三种苏云金芽孢杆菌晶体蛋白火箭免疫电泳的研究

本文以火箭免疫电泳技术检测HD—1、81—6、187三种苏云金芽孢杆菌的晶体蛋白,结果表明:这种方法可以快速、特异性地检测晶体蛋白的含量。在抗血清浓度为3％的凝胶上抗原抗体所形成的免疫沉淀线峰高与晶体蛋白的浓度呈明显的线性关系。本文还就火箭免疫电泳沉淀线峰高与一些条件的关系进行了讨论。     

对小地老虎具有杀虫毒力的苏云金芽孢杆菌菌株的分离及鉴定

从我国3种典型植被覆盖的6个地区的土壤样品分离得到了348株苏云金芽孢杆菌菌株,采用杀虫活性测定方法从中获得了32株对小地老虎具有高毒力的菌株。利用PCR-RFLP鉴定体系和SDS-PAGE蛋白分析法,研究了这32株苏云金芽孢杆菌的杀虫晶体蛋白基因类型和晶体蛋白表达情况,对小菜蛾、二化螟、棉铃虫的杀虫活性测定也证明了苏云金芽孢杆菌cry基因类型、表达蛋白及杀虫活性间的相关性。     

苏云金杆菌HD-1制剂对小菜蛾的抗性筛选及抗性特征

本文报道用苏云金杆菌ＨＤ┐１的全培养物和杀虫晶体蛋白制剂对室内饲养的小菜蛾分别进行抗性筛选的结果。全培养物筛选群体对ＨＤ┐１筛选源的敏感性基本没有变化,ＨＤ┐１杀虫晶体蛋白制剂对这个品系的ＬＣ５０较敏感小菜蛾的ＬＣ５０提高了将近１．４８倍;含有灭活芽孢的杀虫晶体蛋白混合制剂对其ＬＣ５０增加了１．３３倍。经杀虫晶体蛋白制剂处理的群体,ＨＤ┐１全培养物、杀虫晶体蛋白制剂和灭活芽孢┐杀虫晶体蛋白混合制剂对它的ＬＣ５０分别是对敏感小菜蛾的１．４８、６．６８和７．５６倍,但是这两个抗性筛选群体对异源菌株ＴＪ┐２０全培养物的敏感性与敏感小菜蛾比较,基本没有变化;对其它两种ＴＪ┐２０制剂表现出了较低的交差抗性。     

酶联免疫吸附测定法测定四种苏云金杆菌菌株的晶体蛋白含量

用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定苏云金杆菌81—6的晶体蛋白含量,结果表明:严格控制实验条件,ELISA法测定具有良好的重复性。用ELISA法测定苏云金杆菌四个菌株的纯晶体蛋白和相应的孢晶混合物,通过回归方程可求出各个孢晶混合物中的晶体蛋白含量。HD—1和7216的ELISA法测定结果与用小菜蛾进行生测的LD_(50)值比较,证明ELISA法测定样品晶体蛋白含量的高低基本反映该样品毒力大小。     

农抗120中组份A‘对几种作物病原真菌抑菌活性的研究

本文测定了农抗１２０中组份Ａ＇对水稻纹枯菌、棉花立枯病菌、棉花枯萎菌和苹果树腐烂病菌的抑菌活性。结果表明：农抗１２０Ａ＇对水稻纹枯病菌和棉花立枯病菌有强烈的抑制作用，其最低抑菌浓度均为０．２５μｇ／ｍＬ，２４小时抑菌率达５０％的抑菌浓度分别为１．０μｇ／ｍＬ和２．５μｇ／ｍＬ、且抑菌强度与１２０Ａ＇浓度成比。     

十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳定量测定苏云金杆菌δ－内毒素

十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳定量测定苏云金杆菌δ－内毒素１前言目前已研究出测定苏云金杆菌（Ｂ，ｔ．）δ－内毒素晶体蛋白含量的可靠方法。此方法首先用高ｐＨ溶液处理样品以抑制Ｂ．ｔ蛋白酶，再用聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）法，从生长基质蛋白...     

