酶联免疫吸附试验方法的比较

应用白背飞虱单克隆抗体比较了３种酶联免疫吸附试验方法。结果表明：间接酶联免疫吸附试验的灵敏度高于直接酶联免疫吸附试验,分别为０．０３１２５μｇ蛋白／ｍｌ（相当于１／２５６头成虫）和０．０６２５μｇ蛋白／ｍｌ（相当于１／１２８头成虫）,而双抗夹心酶联免疫吸附试验无法使用。样品中非目标抗原（捕食者）浓度对检测结果有显著的影响,且对直接酶联免疫吸附试验的影响更大,检测时必须对样品做适当的稀释     

溴氰菊酯酶联免疫吸附分析方法研究

建立了定量测定溴氰菊酯间接竞争酶联免疫吸附分析方法(ic-ELISA)。合成了半抗原1-羧基-(3'-苯氧基苯基)甲基-3-(2',2'-二溴乙烯基)-2,2-二甲基环丙基羧酸酯(Med)和N-2-(羧基丙基)氨基甲酰基-(3'-苯氧基苯基)甲基-3-(2',2'-二溴乙烯基)-2,2-二甲基环丙基羧酸酯(Di)。分别采用碳二亚胺法和混合酸酐法将半抗原与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联制备了免疫原Di-BSA和包被原Di-OVA、Med-OVA。将制得的溴氰菊酯免疫原免疫动物获得多克隆抗体,经间接非竞争ELISA法测得其效价为2.5×105。通过对甲醇含量、离子强度、pH值等影响因素进行异源分析条件的优化,确立了溴氰菊酯间接竞争酶联免疫分析方法的最佳检测条件(30%甲醇、氯化钠0.4 mol/L、pH 7.5),并建立了标准竞争曲线。该方法的IC50值为0.55±0.05 mg/L,检测限(IC10)为3.76±0.35 μg/L,对大多数拟除虫菊酯无交叉反应。分别在自来水、河水和土壤样品中添加0.05 ~5.0 mg/L(或mg/kg)的溴氰菊酯,回收率分别为89.7% ~106.8%、82.4% ~101.7%、75.6% ~97.8%。     

酶联免疫吸附反应(ELISA)在烟草病毒病检测中的应用

本文综述了酶联免疫吸附分析法(ELISA)在烟草病毒检测中的应用。对EIISA的基本类型,改进和提高灵敏度的方法进行了分析,并阐述了该技术的某些发展趋势。     

甲萘威酶联免疫吸附分析技术研究

合成了两种不同结构的甲萘威半抗原并与载体蛋白质共价偶联制备人工抗原。以人工抗原免疫动物获得对甲萘威具特异性的高效价抗体 ,建立并优化了痕量甲萘威的竞争性酶联免疫吸附测定法。该法测定甲萘威的线性浓度范围为 10 1～ 10 -4 μg/ml,检测限低于 0 .0 1ng/ml。其他结构类似的氨基甲酸酯类杀虫剂对甲萘威的分析无干扰。     

快速检测大豆疫莓菌的酶联免疫吸附技术研究

利用已经制备的大豆疫霉菌的抗血清，对大豆疫霉菌的纯培养和大豆病组织进行检测。结果表明，间接法（Ｉ－ＥＬＩＳＡ）和夹心法（ＤＡＳ－ＥＬＳＩＡ）能较好地检测纯培养的大豆疫霉菌，但在检测病组织时，夹心ＥＩＳＡ的特异性较强，能够可靠地检测到大豆病组织内的病原菌。     

应用酶联免疫吸附监测1994～1995年BYDV株系

１９９４～１９９５年从我国南北主要冬、春麦区黄矮病发病田块采集ＢＹＤＶ标样，进行酶联免疫测定。１９９４年测定标样１５９株，其中ＧＡＶ株系１１２株，占测定总数的７０．４４％；ＰＡＶ株系８株，占测定总数的５．０３％；与ＰＡＶ抗体和ＭＡＶ抗体都不发生免疫反应的共３９株，占２４．５３％。１９９５年测定了１８７株ＢＹＤＶ标样，ＧＡＶ株系８４株，占４４．９２％；ＰＡＶ株系１８株，占９．６３％；ＰＡＶ与ＧＡＶ混合感染９株，占４．８１％；阴性反应的７６株，占４０．６４％     

梨中AVERMECTIN B1残留的酶联免疫吸附测定

本文建立了检测梨中Ａｖｅｒｍｅｃｔｉｎ Ｂ１的间接竞争酶联免疫吸附测定法（ＥＬＩＳＡ）。以结合物４″－Ｏ－（单）琥珀酰Ａｖｅｒｍｅｃｔｉｎ Ｂ１－ＢＳＡ免疫家兔，制备特异性针对Ａｖｅｒｍｅｃｔｉｎ Ｂ１的多克隆抗体。梨样本经甲醇提取后用ＥＬＩＳＡ检测。在６．０￣６０ｍｇ／ｋｇ添加浓度范围内，Ａｖｅｒｍｅｃｔｉｎ Ｂ１的回收率为８６％￣１０５％，变异系数（ＣＶ）为４％￣８％。样本检测限为０．１ｍｇ／     

