皱皮木瓜超氧化物歧化酶分离纯化研究

[目的]探讨皱皮木瓜超氧化物歧化酶（SOD）分离纯化工艺。[方法]以重庆綦江皱皮木瓜为试验材料,采用硫酸铵分级沉淀、Se-vage法除杂蛋白、丙酮再次沉淀脱色除杂和Sephadex G-100凝胶层析,分离纯化皱皮木瓜SOD。采用Folin-酚法测定蛋白质含量,用改良的邻苯三酚自氧化法测定酶活性。[结果]皱皮木瓜SOD在层析过程中得到较好的分离纯化。其纯化倍数是178.72倍,回收率是4.94%,比活力是303.82 U/mg蛋白。SDS-PAGE纯度鉴定结果表明,电泳图为一条谱带,表明分离纯化到达电泳纯的样品。[结论]采用该分离纯化工艺得到比活力较高,达到电泳纯的皱皮木瓜SOD样品。     

木瓜凝乳蛋白酶的单链单甲氧基聚乙二醇修饰产物的检测与分析

在底物保护下,采用三聚氰氯活化的单链单甲氧基聚乙二醇(mPEG1)对木瓜凝乳蛋白酶(Cp)进行了共价修饰,反应混合物经毛细管电泳(CE)分析及Sephadex G-75分离纯化获得修饰度为平均每分子Cp偶联3～4个mPEG1长链的修饰纯酶(mPEG1-Cp)．以三硝基苯磺酸(TNBS)法与CE法作对比测定了该修饰酶的平均氨基修饰度;以-ELISA法检测mPEG1-Cp的抗原性;用紫外吸收光谱和荧光发射光谱对mPEG1-Cp进行了结构的测定分析．结果表明：Cp的mPEG1修饰产物经毛细管电泳检测为多组分体系,最大产物峰为平均每分子Cp偶联3～4个mPEG1的低修饰度修饰酶,其相对分子质量为40712～46044;该修饰酶抗原抗体结合能力完全消失,体内活性半衰期是原酶的1．6倍,同时酶活力保持在36．5％;紫外吸收光谱和荧光发射光谱分析表明:mPEG1-cp结构有轻度的改变．     

皱皮木瓜中总黄酮分离纯化工艺

以皱皮木瓜[Chaenomeles speciosa(Sweet)Nakai]为试验材料,优化总黄酮分离纯化工艺,为发掘皱皮木瓜的潜在利用价值提供依据。本研究考察了乙醇浓度、料液比和超声温度对皱皮木瓜原料粉中总黄酮含量的影响,并以静态吸附法筛选最佳吸附树脂,动态吸附法确定上样条件和洗脱条件。结果表明皱皮木瓜总黄酮提取最佳工艺为70%乙醇水溶液,1∶20料液比及50℃温度下超声辅助提取,提取时间20min,超声功率200 W。原料粉中总黄酮含量为8.64%。纯化工艺发现ADS-17大孔树脂对皱皮木瓜中总黄酮具有较好的吸附和解吸性能,其最佳上样流速2mL/min,上样浓度2.04mg/mL;进一步用4BV 10%乙醇水溶液洗脱杂质,4BV 30%乙醇水溶液、3BV 50%乙醇水溶液依次洗脱得总黄酮,洗脱流速1.5 mL/min。最终总黄酮产品纯度为94.67%。     

聚乙二醇修饰对木瓜凝乳蛋白酶酶学及药物生物学性质的影响

采用活化的单甲氧基聚乙二醇（mPEG-5000）对木瓜凝乳蛋白酶（Cp）进行了共价修饰,修饰产物经毛细管电泳检测与分析表明：主产物为平均每分子Cp偶联3—4个mPEG。长链的低修饰度修饰酶．以此修饰酶为研究对象,进行了Cp在修饰前后的主要酶学、药物生物学性质的比较研究．结果表明：Cp经mPEG,修饰后,Kn^app（酪蛋白为底物）有所增加,但与Cp相比,mPEG1修饰酶的pH稳定性、热稳定性以及抗胰蛋白酶的水解能力却均有增强;药代动力学结果还显示,mPEG1-Cp的体内活性半衰期延长,修饰酶体内半衰期是原酶的1．6倍,表明mPEG1修饰酶具有更好的临床应用前景．     

