物母核结构共性特征的环丙沙星(CPFX)与牛血清白蛋白(BSA)偶联,获得了人工抗原CPFX-BSA,免疫6周龄Balb/c雌性小鼠,筛选得到了3株抗氟喹诺酮类抗生素广谱特异性单克隆抗体,分别命名为2D5、3E9、4H8。以4H8单克隆抗体对10种氟喹诺酮类抗生素的广谱性最好、敏感性最强,将4H8单克隆抗体纯化后标记胶体金颗粒作为金标垫,分别以CPFX-BSA偶联蛋白和兔抗鼠IgG作为检测限和质控限,组装了检测氟喹诺酮类抗生素残留的胶体金免疫层析试纸条,该试纸条肉眼于10 min内即可判定结果。检测10种氟喹诺酮类抗生素均为阳性,而检测4种常见药物均为阴性。对CPFX、培氟沙星、达氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、恩诺沙星、洛美沙星的检测限为3.2 ng/mL,对沙拉沙星、双氟沙星、麻保沙星的检测限为6.4 ng/mL。在37℃条件下可稳定保存60 d,在4℃条件下可稳定保存360 d。检测2015—2016年河北省及周边地区的鸡肉样品3 414份,阳性率为0.76%,其中屠宰场、超市、活禽市场的阳性率分别为0.38%、0.10%、2.31%。说明胶体金检测氟喹诺酮类抗生素残留具有良好的广谱性、特异性、灵敏度、稳定性,且操作简单、检测快速,适合现场检测。     

禽流感抗原快速检测试纸条的研究

应用胶体金标记技术(Immunogold Labelling Technique)与免疫层析技术,在玻璃纤维膜和硝酸纤维膜的检测线(T)和对照线(C)上分别喷上胶体金AIV单克隆抗体(Ab2)偶联物和AIV单克隆抗体(Ab2)-羊抗鼠IgG多克隆抗体,制成禽流感抗原检测试纸条。用该试纸检测“AIV琼扩抗原”、“AIV H5N1抗原”、“AIV H7N1抗原”、“AIV H9N1抗原”均显阳性,而对禽源性的其它病毒抗原均显阴性;本试纸与韩国产“禽流感检测试纸条”同时检测相同的样品,结果完全一致,且具有很好的线性(敏感度),是一种微量、特异、快速、简便和结果容易判定的新的检测方法,可作为检测机构和养禽场检测初筛禽流感时使用。     

口蹄疫病毒感染与免疫鉴别诊断及免疫评价二联试纸的优化

【目的】建立口蹄疫病毒(FMDV)感染与免疫鉴别诊断及免疫评价二联试纸稳定的生产工艺,促进其产业化生产及临床应用。【方法】本研究以胶体金免疫探针结合猪IgG,FMDV结构蛋白(SP)及非结构蛋白(NSP)的表位多肽偶联载体蛋白制备人工抗原,设置两条检测线精准拦截抗体的检测模式,以试纸条特异性及敏感性为评价指标,对胶体金免疫探针用蛋白、试纸拦截用多肽抗原、检测线位置及喷膜缓冲液、金标蛋白保存液、样品垫缓冲液以及样品稀释液等参数进行优化。采用优化后的试纸检测266份田间猪血清样品,并与口蹄疫O型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒(LPB ELISA)和3ABC阻断ELISA抗体检测试剂盒(3ABC ELISA)检测结果进行对比,计算该试纸与商品ELISA试剂盒的符合率。【结果】经优化后,口蹄疫感染与免疫鉴别诊断及免疫评价二联试纸生产工艺参数如下：以胶体金标记金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)为免疫探针;选择混合多肽的形式设置拦截线,以非结构蛋白多肽(BSA-NSPs)喷涂T1线,结构蛋白多肽(BSA-SPs)喷涂T2线,以0.1 mol/L Tris-HCl为喷膜缓冲液;以ddH₂     