酶联免疫吸附测定法测定四种苏云金杆菌菌株的晶体蛋白含量

用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定苏云金杆菌81—6的晶体蛋白含量,结果表明:严格控制实验条件,ELISA法测定具有良好的重复性。用ELISA法测定苏云金杆菌四个菌株的纯晶体蛋白和相应的孢晶混合物,通过回归方程可求出各个孢晶混合物中的晶体蛋白含量。HD—1和7216的ELISA法测定结果与用小菜蛾进行生测的LD_(50)值比较,证明ELISA法测定样品晶体蛋白含量的高低基本反映该样品毒力大小。     

用酶联免疫吸附法检测番木瓜的两种病毒病

同属于马铃薯Y病毒组的番木瓜环斑病毒P型(PRSV—P)和番木瓜叶变形花叶病毒(PLDMV)能在番木瓜上引起症状相似的病害。这两种病害仅根据症状难以区别。采用双向抗体夹层的酶联免疫吸附法,可以上述两种抗体血清的1000倍稀释液对被侵染的番木瓜的天然提取液进行检测。     

应用酶联免疫吸附试验法鉴定几种主要马铃薯病毒

制备了PVX,PVY_o,PVY~n,PVA,PVS,PVM,PLRV和TRV等8种主要马铃薯病毒抗体的辣根过氧化物酶结合物,在检测黑龙江省马铃薯主栽品种克新一、二、三、四号等品种的植株样品1155份和800余份正在脱毒中的试管苗样品中,发现上述8种马铃薯病毒在几个主栽品种中的侵染率较高,而且大多数感病植株是由3至7种病毒复合侵染,并首次查明本省存在PVY~n和PVM病毒。对不带上述8种病毒的样品又用双向反向聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定带马铃薯纺锤块茎类病毒(Potato spindle Tuber Viroid)状况,现已获得无上述8种病毒和类病毒的种植材料。     

三唑磷酶联免疫吸附测定法中包被抗体稳定剂的研究

选择了甘油、山梨醇、聚乙二醇(PEG)、卵清蛋白(OVA)、多肽、糖、氨基酸等试剂,通过经验法和正交法相结合的手段配制了一系列稳定剂,对吸附在酶标板上的三唑磷多克隆抗体进行处理(37℃,1 h)后,再在37℃下连续贮存 7 d,利用直接竞争ELISA法对不同稳定剂处理的包被抗体免疫活性、亲合性及检测灵敏度进行检测,并与未经稳定剂处理的对照进行比较,筛选得到效果较好的稳定剂 1 (质量分数:甘油2.5%,氨基酸1.5%,蛋白胨3.0%,离子螯合剂0.1%,防腐剂0.01%)。用稳定剂 1 处理包被抗体后,4~6℃下保存半年及37℃下保存14 d的试验结果表明,抗体的活性相对保持率分别为97.8%和94.2%;其免疫活性、亲合性(I50分别为68.43和54.38 ng/mL)及灵敏度(I10分别为3.72和 3.22 ng/mL)与常规方法包被的抗体(包被好后不贮存,直接检测,I50为60.73 ng/mL,I10为 3.11 ng/mL)无明显差异;冻融试验表明,经稳定剂 1 处理的三唑磷抗体在反复冻-融次数不超过8次时其活性也是稳定的。说明筛选出的稳定剂可以显著提高三唑磷多克隆包被抗体的稳定性,可用于三唑磷ELISA试剂盒的生产。     

直接竞争酶联免疫吸附分析法测定甘蔗中的克百威残留

采用包被抗体直接竞争酶联免疫吸附分析(ELISA)法测定了甘蔗中的克百威残留量。在优化条件下,对克百威标样检测的线性范围为0.000 1~1 mg/L,抑制中浓度(IC50)=3.09 μ g/L,5次重复测定的相对标准偏差(RSD)为9.3%, IC20值为0.085 μ g/L。甘蔗中分别添加克百威标样1,0.1,0.01 mg/kg,直接竞争ELISA法测定的回收率分别为86.3% ~99.1%,89.0% ~101% 和70.7% ~90.6%,RSD(n=5)分别为5.4% ,5.2% 和10.7%。ELISA法对甘蔗中克百威残留的最小检出量为6.3×10-11g,定量限可达1.26 μ g/kg。而同样前处理条件下高效液相色谱-紫外检测器(HPLC-UV)法对克百威的最小检出量为5×10-8 g,检测甘蔗中克百威残留的定量限仅为2.5 mg/kg。     

