辣椒RAPD反应体系建立及杂交种纯度鉴定研究

以豫椒系列品种父母本和杂交种为材料，采用液氮-SDS法提取辣椒基因组DNA，使用Bio-RAD-Mycy-cler型PCR仪和Bio-RAD1000凝胶扫描仪，研究PCR反应的主要影响因子，建立适合辣椒RAPD分析的PCR反应体系，从40个10bp的随机引物中筛选出1个能鉴定豫椒968杂种纯度的引物S149。     

辣椒品种镇研20号种子纯度的SRAP鉴定

利用相关序列扩增多态性(SRAP)分子标记技术,对辣椒品种镇研20号杂交种子纯度进行鉴定试验。结果表明:从30对随机引物中筛选出的引物E2M5在亲本和杂交种中表现出明显的多态性;并对镇研20号杂交种进行纯度鉴定,其结果为95.5%,与田间鉴定结果基本一致。     

马铃薯‘H-027'与‘陇薯6号'和‘陇薯7号'杂种优良单株的SSR分析

为了明确马铃薯杂种F_1单株的真实性,利用SSR分子标记技术对‘H-027'ב陇薯6号'和‘H-027'ב陇薯7号'这2个马铃薯杂交组合F_1的优良单株进行鉴定。试验从87对SSR引物中筛选出3对适宜引物S7,S1 70和S174;用引物S7和S170从马铃薯‘H-027'ב陇薯6号'的杂种F_1的30个优良单株鉴定出25个真实杂交种单株;用引物S170和S174鉴定出‘H-027'ב陇薯7号'杂种F_1的14个优良单株均为真实杂交种。     

'镇研958六号'辣椒杂交种纯度的SRAP鉴定

以辣椒品种‘镇研958六号’及其父母本为材料,采用相关序列扩增多态性(SRAP)分子标记方法,建立基于DNA分子标记的‘镇研958六号’辣椒品种纯度鉴定方法,以期为提高大田制种纯度提供分子辅助工具。结果发现,从30 对SRAP标准引物中筛选出引物E3M1能区分‘镇研958六号’及其亲本;应用此引物对‘镇研958六号’杂交种进行纯度鉴定,其纯度结果为98%,与田间鉴定结果基本一致。结果表明,引物E3M1可以作为鉴定‘镇研958六号’纯度的分子标记,SRAP分子标记用于辣椒杂交种子纯度鉴定是可行的。     

辣椒RAPD系统的建立及在杂种纯度鉴定中的应用

 对辣椒RAPD反应的各个环节, 包括DNA 提取、PCR反应和电泳检测进行了筛选和优化, 确定了一个简单、高效、相对稳定的RAPD 系统, 并筛选出12个较稳定的RAPD标记。可以用于‘中椒’系列辣椒的9个杂交种的纯度鉴定。     

粤椒1号辣椒种子纯度的RAPD检测研究

在分子标记鉴定蔬菜作物种子纯度的理论体系和技术体系指导下，对粤椒1号辣椒种子纯度进行了RAPD检测研究。结果表明，通过对200余个随机引物的筛选，发现特异引物P1、P2可应用于粤椒1号辣椒种子纯度的检测；对1份种子样品进行了RAPD检测，其结果与田问种子纯度检测结果完全一致。     

'吉椒15号'和'吉椒16号'辣椒种子纯度SSR分子标记鉴定体系的初步建立

以‘吉椒15号’和‘吉椒16号’辣椒及其亲本为研究材料,筛选快速鉴定其种子纯度的SSR分子标记。结果发现,72对候选SSR引物中,有6对在杂交种及亲本之间具有多态性且重复性好的共显性标记,其中SSR11、SSR16、SSR34、SSR48及SSR52分别在‘吉椒15号’及其亲本间具有多态性,SSR11、SSR14、SSR16及SSR52分别在‘吉椒16号’及其亲本间具有多态性,上述6对SSR引物可以作为鉴定种子纯度的分子标记。研究结果表明,采用单个SSR标记或2～3个组合标记可以快速鉴定出‘吉椒15号’和‘吉椒16号’辣椒种子中混杂的母本或异形株,SSR分子标记鉴定体系的初步建立可以为辣椒种子纯度的鉴定工作提供便利。     