胶体金方法检测H3和H7亚型禽流感病毒

用微波法制备金溶胶,对禽流感病毒(AIV)H3和H7亚型单克隆抗体(H3-1D6和H7-1F7)用亲和层析法进行纯化,优化单抗与金溶胶的最佳结合条件后,喷涂于玻璃纤维上制成金标垫.将纯化的马抗H3和H7亚型AIV多克隆抗体和山羊抗鼠二抗分别包被于硝酸纤维素(NC)膜上作为检测线和质控线,制备胶体金检测试纸条.用制备的试纸条对H3和H7亚型AIV标准抗原、毕赤酵母真核表达蛋白和已知样品进行检测,结果与血凝试验、血凝抑制试验、AC-ELISA和RT-PCR方法相符.同时用该方法对H5和H9亚型AIV标准抗原、病料以及传染性支气管炎、新城疫等抗原进行检测,结果均为阴性.该方法操作简单,肉眼于10 min内可判定结果,且达到了血凝试验和血凝抑制试验的敏感性.     

商会自治的基石——商会自治规范研究

在现代法律秩序中,商会自治规范是制定法的基础和必要的补充,甚至在某些方面替代了制定法;商会自治规范主要包括商会组织规范、行为规范、惩罚规范以及争端解决规范等;其效力仅及于其内部成员;商会自治规范和制定法之间存在冲突,但也存在整合的基础。     

癸氧喹酯干混悬剂含量测定的改进

采用高效液相色谱法测定癸氧喹酯干混悬剂的含量,在2-250μg/mL范围内,峰面积的常用对数与进样量浓度的常用对数呈良好的线性关系,R^2=1(n=5),平均回收率为99.24%~99.51%,RSD在0.05%~0.28%。此方法分析时间短,样品前处理简便、定量结果准确,重现性好,结果满意,为其质量控制提供了依据。     

猪毛色遗传的研究进展

本文概述了猪的毛色类型、猪的毛色遗传模式,着重综述了猪毛色基因分子基础的研究进展,指出存在问题并就未来发展方向做了思考。     

Comparison of 2 methods of centesis of the bursa of the biceps brachii tendon of horses

REASONS FOR PERFORMING STUDY: Centesis of the bicipital bursa using an 8.9 cm long spinal needle has been reported but the alternative of employing a 3.8 cm long hypodermic needle requires validation. OBJECTIVE: To compare the efficacy of 2 different methods of centesis of the bicipital bursa and to evaluate the usefulness of ultrasonographic imaging to determine the location of solution administered when centesis of the bursa is attempted. METHODS: For Trial 1, 6 clinicians, who had no previous experience of centesis of the bicipital bursa, attempted to inject a solution composed of an aqueous radiopaque contrast medium and physiological saline solution (PSS) into the bicipital bursae of 2/12 horses using the previously described distal approach to inject one bursa and a proximal approach to inject the contralateral bursa. The bicipital tendon and bursa were examined ultrasonographically before and after injection; and both shoulders were examined radiographically to identify the location of the medium. In Trial 2, another 6 clinicians, also with no previous experience of centesis, repeated Trial 1, using 6 horses, but the radiopaque contrast medium was mixed with air instead of PSS. RESULTS: Accuracy of centesis using the proximal approach was 39% and that of the distal approach 28%. Ultrasonographic examination of the shoulder allowed the location of solution and air to be accurately predicted in all 12 shoulders examined. CONCLUSIONS: Clinicians who have had no previous experience performing centesis of the bicipital bursa are unlikely to be successful in centesis using either approach. Radiographic examination after injecting a radiopaque contrast medium may be necessary to assess the success of centesis especially if bursal fluid is not obtained during centesis. Injecting air along with the radiopaque contrast medium provides more accurate ultrasonographic confirmation of centesis and better radiographic definition than does injection without air.     

不同样本商品蜂蜜中硒含量的测定

用硝酸和高氯酸消化蜂蜜,使硒游离出来,在微酸性环境下,硒和2,3-二氨基萘(DAN)生成有较强荧光的物质,用环己烷萃取,在激发波长378nm,荧光波长518nm处测定其荧光强度。蜂蜜中硒含量范围:0.10～0.82μg/g。表明:蜂蜜应视为天然富硒营养品。     