酶联免疫吸附测定(ELISA)检测苏云金杆菌伴孢晶体蛋白质研究

用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测Bt伴孢晶体毒素蛋白质,最低可检值7.79ng/0.15ml,灵敏、精确,具高度专化性。测定标准品HI—1—S—1980和Bt乳剂产品中伴孢晶体蛋白质含量,分别为108.06mg/g粉剂和4.57—6.17mg/ml乳剂。用标准品与待测样品(Bt乳剂)的晶体蛋白质含量,就可计算出待测样品的相对毒力效价。ELISA与昆虫生测之间有良好的相关性。     

直接竞争酶联免疫吸附分析法测定小白菜中溴氰菊酯的残留量

应用作者所在实验室自制的、对溴氰菊酯具有特异性亲和力的多克隆抗体和酶标半抗原,建立了包被抗体-酶标半抗原直接竞争酶联免疫吸附分析法(DC-ELISA)。小白菜样品经超声提取、浓缩和10%甲醇定容后采用DC-ELISA法测定,并采用高效液相色谱法进行验证。结果表明:在抗体包被浓度为2.0 mg/L、辣根过氧化物酶(HRP)标记溴氰菊酯半抗原稀释2.0×105倍、包被介质为pH 7.2 PB、反应介质为含0.125 mol/L NaCl pH 6.8 PB的优化条件下,DC-ELISA法检测溴氰菊酯的线性范围为0.10~10 mg/L,溴氰菊酯对抗体-酶标半抗原反应的抑制中浓度(IC50)为1.68 mg/L,相对标准偏差(RSD,n=5)为2.11%,IC10值为0.16 mg/L。在5、1和0.2 mg/kg 3个添加水平下,DC-ELISA法测定小白菜中溴氰菊酯的平均回收率分别为97%、106%和95%,RSD(n=5)分别为8.5%、8.1%和8.1%。高效液相色谱法同步测定小白菜中添加0.2 mg/kg溴氰菊酯的回收率为107%。本研究建立的DC-ELISA法可用于小白菜中溴氰菊酯含量的快速测定。     

直接竞争酶联免疫吸附分析法测定桃中氰戊菊酯的残留量

采用包被抗体、酶标半抗原直接竞争酶联免疫吸附分析法(ELISA)测定了氰戊菊酯在桃中的残留量。结果表明:在氰戊菊酯多克隆抗体包被浓度为4.0 mg/L、辣根过氧化物酶(HRP)标记氰戊菊酯半抗原稀释1.0×105倍条件下,ELISA法检测氰戊菊酯的线性浓度范围为0.01~10 mg/L,氰戊菊酯对抗体-酶标半抗原反应的抑制中浓度(IC50)为193μg/L,相对标准偏差(RSD,n=5)为4.5%,IC20为13.5μg/L。在2、0.2和0.05 mg/kg添加水平下,ELISA法测定桃中氰戊菊酯的回收率分别为81%~89%、85%~98%和85%~106%,RSD(n=5)分别为5.1%、5.6%和7.7%。ELISA法对桃中氰戊菊酯的最低检出浓度为0.014 mg/kg。     

中华草蛉对棉蚜与棉铃虫的捕食作用研究

中华草蛉捕食棉蚜、棉铃虫卵或幼虫,其功能反应的类型均属HollingⅡ型反应。温度对寻找效应有明显的影响,在35℃条件下,中华草蛉对猎物寻找效应比15℃时高出7倍,比20℃时高8倍。这说明,掌握适宜温度释放草蛉,可提高其捕食作用。根据食性选择试验:中华草蛉最喜食棉蚜,次为棉铃虫卵,其喜食程度并不因猎物数量的增加而转移。     

酶联免疫吸附技术在小麦丛矮病测报中的应用研究

小麦丛矮病是我国北方麦区的一种主要病害。七十年代,河北省发生普遍而严重,八十年代初,我省的部分地区发生较重。1983年聊城地区发病面积达60余万亩,近8万亩绝产,对小麦生产构成了严重威胁,自1982年我省将丛矮病列为主要测报对象之一。小麦丛矮病的病原为小麦丛矮病毒,该病毒寄主范围广,除侵染小麦外,还侵染多种禾本科杂草,它的传毒介体是灰飞虱[Laodelphex striafellus(Fallen)]。小麦丛矮病的测报主要依据灰飞虱的带毒率和丛矮病     

靶标酶在除草剂研究与开发中的作用

大多数除草剂都是通过特殊酶的抑制而产生杀草作用的。根据作用靶标对除草剂进行分类,了解靶标酶的作用机理及特性,对于新型除草剂的设计和杂草抗性的防治能够起到很大的帮助。本文介绍了谷胱甘肽转移酶(GST)、细胞色素P450酶、乙酰乳酸合成酶(ALS)、乙酞辅酶A羧化酶(ACCace)的研究进展。并分别从酶的生理功能、酶学特征、抑制剂作用机理、抑制剂的研究、抗性等方面进行了不同程度的阐述。