苏云金芽孢杆菌BtC008杀虫晶体蛋白基区鉴定、克隆及杀虫活性分析

苏云金芽孢杆菌BtC008对棉铃虫、小菜蛾和甜菜夜蛾等鳞翅目害虫具有高毒力。本文分析了其杀虫基因类型包括cry1Ab、cry1Ca、cry1Ia、crygAb和一种新的cry1类基因，SDS-PAGE分析其至少2种cry1类基因获得了表达，在分子水平说明了该菌株高毒力的原因。在此基础上克隆了1种cry1Ab类杀虫晶体蛋白（insecticidal crystal proteins，ICPs）基因，并被Bt杀虫晶体蛋白基因命名委员会命名为cry1Ab20。序列分析显示该基因所编码蛋白与已知的Cry1Ab13有1个氨基酸不同。将cry1Ab基因毒性片段（1．95kb）插入表达载体pET-21b，转化Escherichia coli Rosetta（DE3）菌株，表达的包涵体蛋白对小菜蛾和棉铃虫幼虫具有杀虫活性，LC60分别为100．74μg／mL和29．87μg/mL，进一步明确了Cry1Ab20蛋白的杀虫活性区。     

杀线虫苏云金芽胞杆菌菌株YC-10的分离鉴定及活性测定

自烟草中分离获得对南方根结线虫Meloidogyneincognita具有较高杀线活性的拮抗细菌菌株YC-10。研究发现该菌株有伴胞晶体产生,菌体、芽胞形态及生理生化特性与苏云金芽胞杆菌库斯塔克亚种B．thuringiensissubsp．kurstaki相似,16srDNA序列分析表明其与苏云金芽胞杆菌相似性最高,初步确定该菌株为苏云金芽胞杆菌。菌株发酵液及伴胞晶体蛋白对南方根结线虫J2有很强的杀线活性,发酵液处理南方根结线虫,24h线虫死亡率为100％;伴胞晶体蛋白处理南方根结线虫,24h的LC50为5．86μg．mL^-1。研究结果显示该菌株在线虫生物防治上有较大的应用潜力。     

苏云金素与苏云金杆菌芽孢晶体混剂对小菜蛾的增效作用

将苏云金素和苏云金杆菌的孢晶制剂分别作为单一制剂，用混和饲料感染法在室内测定苏云金素分别与苏云金杆菌ＨＤ－１、ＣＴ－４３、８１－６、ＷＰ－２等４个菌株孢晶制剂的混剂对小菜蛾幼虫的协同作用。按Ｓｕｎ－Ｊｏｈｎｓｏｎ毒力指数法计算结果表明，苏云金素对所有供试菌的孢晶制剂都有增效作用，共毒系数从１２７．４３至４１５．６２不等。当混剂以芽孢晶体为主要活性组分，苏云金素占全部活性组分的１６．７％情况下增效作     

产抗菌蛋白芽孢杆菌的筛选及抗菌蛋白性质

对小麦赤霉病菌（ＪＦ－１２）有拮抗作用的７６个芽孢杆菌菌株中有３０个能产生抗菌物质。根据无细胞培养滤液对氯仿和热处理的稳定性将３０个菌株分成三类。属于类型Ｉ的１４个菌株中，Ｂ３、Ａｎｔ－２７和Ａｎｔ－６４的抗菌物质可以被８０％饱和度硫酸铵沉淀，不能通过透析膜。Ｂ３的粗提抗菌蛋白对胰蛋白酶、蛋白酶Ｋ和ＲＮＡ酶均不敏感；在ｐＨ５．０￣１０．０范围内，抑菌活性与对照无显著差别；热处理（６０℃／３０ｍｉｎ     

苏云金杆菌高效生产菌株的筛选

从灯蛾罹病死亡幼虫中分筛筛选出苏云金杆菌ＢａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓＳＢ－１菌株，从引进的Ｂ．ｔ．菌种中筛选出ＳＢ－８菌株。该两株菌经发酵试验，生产性能良好，对抗药性强的台湾、泰国和深圳品系的小菜蛾毒力较高。田间试验表明杀虫效果好。     