乳酸杆菌益生作用机制的研究进展

乳酸杆菌作为益生菌广泛用于人和动物。本文综述了乳酸杆菌改善宿主健康的机制。乳酸杆菌可通过产生抗菌物质如乳酸、过氧化氢、细菌素,或者通过竞争营养或肠道黏附位点来抑制致病菌;通过诱导黏附素的分泌或阻止细胞凋亡而增强肠道的屏障功能,从而保护肠道。文章重点讨论了乳酸杆菌表面成分（表面蛋白、脂磷壁酸和肽聚糖）与肠道受体（Ｃ型凝集素受体、Ｔｏｌｌ样受体和 Ｎｏｄ样受体）,阐述了他们结合后启动免疫调节信号,调控肠道免疫功能以发挥改善健康作用的机制。     

中华人民共和国农业部公告 第267号

为贯彻落实《兽药生产质量管理规范》(简称《兽药GMP》),进一步推动兽药GMP实施进程,我部制定了《兽药生产质量管理规范检查验收办法》,现予公告。本公告自2003年6月1日起施行。附件:兽药生产质量管理规范检查验收办法二○○三年四月十日第一章 总则 第一条 为推动《兽药生产质量管理规范》(以下简称兽药GMP)的实施,规范兽药GMP检查验收工作,制定本办法。 第二条 农业部负责全国兽药GMP管理和检查验收工作;负责制修订兽药GMP检查验收管理规定;负责兽药GMP检查员队伍建设和监督管理工作,负责国际兽药贸易中GMP互认工作。 …     

鸡败血支原体垂直传播模式及其阻断方法

以国际标准强毒Ｒ株人工感染非免疫产蛋鸡,定时扑杀,分别从鼻窦、眶下孔、气管、肺、气囊、卵巢和输卵管分离ＭＧ,并收集感染鸡所产蛋分离ＭＧ。结果表明,人工感染４８小时后上、下呼吸道及肺已被全面感染,９６小时气囊已被感染,１２０小时输卵管已能分离到ＭＧ,卵巢始终分离不到ＭＧ。人工感染鸡自１４４小时便能在其所产蛋中分离出ＭＧ。药物治疗能在７２小时内消除感染,油乳剂苗则需２４天后逐渐降低蛋内ＭＧ分离率,药物卵内注射、种蛋药浴、高温处理均能杀死卵内ＭＧ,但以研制的种蛋浸泡剂药浴效果为最好。     

Effects of size of ingestively masticated fragments of plant tissues on kinetics of digestion of NDF

Ingestively masticated fragments were collected and sized via sieving. Different sizes of esophageal masticate and ruminal digesta fragments, and ground fragments of larger masticated pieces were incubated in vitro, and undigested NDF remaining at intervals of up to 168 h of incubation was determined. The ruminal age-dependent time delay (tau) for onset of digestion of NDF was positively correlated (P < 0.004) with the mean sieve aperture estimated to retain 50% of the fragments between successive sieve apertures (MRA). Degradation rate of potentially degradable NDF (PDF) and level of indigestible NDF were not related (P > 0.10) to MRA of masticated and ground fragments. Estimates of tau were positively related to MRA, with slopes of bermudagrass < corn silage < ruminal fragments of corn silage. It was concluded that fragment size-, and consequently, ruminal age-dependent onset of PDF degradation of a mixture of different fragment sizes results in an age-dependent rate of degradation of the more rapidly degrading of two subentities of PDF. Models are proposed that assume a tau before onset of simultaneous degradation of PDF from two pools characterized as having gamma-modeled age-dependency and age-constant rates. The ruminal age-dependent pool seems to be associated with the faster-degrading pool, and its rate parameter increases with range in MRA in the population of fragments. Conceptually, the ruminal age-dependent rate parameter for PDF degradation seems to represent a composite of several effects: 1) effects of the size-dependent tau; 2) range in MRA of the population of ingestively masticated fragments; and 3) subentities of PDF that degrade via more rapid age-dependent rates compared with subentities of PDF that degrade via age-constant rates. The estimated fractional rates of ruminative comminution of ingestively masticated fragments (0.060 to 0.075/h) were of a magnitude similar to the mean fractional rates of PDF digestion (0.030 to 0.085/h), which implies that ruminative comminution may be first-limiting to fractional rate of PDF digestion. The in vivo roles of ingestive and ruminative mastication of fragments on PDF degradation must be considered in any kinetic system for estimating PDF digestion in the rumen. These results and others in the literature suggest that the rate of surface area exposure rather than intrinsic chemical attributes of PDF may be first-limiting to degradation rate of PDF in vivo.