南瓜属三个种的亲缘关系与品种的分子鉴定研究

用随机扩增多态ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）技术,对南瓜属三个主要栽培种即美洲南瓜、中国南瓜（Ｃ。ｍｏｓｃｈａｔａＤ．）和印度南瓜（Ｃ．ｍａｘｉｍａＤ．）的２３个品种（系）及种间杂交后代进行亲缘关系与品种（系）的分子鉴定研究。从２００个随机引物（１０ｂｐ）筛选出１７个引物,对２３个南瓜品种（系）的染色体组ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增,共产生８０条扩增带,其中７７条在南瓜属三个种间表现出差异,可作为遗传标记（ＲＡＰＤ标     

我国棉花主栽品种的RAPD指纹图谱研究

利用ＲＡＰＤ技术，对我国９个棉花主栽品种基因组进行ＤＮＡ片段扩增，以研究棉花不同栽培品种的指纹图谱。结果表明：１８个不同的随机引物中有１３个扩增出多态性ＤＮＡ片段，其中１个引物（ＯＰＰ－０９）可使每一品种具有其自身的特征谱带，展示了ＲＡＰＤ技术可从ＤＮＡ水平上鉴别我国现有棉花推广品种的分子差异，用它鉴定品种纯度是可行的。     

小麦杂种优势群研究：I.利用RAPD标记研究小麦品种间遗传差异

选用我国的３８个冬小麦品种（系）和２个加拿大春小麦品种（系），利用ＲＡＰＤ标记进行小麦基因型之间分子标记遗传差异研究，探讨分子标记在建立小麦杂种优势种中的应用。利用５９个随机引物对４０个小麦基因型ＰＣＲ扩增结果表明，其中２９个引物（占４９％）扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分离表现多态性，这２９个引物共扩增出１６８条带，其中７８条带（占４６．６％）具有多态性，每个引物可扩增１￣６条多态性带，平均２．７条带     

水稻农垦58与农垦58s的RAPD和ISSR分析

以光敏核不育水稻农垦５８ｓ及其原始株农垦５８核ＤＮＡ为模板,进行了ＲＡＰＤ和ＩＳＳＲ多态性分析,结果表明：在可扩增的１５４个ＲＡＰＤ引物和７８个ＩＳＳＲ引物中,８个ＲＡＰＤ引物和７个ＩＳＳＲ引物的扩增产物表现出ＤＮＡ多态性,ＲＡＰＤ－ＰＣＲ产物的多态性标记分别出现在农垦５８ｓ,农垦５８或二者同时出现,而ＩＳＳＲ－ＰＣＲ扩增产物的多态性标记只出现在农垦５８或农垦５８ｓ中。获得多态性ＲＡＰＤ标记及ＩＳ     

利用RAPD技术检测转绿型白化突变系W25基因组的变化

转绿型白化突变系Ｗ２５系γ射线辐照籼型温敏核不育水稻２１７７ｓ获得的一个叶色突变体。在整个生育阶段，其叶色呈现白色－转绿－返白－复绿规律变化。ＲＡＰＤ分析结果表明，７０个随机引物中有３个引物不能扩增出多态性ＤＮＡ，共扩增出４９３条ＤＮＡ条带，平均每个引物７．４条，其中引物Ｈ０５能扩增出Ｗ２５和２１７７ｓ多态性产物，２１７７ｓ表现出缺失２条特异性ＤＮＡ条带。     

桑树有性杂交后代与双亲基因组DNA的RAPD分析初报

用６个随机引物对桑５个杂交亲本和５个杂交后代基因组ＤＮＡ进行ＲＡＰＤ分析，它们均表现出丰富的ＤＮＡ多态性，反映了桑树遗传背景多种性和品种间的差异性。杂交后代与双亲间的基因组ＲＡＰＤ图谱比较，不同杂交组合和不同引物间有较大差异，５个Ｆ１代的ＤＮＡ片段绝大多数与双亲或单亲相同，但杂交后工中也出现了少数特异性片段。     