苏云金芽孢杆菌对松材线虫的杀线活性

在室内条件下,测定了17株苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis伴孢晶体蛋白对松材线虫Bursaphelenchus xylophilus的杀线活性。通过初筛,发现菌株020、RBT-200701的伴孢晶体蛋白对松材线虫有明显毒杀作用。在测试的浓度范围内（菌株020为6.37-203.9μg/ml;RBT-200701为13.7-438.8μg/ml）,菌株对松材线虫的校正死亡率随其浓度增大而提高;随时间延长杀虫效果提高。020菌株晶体蛋白24h、48h时对松材线虫的LC50、LC95分别为183.20、408.20μg/ml和80.132、25.29μg/ml;RBT-200701菌株伴孢晶体蛋白24、48h时对松材线虫的LC50、LC95分别为368.00、868.00μg/ml和82.73、382.73μg/ml。SDS-PAGE分析发现这2个菌株晶体蛋白的蛋白图谱不同。     

味精废水驯化后苏云金杆菌菌株晶体和芽孢的组分及特性

对苏云金杆菌出发菌株H3a经长期味精废水驯化获得的8种变异菌株进行了茄子瓶装味精废水培养基培养,并应用液体双相法分离了晶体和芽孢。通过SDS-PAGE电泳确定了晶体蛋白组分的分子量为120、104、67—68、43—45kD,芽孢蛋白组分的分子量为148、120、67—68、55、46、24、16kD,二者共同的蛋白分子量为120、68及43—46kD;选取经分离后的G．1菌株晶体并通过DEAE—离子交换纤维素柱层析和Sephadex G-100凝胶柱层析分离,得到了两个主峰,分子量为120、68kD。生物测定120、68kD肽段对小菜蛾的毒性,结果其半致死浓度分别为0．609、＞25μg/ml,而全培养液为6．03mg/ml。     

对小菜蛾高毒的苏云金杆菌菌株筛选试验初报

从田间自然死亡的小菜蛾虫尸中分离到Ｂ．ｔ．９４１９茵株，经复壮选育及摇瓶考核，在自选培养基上生长良好，２４ｈ孢子开始脱落形成晶体，３６ｈ全部形成晶体。晶体大、宽棱形、角尖。４８ｈ发酵液含菌量为３５亿／ｍＬ。经发酵液对小菜蛾毒力测定，４８ｈＬＣ_５０：对照ＨＤ－１含菌量为２７４ｍＬ／Ｌ，而９４１９仅１２４ｍＬ／Ｌ。     

苏云金杆菌不同菌株混合发酵对发酵效价和蛋白含量的影响

采用5种不同苏云金杆菌菌株进行了菌株交叉混合摇瓶发酵试验和一种组合2．3t发酵罐中试,以及两个优势组合在不同氮源培养基上的混合发酵试验。摇瓶试验获得两个优势组合为GC—91 58和94004 94001,其发酵效价分别为6476和6071IU/μl,晶体蛋白含量分别为0．526％和0．577％。发酵效价分别比GC—91纯培养提高50％和40％,晶体蛋白含量分别比GC—91纯培养提高24％和36％。两种组合在以豆饼粉为主要氮源的培养基上发酵水平分别达到5650和5800IU／μl,明显优于以棉籽饼粉为氮源的培养基。GC—91 58组合在2．3t发酵罐中试发酵效价和晶体蛋白含量达到4520IU/μl和0．467％。     

多菌灵防治油菜菌核病药效下降原因及防治对策

１９９５～１９９７年以５μｇ／ｍＬ为检测标准,对通州地区油菜菌核病进行了室内监测和田间试验,结果表明,油菜菌核病已大范围内多菌灵产生抗性,导致防效显著下降,其中抗性比例最高达１００％,与１９９６年相比,１９９７年产生的抗性范围进一步扩大,抗性比例升高２４．８３个百分点,防效只有３０．４２％,本文将油菜菌核多菌灵的抗性标准划分为低抗ＥＣ５０为１－１０μｇ／ｍＬ,中抗,ＥＣ５０为１０～１００μｇ／ｍＬ     

