农业气象因素影响稻瘟病发生分子机制初探

水稻是我国重要的粮食作物,由子囊菌(Magnaporthe oryzae)所引起的稻瘟病是水稻生产活动中的重要限制因子之一,每年给水稻生产造成巨大的经济损失。随着水稻及稻瘟菌全基因组测序工作的完成,水稻和稻瘟菌间的互作机制已日渐明朗。水稻对稻瘟菌的抗性主要来自于自身体内天然免疫机制对病原菌入侵的有效阻止,同时病原菌能够通过抑制水稻的基础免疫从而使易感水稻品种致病。稻瘟病的爆发和流行需要具备3个必要的条件:易感水稻品种、致病的稻瘟病菌群以及适宜致病的气象因素。因此气象因素是控制稻瘟病爆发和流行的一个十分重要的因素。本文立足于近年来的研究成果,从稻瘟菌侵染过程、稻瘟病发病过程及特征、水稻抗病机理等方面对水稻和稻瘟菌的互作机制进行了综述,同时分析了温度、光照、湿度等气象因素对稻瘟病菌致病和水稻抗病的影响,并初步对其影响稻瘟病爆发和流行的分子机制进行探讨,以寻求防治和控制稻瘟病发生、发展的最佳方法,为合理防控稻瘟病提供理论依据和帮助。     

抗稻瘟病（Piricularia oryzae）水稻突变体R917的诱发和筛选研究

用６０Ｃｏγ射线１０ｋｒａｄ处理城特２３２／秀水３７Ｆ０代水稻干种子，经稻瘟病病区多代筛选，培育成抗病突变体Ｒ９１７。１９９１、１９９２年经全省９个稻疾病病圃联合鉴定，抗性分别为０．８９和１．０级。１９９２年经太湖稻区搜集的７个稻瘟病菌群中１３８个菌株接种鉴定，Ｒ９１７杭其中１３６个菌株，抗病频率为９８．５５％，双亲对其中的１９个菌株均为感，而Ｒ９１７为抗。试验表明，Ｒ９１７是一个抗稻瘟病强，抗谱广的水稻突变体，可作为水稻品种改良的新抗源。     

稻瘟菌侵染诱导性水稻脂氧合酶的同工酶鉴定及性状分析

稻瘟菌侵染水稻后，诱导感染叶中脂氧合酶的活性上升。本研究通过ＤＥＡＥ－Ｔｏｙ－ｏｐｅａｒｌ和ＣＭ－Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ离子交换柱层析，比较感染叶和健全叶中脂氧合酶的同工酶组成及活性变化，首次分离并鉴定出与稻瘟病抗性相关的两个诱导性同工酶即ＣＭｌｏｘ１和ＣＭｌｏｘ２。其中，亲和性稻瘟菌小种（００７）接种稻叶中ＣＭｌｏｘ１和ＣＭｌｏｘ２的活性分别是未接种健康对照的１．３和３．７倍；非亲和性小种（１３１）     

稻瘟病菌交配型PCR鉴定体系的建立

交配型分析可以用来评价真菌的群体遗传多样性。根据稻瘟病菌(Magnaporthe grisea）交配型基因MAT1-1和MAT1-2全序列设计2对特异引物，并摸索了适宜的PCR反应条件，即95℃变性5min，接着94℃变性30s，54℃退火30s，72℃延伸1min，循环30次，最后72℃延伸7min，建立了稻瘟病菌交配型PCR鉴定体系。以10个已知交配型的标准菌株基因组DNA为模板，结果PCR测得的交配型与其已知的交配型一致。进一步用采自福建田间的150个稻瘟病菌菌株与GUY11／KA3对峙培养，并以PCR方法测定其交配型，结果123个可育菌株中用两种方法所测交配型95．1％相吻合，而27个不育菌株经PCR检测交配型为MAT1-1的菌株有7个，交配型为MAT1-2的菌株有20个。说明PCR方法可较准确地检测稻瘟病菌菌株的交配型，特别是可以测不育菌株的交配型。     

性连锁矮小鸡（dwdw）生长激素受体（cGHR）基因突变的精确定位

本研究根据已知正常鸡的ＧＨＲ第１０个外显子和３’ＵＴＲ区的ＤＮＡ序列，设计一对引物，分别对正常农大褐鸡和矮小型农大褐鸡进行了ＰＣＲ扩增。结果正常鸡扩增片段为２０２６ｂｐ，矮小鸡为２５５ｂｐ。将矮小鸡ＰＣＲ产物克隆在ｐＧＥＭ－Ｔ载体上进行测序，精确定位了农大褐矮小鸡ＧＨＲ基因缺失突变位点。     