22个甘薯品种（系）遗传背景的RAPD图谱分析

通过１０个随机引物的ＤＮＡ扩增，首次报道了２２个甘薯品种的ＲＡＰＤ多态性，不同品种具有不同的ＤＮＡ扩增带型，反映了不同品种遗传背景上的差异，计算了２２个甘薯品种的Ｎｅｉ‘ｓ相似系数与遗传距离，建立了它们的ＵＰＧＭＡ系统树，并通过聚类分析与对应分析，讨论了２２个甘薯品种间的亲缘关系，ＲＡＰＤ多态性分析从分子水平上反映了甘薯品种复杂的遗传背景，并为育种的亲本选配提供了依据。     

中国春Ph1基因的RAPD标记鉴定

用２６０个１０ｂｐ随机引物对中国春（ＣＳ）、ｐｈ１ｂ突变体及其Ｆ２分离群体基因组ＤＮＡ进行ＲＡＰＤ分析,筛选出两个特异的ＲＡＰＤ标记ＯＰＲ７９３６和ＯＰＲ１７５２４。经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ分析,并结合减数分裂Ｍ１染色体配对分析,认为这两个ＲＡＰＤ标记位于５ＢＬ染色体ｐｈ１ｂ基因缺失区中,可以作为ｐｈ１ｂ基因的分子标记。     

PCR技术在快生型大豆根瘤菌菌株鉴别上的应用

以基因外重复的回文因子（ｒｅｐｅｔｉｔｉｖｅｅｘｔｒａｇｅｎｉｃｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ，ＲＥＰ）和肠杆菌基因间重复一致序列（ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｌｒｅｐｅｔｉｔｉｖｅｉｎｔｅｒｇｅｎｉｃｃｏｎｓｅｎｓｕｓ，ＥＲＩＣ）的碱基顺序设计出的引物为引物，用ＰＣＲ（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ）技术分别扩增了８株快生型大豆根瘤菌（Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ）的总ＤＮＡ，得出了具有菌株特异性的扩增产物电泳图谱，称ＲＥＰ－ＥＲＩＣＰＣＲ指纹图谱，将所得图谱进行性状编码后，用计算机数值分类系统进行平均连锁聚类分析，得出这８个菌株的聚类树状图。这一聚类结果与用其它方法聚类结果基本一致，说明ＲＥＰ－ＥＲＩＣＰＣＲ是一种鉴别快生型大豆根瘤菌菌株的经济、快速而又可靠的新方法。     

小麦抗叶锈基因Lr9、Lr24的分子标记辅助选择研究

小麦抗叶锈基因Ｌｒ９、Ｌｒ２４对目前我国叶锈菌优势致病类型均表现高度抵抗。本研究选用抗叶锈育种圃高代品系,利用ＰＣＲ方法对Ｌｒ９和Ｌｒ２４基因进行分子标记诊断,探索分子标记在小麦抗叶锈育种中进行标记辅助选择的可行性。结果表明,在４８份供试材料中,可扩增出与Ｌｒ９基因连锁的１ｋｂＤＮＡ片段的１７份材料均表现抗病,表明它们携带有抗叶锈基因Ｌｒ９;可扩增出与Ｌｒ２４基因连锁的０．３５ｋｂＤＮＡ片段的１２     

两种扩增rDNA片段RFLP图谱用于快生型大豆根瘤菌的遗传多？…

根据Ｅ．ｃｏｌｉ基因组ｒＤＮＡ保守序列设计的两对引物,分别用于扩增３０株来源于我国不同地区的快生型大豆根瘤菌菌株。扩增产物经几种较少识别序列的内切酶消化后,得出特征的限制性内切酶酶切图谱。该图谱可用于供试菌株种水平的鉴定及菌株ｒＤＮＡ分子的遗传多样性研究。选用来源于Ｅ．ｃｏｌｉ基因组１６ＳｒＤＮＡ保守序列的一对引物将所有供试菌株都扩增出一条１．５ｋｂ的带,经四种内切酶消化后发现：新疆地区来源的菌株     