尖细金线蛭蛋白水解酶抑制剂的分离纯化

用丙酮沉淀、超滤、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００凝胶过滤等方法提纯尖细金线蛭蛋白水解酶抑制剂。结果表明，２０％浓度丙酮沉淀的提取液对胰蛋白酶有抑制作用。２０％～８０％浓度的丙酮提取液对胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶及弹性蛋白酶的抑制特性基本相同；与２０％浓度丙酮提取液对胰蛋白酶的抑制特性不同。     

鸭肝蛋白酶的分离纯化及其部分性质研究

经Tris-HCl缓冲液抽提、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析、Sephacryl S-200凝胶过滤层析,得到鸭肝蛋白酶电泳纯制品．纯化倍数为650.16倍,回收率为19.23%．经SDS-PAGE和凝胶过滤测得该酶的分子量为35kD．该酶在pH6.0～11.0,温度低于25℃稳定,当温度上升到55℃时活性迅速下降．该酶在pH10和60℃时达到最高活性．进一步研究得知：Cu^2＋离子对该酶有明显促进作用,而Mn^2＋却使酶几乎失活．以酪蛋白为底物,在pH10.0、37℃时测得米氏常数Km值为1.33%．     

斑点叉尾鮰鱼肠蛋白酶的分离纯化及其酶学性质

以斑点叉尾鮰Ictalurus punctatus鱼肠道为原料提取蛋白酶,对分离条件进行了优化,并对部分酶学性质进行了研究。结果表明：鱼肠内的蛋白酶在硫酸铵饱和度为70%时,所得沉淀中酶活力最高。经过阴离子交换层析分离后,蛋白酶的纯化倍数达到了218倍。该蛋白酶的最适温度为55℃,最适pH为7.5,具有良好的低温稳定性和酸碱稳定性,米氏常数为5.4 g/L。K^＋和Ca^2＋离子对该蛋白酶活性有较弱的激活作用,Mg^2＋则能显著激活蛋白酶活性;Na＋和Zn2＋对蛋白酶的活性有较弱抑制作用,而Cu^2＋和EDTA能显著抑制蛋白酶活性。     

日本鳗鲡肠道蛋白酶的分离纯化及其酶学性质研究

【目的】从日本鳗鲡(Anguilla japonica)肠道中分离纯化蛋白酶并分析其酶学性质,为日本鳗鲡饲料的科学研制提供理论依据。【方法】通过硫酸铵沉淀分级分离及Sephadex G-100和Sephadex G-75两级凝胶柱层析纯化日本鳗鲡肠道蛋白酶,经聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和SDS-PAGE鉴定蛋白酶纯度和亚基分子质量,利用凝胶层析法测定酶的分子质量,用等电聚焦电泳法测定酶的等电点,并研究以酪蛋白为底物时蛋白酶催化反应的动力学参数及pH、温度、金属离子和修饰剂对蛋白酶活力的影响。【结果】日本鳗鲡肠道蛋白酶亚基分子质量为65.3ku,酶分子质量为260.3ku,等电点为8.23;该蛋白酶的最适pH为8.2,最适温度为55℃,米氏常数(Km)为4.832mg/mL,最大反应速度(Vmax)为0.269U/min。日本鳗鲡肠道蛋白酶在pH为6.6~9.0时表现稳定,在20~55℃时具有较好的热稳定性,在60℃以上稳定性迅速下降。Mg2+、Ca2+、Co2+、Ba2+、Mn2+、Cu2+、Zn2+和Hg2+对日本鳗鲡肠道蛋白酶的活力表现出不同程度的抑制作用,其中以Hg2+的抑制作用最强,1 mmol/L Hg2+可使酶活力丧失87.63%;而Fe2+有激活作用,5mmol/L Fe2+可使酶活力提高134.53%。修饰剂EDTA、对氯汞苯甲酸(pCMB)和Cys对酶活力没有影响,苯甲酰基磺酰氟(PMSF)和二硫苏糖醇(DTT)对酶活力则有不同程度的抑制作用。【结论】日本鳗鲡肠道蛋白酶由4条相同肽链组成,属于丝氨酸蛋白酶类,二硫键是维持其活性所必需的,酶活力易受环境中酸碱度、温度和金属离子调控。     

