黄伞种质资源遗传多样性的RAPD分析

利用RAPD分子标记技术对9个黄伞菌株进行遗传多样性分析.结果表明:RAPD技术是准确评估黄伞遗传多样性的有效方法.50条RAPD引物中筛选出8条多态性引物,共检测出226条带,其中多态性条带143条,多态率为63％.菌株之间遗传相似系数(GS)变幅范围为0.6181～0.9306,平均GS值为0.746,表明黄伞遗传变异较丰富.聚类分析结果表明,在相似系数0.763处可将9个黄伞菌株划分为4类.     

不同浓度氯化钾对洛川县苹果树腐烂病菌的影响

为明确不同浓度氯化钾对洛川苹果树腐烂病菌(Valsa mali)的影响,作者将腐烂病菌分离株接种在不同浓度氯化钾处理的培养基中,测定菌落的平均直径和产孢量,再将不同浓度氯化钾处理培养的苹果树腐烂病菌分离株接种在苹果树枝条上,测定其致病性,明确不同浓度氯化钾处理对苹果树腐烂病菌的影响。结果表明,随着氯化钾浓度的升高,洛川苹果树腐烂病菌分离株的平均菌落直径和产孢量呈下降趋势,且差异显著;接种不同浓度氯化钾处理的腐烂病菌对苹果树枝条发病程度随氯化钾浓度的升高而减轻,但病斑扩展速度和产孢体出现时间无明显的变化。说明氯化钾能抑制洛川苹果树腐烂病菌的生长、产孢和致病性。     

中国枣树干腐病菌(Botryosphaeria dothidea)群体遗传多样性的ISSR分析

【目的】从分子水平上揭示我国枣树干腐病菌群体的遗传特点,探究其遗传变异的规律。【方法】采用正交实验设计的方法,对影响ISSR-PCR扩增的4个因素进行研究。采用ISSR分子标记,对161株供试病原菌进行PCR扩增,通过Pop Gene和Arlequin软件对其群体遗传多样性和遗传分化情况进行分析。【结果】从40条ISSR引物中筛选到10条扩增多态性良好的引物,建立了适合枣树干腐病菌ISSR-PCR扩增的体系。采用该体系共在132个位点扩增出条带,其中多态性位点129个,多态性位点百分率为97.93%。Pop Gene结果显示,在物种水平上,供试病原菌的基因多样性指数和Shannon信息指数分别为0.256 3和0.397 8。分子方差分析表明,不同地理种群间的遗传变异占总变异量的7.94%,不同地理种群内的各自然种群间的遗传变异占总变异量的24.46%,自然种群内各分离株的遗传变异占总变异量的67.58%。聚类分析结果表明,在遗传相似系数为0.19时,可将9个病原菌自然种群划分为6个不同的聚类群。【结论】我国枣树干腐病菌(B.dothidea)群体具有丰富的遗传多样性,群体内多样性大于群体间多样性。自然种群内各分离株的遗传变异是我国枣树干腐病菌遗传变异的主要来源。我国枣树干腐病菌的各自然种群之间的遗传亲缘关系与其地理来源无明显相关性。     

内蒙古苹果树腐烂病病原菌鉴定

【目的】明确内蒙古地区引起苹果树腐烂病的病原种类。【方法】采用形态学结合分子生物学的方法,对内蒙古呼和浩特市周边果园的苹果腐烂病病菌进行分离、鉴定和致病力测定。【结果】从感病’金红’苹果树上分离到2株苹果腐烂病病菌,命名为QH1和QH2。QH1与QH2的致病力与分离自陕西杨凌的参照菌株YL1相同;菌落、分生孢子及子实体的形态特征均符合Cytospora属的特征;基于内转录间隔区、核糖体大亚基片段、转录延长因子和β微管蛋白4个基因的序列一致性和系统发育的分析证明,QH1属于Cytospora schulzer,QH2属于Cytospora mali。【结论】内蒙古呼和浩特地区苹果腐烂病病菌为C.schulzer和C.mali两种致病菌。     

苹果树腐烂病拮抗菌株的分离、筛选和鉴定

为筛选出对苹果树腐烂病有拮抗效果的生防菌,从内蒙古达茂草原采集土样,利用逐级稀释法分离菌株;以苹果树腐烂病病菌（Cytospora mali）QH2为供试病原菌,采用平板对峙、离体枝条法、抑菌谱,结合耐盐、耐紫外的稳定性测定筛选拮抗菌株,通过形态学、分子生物学和生理生化方法对拮抗菌株进行鉴定。结果表明,从6份土壤样品中分离纯化得到细菌288株、放线菌54株,经筛选得到DM5-29和DM3-18。DM5-29和DM3-18对C. mali QH2的皿内拮抗圈在1 cm以上,在金红和黄太平枝条上的防效分别在64%、77%以上,抑菌谱广,发酵液紫外照射120 min后仍对苹果树腐烂病具有一定的拮抗活性,可分别在5%NaCl与12%NaCl中生长,鉴定确定DM5-29为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）,DM3-18为萎缩芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus）,2个菌株对苹果树腐烂病均有良好的拮抗效果,抗逆性强、抑菌谱广,有应用潜力。     

梨树腐烂病拮抗真菌JK2的分离和鉴定

【目的】分离鉴定对梨树腐烂病具有拮抗活性的内生真菌,为梨树腐烂病生物防治提供新的资源菌。【方法】利用组织分离法从梨树腐烂病发病枝条中分离内生菌,通过平板对峙实验筛选对梨树腐烂病菌具有拮抗作用的菌株。结合形态学和分子生物学手段,分析和确定拮抗菌株的种属。利用离体梨树枝条鉴定拮抗内生真菌对腐烂病的防治效果。【结果】从梨树腐烂病发病枝条中分离获得一株对梨树腐烂病菌具有强烈拮抗活性的菌株JK2,抑制率超过95%。JK2上清液对梨树腐烂病菌同样具有抑制活性。经鉴定,菌株JK2为青霉属产紫青霉。离体梨树枝条鉴定结果显示,JK2对梨树腐烂病具有良好的防治效果。【结论】从梨树腐烂病发病枝条中分离获得一株具有拮抗活性的内生真菌JK2,该菌株是一株新的梨树腐烂病生防菌资源,具有潜在的应用价值。     