野生稻天然群体限制性酶切片段长度（RFLP）多态性研究

对我国现存的、保存较好的３个野生稻自然群体的基因组ＤＮＡ进行了限制性酶切片段长度多态性（ＲＦＬＰ）分析。从分子水平上证明广西桂林和江西东乡野生稻自然群体是我国现有的、与栽培稻隔离较好的两个野生稻群体，这两个野生稻自然群体的遗传多样性均较低；广西扶绥群体是一个高度杂合的群体，其遗传多样性较高。对扶绥群体内高度遗传异质性的成因进行了探讨，证明基因突变和渐渗杂交是植物遗传多样性和进化的两个主要动力。研究     

我国花生矮化病毒（PSV）株系的血清学和壳蛋白基因序列分析

琼脂双扩散血清试验表明，参试的我国花生矮化病毒６个分离物和株系之间血清学关系十分亲近，而与美国ＰＳＶ－Ｅ和ＰＳＶ－Ｗ株系存在明显的差异。完成对花生致病力不同的ＰＳＶ－Ｍｉ和ＰＳＶ－Ｓ两个株系壳蛋白基因的ＲＴ－ＰＣＲ扩增，克隆和序列分析。     

小麦M染色体组的RELP标记

利用２９个小麦ＲＦＬＰ探针与６种限制性酶切的Ｍ染色体组ＤＮＡ进行分子杂交，获得了５５个Ｍ染色体组的ＲＦＬＰ标记，其中１５个与小麦ＡＢＤ染色体组相同，４０个染Ｍ染色体组的特殊标记，在顶荒山羊草和小麦－顶芒山羊草双二倍体以及小麦顶芒山羊草异代换系中稳定遗传     

几种化学物质用量对叶类蔬菜硝酸盐和营养品质的影响

盆栽试验和化学分析结果表明,５种化学物质不同浓度处理以Ｇ１,Ｇ２对小白菜和莴笋株高有明显的促进作用,Ｓ３,Ｒ３,Ｍ抑制两种蔬菜生长,Ｇ,Ｒ,Ｍ,Ｓ对小白鼠根重的促进作用为低浓度大于中,高浓度,而Ｄ对莴笋根重具有类似作用。Ｍ各浓度,Ｇ１,Ｇ２,Ｒ３处理提高小白菜产量７．０％－３９．１％,Ｇ提高莴笋产量６７．９％－８３．２％,Ｄ,Ｓ,Ｇ,Ｍ均促进叶产量增加,Ｍ和Ｄ大幅度降低小白菜硝酸盐含量,Ｄ却相反。     

粳稻云引抗稻瘟病基因的遗传分析及其定位

摘要：用8个稻瘟病菌[Pyricularia grisea (Cooke) Sacc.]系对稻瘟病抗性材料云引进行田间注射接种鉴定。结果表明，云引对接种的8个菌系均表现为抗病反应。用抗病材料云引和感病材料丽江新团黑谷作亲本杂交获得F1，F1自交获得F2群体，用上述8个菌系分别对亲本、F1和F2群体进行田间注射接种，鉴定结果表明云引对所有8个菌系的抗性均表现为单基因控制的分离特性（抗感分离比为3∶1）。利用微卫星标记将云引对四川-43菌系的抗性基因初步定位于水稻的第11号染色体上，与标记RM202的遗传距离为3.8 cM。     

小麦胚乳贮藏蛋白高分子量谷蛋白亚基1Dy10单克隆抗体的制备

利用杂交瘤法制备了小麦胚乳贮藏蛋白高分子量谷蛋白亚基的单克隆抗体，根据与不同ＨＭＷ－ＧＳ的反应强度，所制备的８株抗体可分为３种类型：一是广谱型；除与抗原ＨＭＷ－ＧＳ １Ｄｙ１０反应外，还与其它各ＨＭＷ－ＧＳ发生一定强度的反应；二是中间型。     

芽孢杆菌(Bacillus spp.)拮抗基因的分子标记

用ＢＯＸ－ＰＣＲ指纹图谱进行了１８４个格兰氏生菌株,其中有４１个菌株与标准菌种Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ之间的ＤＮＡ指纹图谱相似性大于７０％,在离体条件下,测定这些菌株对水稻纹枯菌的拮抗性能。选出４个代表菌株（Ｇ４３３、Ｇ４３４＾－、Ｇ３９６＾＋、Ｇ２９２＾＋）用于筛选ＲＡＰＤ－ＰＣＲ的有效引物、先后共测试了１２４个随机引物,有８个随机引物能够产生明显与拮抗基因相关的ＤＮ     

陕甘宁地区根瘤菌的16S rDNA PCR-RFLP分析

数值分类、全细胞蛋白电泳和ＤＮＡ同源性研究表明,分离自陕甘宁地区的２２株极瘤菌构成４个独立的新种群。在此基础上,进行了１６ＳｒＤＮＡ ＰＣＲ－ＲＦＬＰ分析,扩增产物经４种限制性内切酶酶切后,所得到的ＲＦＬＰ电泳图谱存在在的差异,ＲｓａＩ,ＨｉｎｆＩ,ＭｓｐＩ和ＨａｅⅢ的酶切图谱类型分别为１７、１６,２２和１８种。以ＵＰＧＭＡ法对１６Ｓ ｒＤＮＡ ＰＣＲ－ＲＦＬＰ普进行聚类,在９０％的相似性水平上４     