利用SSR标记鉴定3个辣椒杂交种品种的纯度

辣椒(Capsicum annuum L.)杂交种子纯度快速检测技术对于保证辣椒杂交品种种子生产具有重要的意义。红龙13号、红龙18号、红龙25号辣椒杂交种是新疆隆平红安生物科技有限责任公司选育并大面积栽培的主栽品种。为鉴定上述3个品种的纯度,本实验在特异性引物筛选的基础上,利用SSR标记技术对3个辣椒品种进行了种子纯度鉴定。结果表明,每个品种都有1对以上SSR引物可将其父本和母本分开,3个辣椒杂交种品种的纯度分别为95.35%、89.36%和95.25%。SSR分子标记方法可以准确鉴定辣椒杂交种纯度,且大大缩短纯度鉴定周期。     

甜瓜分子标记纯度鉴定研究

以2个甜瓜品种西域雪1号、西域雪2号及其亲本为试材,建立并优化了单粒种子DNA快速提取法和适合甜瓜的RAPD、SSR分子标记杂交种纯度鉴定体系。从100条随机引物中筛选出G17用于西域雪2号纯度鉴定,可有效区分母本和杂交种。从19对SSR引物中筛选出9对稳定扩增、多态性丰富的引物构建西域雪1号、西域雪2号的SSR指纹图谱。SSR分子标记用较少引物即可扩增出品种特异性条带,且多数F1代带型呈双亲互补,非常适合种子纯度鉴定。同时,使用高浓度、非变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染,条带更清晰,可区分只相差1个碱基的扩增片段,同RAPD相比,SSR分子标记更适合甜瓜杂交种纯度快速鉴定。     

基于SRAP的三倍体无子西瓜品种指纹分析和杂种纯度鉴定

为了解三倍体无子西瓜品种SRAP(Sequence-Related Amplified Polymorphism)扩增特点及其在三倍体西瓜杂种纯度鉴定中的适应性,利用SRAP引物组合对当前生产上推广的9个三倍体无子西瓜品种进行了指纹分析和杂种纯度鉴定研究。结果表明,1)30对引物组合中筛选出多态性引物组合24对,共产生109条多态性带,平均每对引物组合产生多态性带4.5条,单个组合的多态性比率在12.5%～80%。2)结合多对SRAP引物组合,可以鉴别不同品种。3)在黑蜜5号及其父母本的指纹分析中,发现有1对引物组合(ME4/EM3)在黑蜜5号杂交种上扩增出了特异的条带,可以区分母本和杂交种,试验证明该引物组合能够用于黑蜜5号的杂种纯度鉴定。     

花椰菜新品种浙801杂交种纯度的SSR鉴定

浙801是由浙江省农业科学院蔬菜研究所选育的杂交一代中熟花椰菜新品种.以浙801杂交种及其父本和母本为材料,筛选得到1对SSR引物,该引物可将浙801杂交种与其父母本区分开来.利用这对引物对浙801商品种进行了鉴定,其结果与田间鉴定结果一致.研究结果表明,所筛选到的SSR标记可以作为浙801的特异分子标记用于其商品种纯...     

利用叶片后绿标记性状鉴定西瓜杂交种子纯度技术研究

叶片后绿是目前发现的苗期鉴定西瓜杂交种子纯度最理想的标记性状,为了加大利用力度,以郑果5506和其母本后绿单系96B90种子为试材,进行了一系列的鉴定技术研究。结果表明,采用营养钵播种苗期鉴定法最好,鉴定期10～12d,具有准确、直观、简便、快速、低耗等优点。     

利用RAPD方法鉴定两个春甘蓝品种的纯度

利 用 Ｒ Ａ Ｐ Ｄ （ 随机 扩增多 态性 Ｄ Ｎ Ａ） 方 法, 通过 对１００ 个 随机 引物 的 筛选 获得 能 区分中甘１１ 号及其 亲本和８３９８ 及其 亲本的引 物 Ｏ Ｐ Ｒ１５ ,并 得到 单株 验证。 结果 表明 ,利 用 Ｒ Ａ Ｐ Ｄ 方法对中甘１１ 号和８３９８ 这 两个早熟 春甘蓝一 代杂种 进行快速 、准确的 纯度鉴定 是可行 的。     