用ISSR分析四川苎麻品种(系)间的遗传关系及雄性不育分子标记的建立

本文从100条ISSR引物中筛选出21条引物,对8个四川苎麻品种(系)间的遗传关系进行了分析。PCR扩增结果表明,21条引物在8份材料中共扩增出86条带,平均每条引物扩增出4.1条,其中多态性位点71个,各引物扩增出的位点数3~8个不等,平均每条引物可以检测到3.4个多态性位点。聚类分析和遗传距离分析结果表明,供试品种川7、川8与其亲本遗传距离较远。3个杂交品种(川7、川8、川9)均表现特有的偏父本遗传现象。此外,本研究用ISSR引物U835筛选到了1个雄性不育分子标记,并将其扩增产物克隆测序,结果表明该序列大小为658bp。根据该序列,此标记被转化成稳定的SCAR标记,可用于苎麻雄性不育分子标记辅助育种。     

家蚕耐氟笥RAPD分子标记研究

在含有耐氟主效基因的家蚕品种T6和高敏感品种733新及其近等基因系NF733新中，采用200个RAPD随机引物进行扩增，获得了与家蚕耐氟性有关的两个分子标记OPD－08850和OPB－10917，用OPB－10917，分子标记在加交世代中进行检测，其结果是各回交世代耐氟性个体都出现同样的特异带，从而验证了分子标记的可靠性。     

甜菜坏死黄脉病毒新疆分离物外壳蛋白基因的序列分析

用根据国外已报道的甜菜坏死黄脉病毒（ＢＮＹＶＶ）的ＲＮＡ２的序列合成的两个引物，通过对ＢＮＹＶＶ新疆分离物的ＲＮＡ逆转录获得了ＢＮＹＶＶ的外壳蛋白基因的ｃＤＮＡ，经ＰＣＲ扩增后用Ｔ４聚合酶补平两端，克隆到ｐＧＥＭ－７Ｚｆ（＋）质粒的ＳｍａＩ位点，转化大肠杆菌ＤＨ５α，经筛选得到正向插入的重组质粒ｐＧＥＢ３。用ＰＣＲ扩增和酶切均得到５９０ｂｐ的ＤＮＡ片段。用ＡＢＩ３７０Ａ型ＤＮＡ全自动序列仪测出该ｃ     

传染性法氏囊病病毒VP2基因的克隆及其重组鸡痘病毒转移载…

根据已发表的ＩＢＤＶ基因组序列设计并合成一对特异扩增ＩＢＤＶ ＶＰ２ｃＤＮＡ的引物，以纯化的ＩＢＤＶ－Ｄ７８弱毒疫苗株基因组为模板，利用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增出约１．５ｋｂ产物。将ＰＣＲ产物克隆到ｐＵＣ１９的Ｓｍａｌ位点，经酶切图谱分析等方法鉴定出重组ＶＰ２ｃＤＮＡ质粒（ｐＶＰ２）。将ＶＰ２基因正向插入ＦＰＶ启动子ＬＰ２３Ｐ２下游，连同痘苗病毒启动子Ｐ１１启动的ＬａｃＺ报告基因盒插入ＦＰＶ转移载体中     

中国香菇栽培品种的遗传相关性研究

选择１５个中国主要香菇栽培品种，应用现代分子生物学技术，扩增获得了ＤＮＡ指纹图谱，在此基础上估算了品种间的ＤＮＡ相似系数并构建了遗传相关聚类图。结果显示，１５个香菇栽培品种之间有遗传上的差异，但差异程度不同，其中一些品种之间具有相当高的遗传相关性，推断它们是同源的不同组织分离物。     