无花果蛋白酶的分离纯化及其理化性质研究

以无花果良种布兰瑞克和紫果１号为材料，其匀浆滤汁经有机溶剂沉淀、超滤等方法处理，得到无花果蛋白酶粉。酶比活力为１５．３４ｕ／ｍｇ·ｐｒｏｔｅｉｎ，纯化倍数为１１．６８％，酶产率为１．５％，酶活力回收率为２７．４％，酶最适ｐＨ为８．０，在ｐＨ５￣１０范围内处理０．５ｈ活性稳定，酶最适温度为４０℃，在温度５０℃以内活性稳定。酶具有巯基蛋白酶特性，能被半胱氨酸和ＥＤＴＡ激活，而被ＨｇＣｌ２抑制。     

鸭肝蛋白酶的分离纯化及其部分性质研究

经Tris-HCl缓冲液抽提、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow 离子交换层析、Sephacryl S-200凝胶过滤层析,得到鸭肝蛋白酶电泳纯制品. 纯化倍数为650.16倍,回收率为19.23%. 经SDS-PAGE和凝胶过滤测得该酶的分子量为35 kD. 该酶在pH 6.0～11.0,温度低于25 ℃稳定,当温度上升到55 ℃时活性迅速下降. 该酶在pH 10和60 ℃时达到最高活性. 进一步研究得知: Cu2+离子对该酶有明显促进作用,而Mn2+却使酶几乎失活. 以酪蛋白为底物,在pH 10.0、37 ℃时测得米氏常数Km值为1.33%.     

酵母细胞自溶条件的研究

本文研究了pH,时间,温度,酶制剂对酵母自溶的影响,从而得出最佳的单因素水解条件。     

海参组织蛋白酶K的部分酶学性质及其对海参自溶的影响

采用特异性荧光底物法检测海参体壁组织蛋白酶K(CTSK)的酶学性质并初步探讨其对海参自溶的影响。结果表明:CTSK的最适pH为5.0,最适温度为50℃,在20~40℃之间酶活力稳定性较好;Zn~(2+)、Fe~(2+)、Fe~(3+)、Cu~(2+)均对CTSK产生一定抑制作用,抑制率均超过60%;而Ca~(2+)和Mn~(2+)对其活性影响不大,Mg2+可增强该酶活性、CA-074、Z-Leu-Leu-Leu-H(ZLLL)、碘乙酸、E-64、抗痛素、PMSF对CTSK的抑制率均在85%以上,EDTA和1,10-菲啰啉对该酶的抑制率分别为39.7%和16%,而DTT和L-Cys可将该酶活力分别提高至127.46%和238.3%。在海参匀浆物中分别加入特异性抑制剂CA-074和ZLLL,25℃水浴加热使其发生自溶,并通过SDSPAGE检测CTSK对海参蛋白降解的影响。结果显示ZLLL能够在一定程度上抑制海参蛋白的降解。CTSK是一种巯基氨基酸含量较高的半胱氨酸蛋白酶,具有一定的金属离子依赖性,但又易被多种金属离子抑制;CTSK有可能直接参与海参自溶过程中蛋白质的降解。     

葡萄酒泥酵母诱导自溶工艺的条件优化

以葡萄酒泥酵母为试验材料,采用单因素和正交试验设计,优化酵母细胞自溶的工艺条件.结果表明:在温度47.5℃,NaCl质量分数2%,pH 4.5,处理时间33h的最优条件下,酵母自溶前后电导率增加2.49ms/cm,氨基氮含量增加2.154 90mg/mL,自溶效果最好.此方法成本低,易操作,适合工业化生产.     

3种蔬菜及浮植方式对虾池水体的净化效果

以对虾养殖池水为培植水,采用3种浮植方式水培水芹、水蕹菜和生菜,通过对蔬菜的生长、氮磷的吸收及对虾池水化学状况的比较,探讨3种蔬菜对虾池水的净化效果以及适合水培蔬菜的浮植方式,以解决养殖期间虾池水体氮磷积累的问题。结果表明,水蕹菜日增重量与吸收氮磷能力显著高于水芹与生菜,且存活率最高。3种蔬菜对虾池水水质均有净化效果,其中水蕹菜效果最为明显,20 d后种植水蕹菜的水体中总氨氮、硝态氮、总氮、总磷以及化学需氧量分别下降55.0%、78.6%、52.6%、44.2%和41.3%,水芹次之。3种浮植方式对水芹和水蕹菜生物量的增加和氮磷的吸收无显著影响,生菜则以浮板种植最佳。研究认为,在3种蔬菜中水蕹菜对虾池水体的适应性强,是较为适宜在对虾池塘中种植的蔬菜,绳结式浮植方式为其在虾池中种植的适宜方式,结合上海地区对虾生产,建议在虾池早期按500 kg/hm2种植水蕹菜,能吸收利用未被利用的50%的输入氮。     