西瓜杂交种纯度SSR分子鉴定技术研究

以西瓜杂交一代品种黑宝、红与黑、黑优美及其亲本为试验材料,利用SSR标记对西瓜杂交种纯度进行了快速鉴定筛选试验。从93对SSR引物中最终筛选到4对特异性引物可快速准确地区分父本、母本及F1代,且鉴定结果与大田鉴定结果一致;同时对西瓜大群体快速基因组DNA提取、PCR扩增等进行了优化,初步建立了西瓜杂交种纯度SSR分子鉴定技术体系。     

利用SSR分子标记鉴定“中丝2号”丝瓜杂交种纯度

为了建立一套丝瓜种子纯度的快速鉴定方法，采用SSR分子标记对丝瓜杂交一代品种“中丝2号”的纯度进行鉴定，利用24对SSR引物对“中丝2号”丝瓜及其亲本的DNA进行扩增。结果表明：从24对引物中筛选出1对特异性引物ZS-SSR24，能够分别在“中丝2号”母本和父本中扩增出特异的2条多态性条带，大小分别为220 bp和250 bp,F1继承双亲的特异性条带，利用此标记能够鉴定出混在F1中的父本或母本。经田间鉴定，供试丝瓜种子纯度为91.3%，这与分子标记的结果完全吻合，故该标记能够用于“中丝2号”丝瓜品种的纯度鉴定。     

基于SNP标记的黄瓜杂交种纯度鉴定方法

根据国际葫芦科基因组数据库CuGenDB中序列信息,应用高分辨率熔解曲线技术筛选出用于黄瓜杂交种纯度鉴定的SNP位点CLA6（A/G）,该位点在33个市售黄瓜品种中的多态信息量为0.401,处于中度多态|结合焦磷酸测序技术,建立基于CLA6位点的SNP-Pyrosequencing黄瓜杂交种纯度鉴定方法。利用该鉴定方法检测黄瓜杂交种优一90粒种子,结果其种子纯度为96.7%,该结果与CLA0位点及SSR鉴定结果相符,表明该鉴定技术适于黄瓜杂交种纯度鉴定,具有用于DUS测试分析的潜力。     

黑皮冬瓜黑老粗F1种子纯度的RAPD鉴定

用CTAB法从冬瓜种子发芽幼根提取DNA,经电泳检测其条带清晰明亮,可满足RAPD分析要求。对黑皮冬瓜黑老粗F1及其亲本DNA用140个RAPD引物分别进行RAPD扩增,筛选获得1个在父母本间可产生稳定且为双亲互补型片段的引物SPS-C15。利用该引物对一批商品种进行纯度鉴定,纯度为90.7 %,实际田间形态鉴定的纯度为89.8 %,RAPD检测结果与田间鉴定结果基本吻合,表明RAPD技术可用于黑老粗F1的种子纯度快速检测。     

Assessment of genetic purity of tomato (Lycopersicon esculentum L.) hybrid using molecular markers

Three DNA molecular marker systems, RAPD, ISSR and SSR, were used to test seed genetic purity of two commercial hybrid tomato (Lycopersicon esculentum L.) cultivars ‘Hezuo 903’ and ‘Sufen No. 8’. Genomic DNA from the two F₁ hybrid cultivars and their corresponding parental lines was screened with 218 RAPD decamer primers, 54 ISSR primers and 49 SSR primers. Among the 321 primers, 4 primers for ‘Hezuo 903’ and 3 for ‘Sufen No. 8’, which could produce both female and male parent-specific markers, were selected for testing the genetic purity. A total of 210 hybrid individuals of each cultivar were analyzed using the identified primers. The combined results of the marker analysis showed that eight of the 210 F₁ plants in ‘Hezuo 903’ and 13 of 210 in ‘Sufen No. 8’ were false hybrids, and the overall genetic purity of the two F₁ hybrid seed lots was 96.2 and 93.8%, respectively. This study showed that RAPD and SSR markers could provide a practical and efficient tool in quality control of the tomato commercial hybrid seeds.