玉米单倍体胚性愈伤的诱导与鉴定

为建立一套适合玉米单倍体胚性愈伤培养和快速筛选体系,以单倍体诱导系MT-1为父本,18-599红为母本进行单倍体诱导,设置暗培养、全光照培养和光暗周期培养3种光照培养方式,均分别培养0、1、5、10、20、40 h后,观察幼胚形态和颜色。结果表明,自交系18-599红的单倍体和二倍体幼胚均能正常诱导形成胚性愈伤组织;不同光照培养方式对紫色(二倍体)愈伤率的检出效果依次为光培养>光暗周期培养>暗培养。通过光照筛选的方法可在早期鉴定愈伤组织,其二倍体愈伤的筛选率在培养20 h时可达68%,40 h时为71%,剔除了大部分非单倍体愈伤,综合分析确定光照强度为2 000 lx、20℃处理20 h为最适光照筛选处理。染色体压片技术获得的拟单倍体愈伤中有二倍体愈伤的检出,但经流式细胞仪检出获得的拟单倍体愈伤再经染色体压片检测,无二倍体愈伤,表明流式细胞仪检测单倍体愈伤的准确性高于染色体压片技术。通过光照初步筛选结合流式细胞仪的精确鉴定,迅速从3 000个单倍体愈伤中获得110个单倍体愈伤,单倍体愈伤率3.67%。本研究结果为以玉米单倍体愈伤为转基因受体,快速获得转基因植株提供了一定的技术支撑和理论参考。     

基因枪法转化棉花胚性愈伤组织获得转基因植株

以川棉（Gossypium hirsumm，)239胚性愈伤组织为受体，用基因枪轰击法导入外源基因，获得了经Gus组织染色和PCR扩增鉴定的转基因植株。以gus基因瞬时表达蓝点数为评价指标，考察了影响基因枪转化棉花胚性愈伤组织的几个因素，结果表明：使用碱裂解法提取和PEG法纯化的质粒DNA，优于试剂盒大量提取的DNA；当轰击压力为10．7MPa时，轰击距离6或9cm较好；轰前经1-2周培养的愈伤组织较佳。实验还表明，玉米的Ubi启动子在棉花胚性愈伤组织中有启动活性。轰击后直接用100mg/L的卡那霉素进行筛选优于梯度筛选。     

γ射线对玉米愈伤组织及植株再生的影响

不同剂量的γ射线辐照不同继代时间的玉米自交系愈伤组织,愈伤组织生长速率和二倍体细胞比率随剂量升高而下降,非整倍体细胞和染色体畸变则上升。在分化培养基上,辐照后的愈伤组织,再生植株的能力降低,畸形苗明显增多。γ射线不仅能提高再生植株的变异率,而且可扩大变异范围。     

玉米幼胚愈伤组织的诱导及分化的研究

用不同培养基在不同条件下分别培养6个基因型的玉米幼胚，结果表明：其胚性愈伤组织的产生受玉米基因型、培养基及幼胚大小的影响，胚性愈伤组织的分化受蔗糖浓度、培养基及光照的影响。     

影响玉米幼胚愈伤组织再生率的因素分析

为探讨影响玉米幼胚愈伤组织的再生率的因素,本试验以3个优良玉米自交系为材料,对影响幼胚的胚性愈伤组织诱导率、克隆指数和分化率的因素进行了研究。结果表明,3个玉米自交系幼胚的愈伤诱导率差异极显著。 生长环境对975-12影响显著,对18-599和416051影响不显著。18-599和416051的胚大小为2mm时II型胚性愈伤组织的诱导率最高,而975-12在胚大小为2.5mm时II型胚性愈伤诱导率最高。3个自交系的克隆指数和分化率一般在第3或第4代时达到最大值。综合分析表明,18-599和416051这2个自交系具有愈伤组织诱导率高、克隆能力强、易分化的优点,是玉米转基因研究中具有潜在利用价值的优良自交系。     

玉米未成熟胚胚性愈伤组织诱导率与内源激素含量的关系

以胚性愈伤组织诱导率高低不同的9个玉米自交系未成熟胚为外植体,用改良N6培养基诱导培养愈伤组织。酶联免疫法测定不同培养时间后未成熟胚,以及由此诱导的胚性和非胚性愈伤组织,内源脱落酸(ABA)、吲哚乙酸(IAA)、赤霉素(GA3、GA4)和细胞分裂素(DHZRI、PA、ZR)含量。结果发现,胚性愈伤组织诱导率与未成熟胚ABA和IAA含量正相关,与胚性和非胚性愈伤组织ABA含量正相关,与胚性愈伤组织GA3含量负相关。在胚性愈伤组织开始发生之际,外植体的ABA和IAA含量出现峰值,GA3含量出现低谷。因此认为,未成熟胚高水平的ABAI、AA含量和低水平的GA3含量,有利于胚性愈伤组织的诱导。但是胚性愈伤组织的ABA含量却低于非胚性愈伤组织,且胚性愈伤组织诱导率与胚性愈伤组织IAA含量负相关。由此看来,胚性愈伤组织的诱导和保持,可能还与各种激素的协同作用有关。     