小麦杂种优势群研究：Ⅱ.普通小麦,西藏半野生小麦和斯卑尔…

选用我国的２２份普通小麦，７份西藏半野生小麦及来自国外的１７份斯卑尔脱小麦等共４６从材料，利用ＲＡＰＤ标记进行小麦品种，亚种及种间分子标记遗传差异研究，分析扩大杂交小麦育种亲本遗传基础和构建小麦杂种优势群的途径。２６个引物在４６份材料间共扩增出２７９条带，其中１８２条带具有多态性，每个引物可扩增２－１８条多态性带，平均为７条带。种间ＲＡＰＤ多态性表现为斯卑尔脱小麦〉西藏半野生小麦〉普通小麦。利用８     

马铃薯遗传资源多样性的SRAP分析

采用SRAP分子标记，对44份马铃薯品种的遗传多样性进行了分析。结果显示, 随机抽取27对SRAP引物，对基因组DNA进行特异扩增，其中23对引物扩增出多态性条带，共获得104个多态性条带, 多态性引物比率达85.2%, 平均每对引物产生4.5个多态性条带，表明SRAP标记具有较高的多态性比率。44份种质资源的SRAP标记遗传距离为0.147-0.741。当遗传距离D=0.67时，将44份种质资源分为四大类群，包括一个复合类群和三个独立类群。其中复合类群可进一步分为7个亚群。从而在DNA水平上证明了所研究马铃薯种质资源具有丰富的遗传多样性。     

粘类小麦雄性不育系线粒体DNA的AFLP标记及SCAR转化

为了能在分子水平上有效鉴定具有粘果山羊草(Aegilops kotschyi)、偏凸山羊草(A.ventricosa)、普通小麦变种斯卑尔脱(Triticum spelta)细胞质雄性不育系及其保持系90-110和8222,提高其在杂交小麦(Triticum aestivum L.)研究与应用中的定向遗传改良,本研究对其线粒体DNA进行了扩增片段长度多态性(amplified fragment length polymorphism,AFLP)标记和序列特征性片段扩增区域(sequence characterized amplified region,SCAR)标记。通过AFLP标记方法,应用64对引物组合EcoRⅠ-NNN/MseⅠ-NNN对小麦同核异质雄性不育系和保持系进行扩增,共扩增出682条带,其中113条为多态性条带。引物E-AGG/M-CTA组合在粘果山羊草细胞质雄性不育系中扩增出一条大小约300 bp的特异性条带,对该特异条带进行回收、测序,利用Primer Premier 5.0软件重新设计SCAR引物,并对这3种类型同核异质小麦细胞质雄性不育系和保持系进行扩增,其中引物YW1在3种细胞质雄性不育系和保持系中都扩增出条带,而引物YW2仅在粘果山羊草细胞质雄性不育系扩增出一条198 bp的特异性片段,结果表明,已成功地将AFLP标记转化为操作简便、表现稳定的SCAR标记。此片段与小麦线粒体基因组有很高的同源性(同源性为99%),为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)脱氢酶基因(GenBank登录号:EU534409.1)上的序列,该酶是线粒体中氧化磷酸化的入口酶,与小麦细胞质雄性不育密切相关。本研究可以用于粘类小麦细胞质雄性不育系分子标记辅助育种,也为小麦细胞质种性鉴定提供了技术支撑和理论依据。     

应用RAPD技术快速进行西瓜杂交种纯度鉴定的研究

本研究建立了简单,快速提取西瓜半粒种子ＤＮＡ方法,并简化了适合西瓜的ＲＡＰＤ－ＰＣＲ分析程序。对“无籽京欣一号”西瓜种子纯度开展了分子鉴定研究,找到了一个随机引物ＯＰＰ－０１,用它扩增的ＯＰＰ－０１／５６４只在父本与杂交种上出现,母本不出现,本文还针对ＲＡＰＤ技术在西瓜杂交种纯度鉴定上实际应用的可能性进行了讨论。