对夜蛾科幼虫高毒力的苏云金芽孢杆菌菌株及其晶体蛋白特性

本文对自德国土壤中分离的８株苏云金芽孢杆菌进行毒力测定和晶体蛋白特性的研究。生物测定结果表明，８株Ｂｔ中除Ｓ２１－１、Ｓ２１－１３对甜菜夜蛾无毒性外，对夜蛾科的４种供试昆虫均有很高的毒效，４８小时校正死亡率高达８０％～１００％；扫描电镜观察和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ晶体蛋白电泳结果可知，Ｓ１１－６和Ｓ２１－１３２个菌株只有一种菱形晶体和一条相应的１３５ＫＤａ主带，其余６个菌株均有菱形和方形两种晶体，以及两条相应的１３５ＫＤａ和６５ＫＤａ主带。另对晶体的特性与其毒力的关系进行了讨论。     

几株高效苏云金杆菌菌株对玉米螟、棉铃虫、粘虫和黄地老虎的毒力测定

本文以玉米螟、棉铃虫、粘虫和黄地老虎为供试昆虫，对筛选出的７株高效苏云金杆菌菌株的孢晶制剂进行了毒力测定。以ＬＣ５０为衡量各菌株的毒效指标，属血清型Ｈ６的“Ｇ０２”菌株对上述４种供试昆虫的毒力最高，属血清型Ｈ３ａ３ｂ的“８０－１”菌株对棉铃虫和粘虫的毒力也高于“ＨＤ－１”菌株。这一研究结果为今后生产高效的苏云金杆菌制剂及生产菌株的轮换提供了后备菌株     

苏云金芽孢杆菌BtC008杀虫晶体蛋白基因鉴定、克隆及杀虫活性分析

苏云金芽孢杆菌BtC008对棉铃虫、小菜蛾和甜菜夜蛾等鳞翅目害虫具有高毒力。本文分析了其杀虫基因类型包括cry1Ab、cry1Ca、cry1Ia、cry2Ab和一种新的cry1类基因,SDS-PAGE分析其至少2种cry1类基因获得了表达,在分子水平说明了该菌株高毒力的原因。在此基础上克隆了1种cry1Ab类杀虫晶体蛋白(insecticidalcrystalproteins,ICPs)基因,并被Bt杀虫晶体蛋白基因命名委员会命名为cry1Ab20。序列分析显示该基因所编码蛋白与已知的Cry1Ab13有1个氨基酸不同。将cry1Ab基因毒性片段(1.95kb)插入表达载体pET-21b,转化EscherichiacoliRosetta(DE3)菌株,表达的包涵体蛋白对小菜蛾和棉铃虫幼虫具有杀虫活性,LC50分别为100.74μg/mL和29.87μg/mL,进一步明确了Cry1Ab20蛋白的杀虫活性区。     

东北地区高毒力苏云金芽孢杆菌HB-3菌株生物学特性研究

从自然死亡的玉米螟幼虫体内分离获得一株对玉米螟高毒的苏云金芽孢杆菌,编号为HB-3。该菌株产生菱形和方形两种晶体蛋白。纯化晶体及孢晶混合物的毒力测定结果表明,该菌株对玉米螟具有较高毒力,LC₅₀分别为5.82μg/mL和5.94μg/mL,对尖音库蚊也有一定毒力,LC₅₀分别为16.59μg/mL和17.50μg/mL。生理生化特性研究结果表明,HB-3与已知的蜡螟亚种(Bacillus thuringiensissubsp.galleriae)基本一致,血清型为H5ab。晶体蛋白的SDS-PAGE分析表明,HB-3菌株晶体蛋白至少由分子量为133 kDa、65 kDa4、5 kDa和23 kDa的4种多肽组成。