铁炮百合的胚性愈伤组织诱导和植株再生

以铁炮百合(又称麝香百合)杂种系品种‘White heaven’的组培苗叶片为外植体,研究了不同种类和浓度的激素对愈伤组织诱导和植株再生的影响,并通过叶片位置、接种方式以及光暗等不同处理进一步优化胚性愈伤组织的诱导。结果表明:以组培苗基部叶片为外植体,采用叶片近轴面向上的接种方式,在MS+1.0mg.L-12,4-D+0.1mg.L-16-BA的培养基上暗培养可诱导出胚性愈伤组织,诱导率可达65.74%;经石蜡切片鉴定可观测到球形胚和心形胚。最佳分化和生根培养基分别为MS+0.1mg.L-1NAA和1/2MS+0.5mg.L-1IBA,分化率达81.48%,生根率达91.67%。结果还显示2,4-D在百合胚性愈伤组织的诱导中起到了关键作用。     

矾根胚性愈伤组织诱导与植株再生

为了建立矾根组培快繁体系,以矾根去顶尖幼嫩顶芽为外植体,研究不同培养基对胚性愈伤组织诱导、胚性愈伤组织增殖以及植株再生的影响。结果表明,愈伤组织最佳培养基为MS+2.4-D 3.0 mg/L+6-BA 0.3 mg/L,愈伤诱导率达到93.0%,团块较大,结构较松散,有颗粒状态,个别团块呈水浸状;以最优胚性愈伤组织增殖培养基为MS+2.4-D 2.0 mg/L+6-BA 0.2 mg/L进行扩增,愈伤组织发育较好,结构较松散,颗粒状疣突分明,水分较少,呈淡黄绿色。胚状体分化最佳培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L+IBA 0.2 mg/L,胚状体诱导率达91.8%。对幼根发育不良的植株,在1/2MS+IBA 0.1 mg/L+IAA 0.1 mg/L培养基上进行生根培养效果好,生根率100%,平均根数5.5条,根长2～3 cm,苗高4.1 cm。     

玉米幼胚和成熟胚愈伤组织诱导过程中内源激素的比较

以玉米自交系87-1的幼胚和成熟胚为材料,采用酶联免疫法测定了不同培养时间诱导的幼胚及成熟胚愈伤组织内源脱落酸(ABA)、吲哚乙酸(IAA)、赤霉素(GA3)和细胞分裂素(ZR)含量的动态变化。测定结果表明,在0～7d时,幼胚及成熟胚的IAA和GA3含量均急剧下降, 说明在胚萌发阶段IAA和GA3需求量较大。在幼胚胚性愈伤组织发生初期（14 d左右）,两种激素含量出现峰值,反映出幼胚较高水平的IAA和GA3含量,有利于胚性愈伤组织的诱导。在胚萌发后的愈伤诱导阶段,成熟胚愈伤中IAA、GA3和ABA含量以及IAA/ABA和GA3/ABA比值明显高于幼胚愈伤,且IAA/ABA和GA3/ABA比值均大幅度上升; 而幼胚愈伤组织中IAA/ABA和GA3/ABA比值则稳定地维持在较低的水平上。可以认为, 成熟胚愈伤组织中过高水平的IAA、GA3和ABA含量及IAA/ABA和GA3/ABA比值大幅度的上升可能是导致其难以形成胚性愈伤组织的主要生理原因之一。     

EMS对水稻成熟胚愈伤组织生长和植株分化率的影响

使用ＥＭＳ处理水稻成熟胚诱导的愈伤组织，观察了愈伤组织生长、细胞染色体畸变和植株分化情况。试验结果表明，低浓度ＥＭＳ处理对水稻愈伤组织生长和植株分化有刺激作用；较高浓度ＥＭＳ处理则有抑制作用。     