GUS基因和CMV—CP基因在转基因番茄后代的遗传研究

本工作对外源基因ＧＵＳ和ＣＭＶ－ＣＰ在转化番茄植株后代的遗传稳定性方面作了研究。实验证明，位于同一质粒上的ＧＵＳ和ＣＭＶ－ＣＰ基因，在Ｒ１代番茄转化植株中表现为连锁遗传。     

苎麻核诱变育种技术及效果分析

用＾６０Ｃｏγ射线５００－１００Ｇｙ辐照,成功选育出高产,优质,抗性强和区域适应性广等优良特性为一体的苎麻新品种圆叶青和７４６９。苎麻不同器官的辐射敏感性不同,辐照苎麻种子的适宜剂量为５０－３００Ｇｙ,辐照地下茎的适宜剂量为２０－９０Ｇｙ。辐照苎麻种子Ｍ１能发生明显的变异分离,其诱变率可提高１２．７０％－５２．８３％。因此,在Ｍ１即可进行严格的选择,并采用无性系繁殖技术,固定其优良性状,扩大其群体     

甜菜坏死黄脉病毒新疆分离物外壳蛋白基因的序列分析

用根据国外已报道的甜菜坏死黄脉病毒（ＢＮＹＶＶ）的ＲＮＡ２的序列合成的两个引物，通过对ＢＮＹＶＶ新疆分离物的ＲＮＡ逆转录获得了ＢＮＹＶＶ的外壳蛋白基因的ｃＤＮＡ，经ＰＣＲ扩增后用Ｔ４聚合酶补平两端，克隆到ｐＧＥＭ－７Ｚｆ（＋）质粒的ＳｍａＩ位点，转化大肠杆菌ＤＨ５α，经筛选得到正向插入的重组质粒ｐＧＥＢ３。用ＰＣＲ扩增和酶切均得到５９０ｂｐ的ＤＮＡ片段。用ＡＢＩ３７０Ａ型ＤＮＡ全自动序列仪测出该ｃ     

新城疫北京强毒株融合糖蛋白（F）基因的克隆及序列分析

ＮＤＶ北京强毒株Ｆ４８Ｅ９经ＳＰＦ鸡胚增殖,超速离心纯化,异硫氰酸胍法提取病毒ＮＡ后,用ＲＴ－ＰＣＲ扩增,得到其融合糖白基因。将扩增产物与ｐＧＥＭ＾Ｒ－Ｔ载体相连接转化,经过ＡｍｐＩＰＴＧ－Ｘｇａｌ（ＡＩＸ）平板筛选,ＨｉｎｄⅢ酶切及ＰＣＲ鉴定,初步获得了含Ｆ基因的阳性克隆。用渐近法对克隆片段进行全序列分析,证明得到了作长１７４４个核苷酸的ＮＤＶ Ｆ蛋白基因。     

反转录—套式PCR检测IBV分离株及其RFLP分型研究

根据国外发表的基因序列,自行设计两对引物,应用反转录－套式ＰＣＲ成功扩增ＩＢＶ分离株Ｈ１和Ｈ２Ｓ１基因,利用限制性内切酶ＨａｅⅢ,ＸｃｍＩ,ＢｓｔＹＩ三级酶切,做ＲＦＬＰ分析,将两毒株归为Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ型。     

固氮粪产碱菌nifH∷gusA融合基因的构建及在根际联合体系中…

采用ＰＣＲ技术，获得含粪产碱菌ｎｉｆＨ基因启动子的０．６ｋｂＨｉｎｄ－Ⅲ－ＢａｍＨＩ的扩增片段，核苷酸序列分析结果表明，该ＰＣＲ产物的序列与已报道的模板ｎｉｆＨ启动子序列完全一致。通过两轮基因连接、转化和筛选，获得ｎｉｆＨ启动子与ｇｕｓＡ正向连接的融合基因表达载体ｐＴＧＹ７。经三亲结合将ｐＴＧＹ７导入粪产碱菌中，证明该融合基因能在结合子中正常表达。采用融合基因表达的组织化学定位方法，研究粪产碱菌在     

鸡生长激素受体基因的克隆与部分序列分析

利用高盐法从鸡血中提取高分子量ＤＮＡ，以λＥＭＢＬ３为载体构建了鸡染色体文库，用鸡生长激素受体ｃＤＮＡ基因的部分序列作探针，从文库中筛选得到３个阳性克隆。通过对阳性克隆Ｉ插入片段的酶切和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析，表明它含有全长的鸡生长激素受体基因，建立了该基因的限制性酶切图谱。将插入片段亚克隆到ｐＧＥＭ－７Ｚｆ（＋）质粒上，对含有基因５’端序列的２．５ｋｂＥｃｏＲＩ酶切片段进行了序列分析。