河湾水质持续净化系统的构建及效果研究

针对坪山河水体的污染特征,研究基于天然湾畔的河道持续净化系统,通过预处理、二级生物和沉淀以及深度净化等组合处理单元,开展坪山河河道污水强化处理成套技术研究。结果表明：河湾水质持续净化系统对坪山河水体中COD 的去除率为48.19%,对TP 的去除率为67.93%,对TN 的去除率为70.09%,对NH3-N 的去除率为80.15%,除极个别数据出现波动外,大部分各指标出水浓度均优于《地表水环境质量标准》（GB3838-2002）V 类水标准。该系统既能保证河水得到充分、有效的处理,保障河道原有各项功能作用,且可以因地制宜,选取合适的工艺灵活运用,极大缓解污水处理厂处理能力的不足;人工湿地作为河道景观还能改善和美观河道的生态环境;此外袁该示范工程吨水运行费用仅为0.19 元,能产生良好的经济效益与景观效应,在河道治理方面有着较大的发展和应用前景。     

4种水生植物配置模式对铅污染的净化效应

通过盆栽试验,研究花叶芦竹、石菖蒲、水生鸢尾和美人蕉在不同配置模式下,其植物根系活力、叶绿素含量及对水体和土壤铅的净化效果。结果表明,在不同配置模式下,根系活力变化的大小依次为4种植物混种> 3种植物混种> 2种植物混种>单种植物。4种水生植物的叶绿素a、b和总叶绿素含量均表现为混种模式>单种模式。在4种水生植物的混种模式中,包含花叶芦竹和美人蕉的组合模式中水体铅含量和土壤铅含量较低。其中,花叶芦竹+石菖蒲+美人蕉混种模式中,水体和土壤铅含量分别为0.10和8.15 μg·mg^-1。花叶芦竹和美人蕉由于其根系的特点,使花叶芦竹的地上部分铅含量较高,而美人蕉的地下部分铅含量较高。且在与这2种水生植物混种的模式中,这种效应更加明显。综合考虑净化效果和经济因素,认为花叶芦竹+石菖蒲+美人蕉混种模式对铅污染的净化效果最好。     

猪场污水漂浮栽培植物修复系统的组成及净化效果研究

介绍了2种用于猪场污水氧化塘中进行污水净化处理的漂浮栽培植物修复系统的技术原理、特点、系统组成、种植管理技术,研究了在这个系统中种植美人蕉Ganna generalis、风车草Cyperus alternifolius、香根草Vetiveria zizanioides、蕹菜Ipomosa aquatica、细叶萼距花Cuphen hyssopifolia、彩叶草Coleus scutellaroides、金叶木Sanchezia nobilis和紫杯苋Cyathula prostrata等几种植物的生长状况以及这些植物对污水中氮、磷的净化效果,结果表明,这2种漂浮植物修复系统具有设施简单、管理方便的特点,这些植物中的美人蕉、香根草、蕹菜、细叶萼距花等在该系统中生长良好并具有很好的水质净化效果和广泛的应用前景。     

有关细菌素分离纯化方法的评价

具有抑菌活性的细菌素在食品保鲜和医疗保健方面有着广泛的应用价值.细菌素由于分子较小和不均质性导致难以分离纯化.本文概述了细菌素纯化的三阶段策略以及不同细菌素分离纯化的方法.     

ISSR分子标记在芦柑提纯复壮研究中的应用

采用ISSR(Inter-simple Sequence Repeat)分子标记技术,从随机引物中筛选出能稳定扩增的14条引物,利用2条引物对供试的10个芦柑样品进行PCR扩增,获得了与母本完全一致的条带,从而可以确定鉴定样本为珠心苗。