海蓬子愈伤组织的诱导及植株再生

本试验研究了培养基成分对海蓬子愈伤组织诱导、继代培养、植株分化和生根的影响。结果表明:愈伤组织诱导的最适培养基是MS+Thidiazuron(TDZ)1.0mg/L+NAA1.0mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂7.0g/L;继代培养的最适培养基为MS+NAA1.0mg/L+TDZ0.1mg/L+蔗糖30.0g/L+Gelrite3.0g/L,愈伤组织快速生长;愈伤组织分化的培养基为MS+NAA1.0mg/L+TDZ0.1mg/L+BA2.0mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂7.0g/L+NaCl8g/L,愈伤组织分化频率可达62.2%。生根培养基中添加0.5mg/L的麦芽提取物(maltextract,ME)可显著增加每株的平均根数。NaCl促进海蓬子愈伤组织的分化,麦芽提取物可促进幼苗侧根的发生,但NaCl和麦芽提取物均不利于愈伤组织的诱导。本试验建立了较高频率的海蓬子愈伤组织诱导及植株再生体系。     

苹果叶片愈伤组织植株再生研究

本研究以苹果品种千秋试管苗叶片为试材，接种子ＭＳ附加不同浓度ＢＡ和ＮＡＡ激素组合的培养基上，经愈伤组织诱导、不定芽诱导，一步诱导千秋叶片再生不定芽。得到苹果品种千秋叶片－愈伤组织－不定芽再生的适宜培养条件为：ＭＳ基本培养基附加ＢＡ ２ｍｇ／Ｌ，ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ；黑暗诱导５个星期后在同种培养基中转入光照培养，培养室温度为２５±２℃。     

玉米幼胚离体培养和植株再生

系统研究了不同材料、不同培养基对玉米幼胚愈伤组织诱导及继代分化、植传再生的影响，结果发现，8个玉米自交系幼胚均能诱导出愈伤组织。但在继代过程中差异较大。将能继代的愈伤组织转入分化培养基进行生根培养。5010和综3自交系获得了再生植株。并且植株移栽可成活。     

EMS和苯甲酰胺复合处理对水稻成熟胚愈伤组织出愈率和植株分化率？…

研究了化学诱变剂ＥＭＳ和修复抑制剂苯甲酰胺复合处理对水稻成熟胚愈伤组织出愈率和植株分化率的影响。结果表明，ＥＭＳ和苯甲酰胺复合处理严重降低了愈伤组织的诱导率和植株分化率，苯甲酰胺有较强的修复抑制作用。     

玉米幼嫩叶片愈伤诱导及分化过程优化的研究北大核心CSCD

以玉米自交系的无菌苗幼嫩叶片为外植体,探讨并优化了幼苗来源的胚性愈伤组织的诱导、继代和分化条件。结果表明,CIM1是本试验中最适合的培养基,获得的愈伤组织经过改良处理后能达到较高的分化率。这说明选择合适诱导培养基以及对愈伤进行适当改良都可以提高愈伤组织的分化率,有利于建立高效的玉米组培再生体系。     

蔺草成熟种子愈伤组织诱导及植株再生研究

以"岗山3号"蔺草成熟种子作为外植体,研究了不同激素浓度及组合对愈伤组织诱导及植株再生的影响。结果表明,在2,4-D浓度为2.0mg/L,6-BA浓度为0.5mg/L时,蔺草种子的愈伤组织诱导率最高,为74.7%;在IAA浓度为0.5mg/L,KT浓度为2.0mg/L时,蔺草种子的愈伤组织分化率最高,为83.3%;IAA与KT的比值对再生芽和再生根形态影响较明显。     

低温对诱导小麦未成熟胚愈伤组织出愈率的影响研究

试验研究低温处理对诱导小麦未成熟胚愈伤组织出愈率结果表明 ,6h短时间低温处理可显著提高其出愈率 ,比对照增加 1 4 3倍。随处理时间的延长其出愈率逐渐降低 ,18h后其出愈率又渐增 ,低温处理 30h时其出愈率显著高于对照 ,为对照的 1 4 1倍。     

影响水稻愈伤组织再生植株数量和质量的因素

以籼稻栽培品种成熟种子形成的愈伤组织为材料，对影响植株再生的数量和质量的一些因素进行了研究。与Ｎ６相比较，ＭＳ培养基中的无机大量成分严重抑制再生植株根系生长，但ＭＳ的无机微量成分对诱导植株再生的效果则较明显。培养基中的ＢＡ水平对植株再生具有数量上和质量上的双重影响，较高浓度的ＢＡ能诱导更多的植株再生，而较低的ＢＡ浓度则有利于再生植株的生长和根系的形成。培养容器的通气状况是影响再生植株数量和质量的另     

Kao''s有机化合物与T维生素对小麦幼胚胚性愈伤组织发生的影响

试验研究MS基本培养基中加入Kao's有机化合物与T维生素对小麦幼胚胚性愈伤组织发生的影响结果表明,加入Kao's有机化合物与T维生素的MC和MD诱导培养基可显著提高胚性愈伤组织诱导率,且ME与MF分化培养基明显增加绿原基分化率和出苗率。