黑龙江省马铃薯黑痣病菌遗传多样性分析

以黑龙江省7个马铃薯种植区采集并分离得到的204个马铃薯黑痣病菌菌株为试材,采用SSR分子标记技术方法,研究了菌株遗传差异性,分析了黑龙江省马铃薯黑痣病菌遗传多样性。结果表明:使用选取的10对SSR引物对204个供试菌株进行扩增,其中10对引物均可对供试菌株扩增出多态性好、清晰和稳定的条带。通过聚类分析可知,遗传距离为2.577 09时划分为4个类群,各类群菌株分布复杂,表明黑龙江省马铃薯黑痣病病菌遗传类型复杂多样,菌株的遗传多样性与样品采集地无明显相关性。     

夏橙绿斑病原藻分离株的遗传多样性研究

从不同地域发生的夏橙绿斑病中分离出4株虚幻球藻,对其进行了表型研究,并利用ISSR技术对4株虚幻球藻分离株的遗传多样性进行了分析。结果表明:这4株虚幻球藻分离株的表型存在一定差异,并表现出多样性。从100个ISSR随机引物中筛选出9个引物,共扩增出条带98条,其中多态性条带数为57条,多态性比率为58.2%。虚幻球藻CS与虚幻球藻JA的遗传距离为0.1852,距离较近,遗传相似性较大,而其与另2株的遗传距离以及另2株之间的遗传距离均较远,遗传相似性较小,遗传分化明显,说明从夏橙绿斑病中分离获得的4株虚幻球藻分离株基因型也有差异,存在着遗传多样性。     

我国梨腐烂病病原菌的初步鉴定及序列分析

【目的】为了对我国梨腐烂病病原菌进行初步鉴定和序列分析,【方法】从我国15个省(市)梨产区采集腐烂病样品并观察其田间危害症状,通过组织分离法分离获得168份梨腐烂病菌分离株,从中选取72份进行单孢纯化,共获得79份梨腐烂病菌纯化分离株;观察在PDA、25℃黑暗条件下病原菌菌落形态以及产孢体形态,并对其在梨枝条上产生的分生孢子器徒手切片置显微镜下观察其结构特征和分生孢子形态;采用菌丝块接种法测定梨腐烂病菌在‘翠冠’梨离体枝条上的致病力。对部分菌株rDNA-ITS进行PCR扩增、测序,利用BLAST软件与GenBank数据库进行序列相似性分析,并用MEGA 4.1和邻接法构建系统发育树。【结果】根据梨腐烂病菌各分离株在PDA上的菌落形态特征可分为Ⅰ型和Ⅱ型两种菌落类型,不同梨腐烂病菌分离株在PDA上产生多种类型的产孢体,不同梨腐烂病菌菌株在离体梨树枝条上的致病力存在差异,我国梨腐烂病菌的rDNA-ITS核苷酸序列一致率为99.98%~100%,与苹果腐烂病菌分别聚在同一亚组的两个分支。【结论】我国梨腐烂病病原菌存在不同的菌落类型,其rDNA-ITS核苷酸序列分析显示均为V.mali var.pyri。     

东北地区甜瓜枯萎病菌遗传多样性分析

以44株来自东北不同地区甜瓜枯萎病株的尖孢镰孢菌为试材,采用SRAP分子标记技术,研究了甜瓜枯萎病菌的遗传多样性,以探究其遗传多样性与地理来源的关系。结果表明:从100对SRAP引物中筛选出多态性强、重复性好的8组SRAP引物组合,共扩增出53条条带,其中多态性条带53条,多态性比率为100%,平均每对引物扩增得到6.63条多态性条带。通过聚类分析,44株供试菌株相似系数为0.47~0.98,不同菌株之间的亲缘关系较近,遗传多样性较为丰富,但是仍存在遗传差异,且与地理来源没有明显的相关性。     

甘肃省苹果树腐烂病菌对甲基硫菌灵的抗药性测定

为明确甘肃省苹果树腐烂病菌对甲基硫菌灵的抗药性水平,采用菌丝生长速率法对甘肃省18个县、区的156个苹果树腐烂病菌菌株进行了敏感性测定。结果表明:甘肃省苹果树腐烂病菌对甲基硫菌灵的敏感性差异明显,供试菌株的EC_(50)值分布范围为0.543～23.225μg/mL,各县区平均EC_(50)值为0.651～11.977μg/mL,最低抗性水平为1.00,最高抗性水平达42.80;各地区平均抗性水平分布在1.20～22.07。156个菌株对甲基硫菌灵总抗性频率高达49.36%;不同县、区的苹果树腐烂病菌对甲基硫菌灵的抗性存在差异,其中甘谷县抗性频率高达100%,且有部分菌株处于高抗水平。表明甘肃省苹果树腐烂病菌对甲基硫菌灵产生了不同水平的抗药性。     

苹果种间杂种对苹果腐烂病感病性的遗传分析

【目的】为分析苹果实生树对苹果腐烂病抗病性的遗传规律,【方法】2010—2011年连续2 a用2个苹果腐烂病菌株对‘紫塞明珠’ב富士’的杂种实生树1 150株进行离体接种鉴定,采用次数分布分析法研究了苹果腐烂病抗病性遗传。【结果】结果表明,连续2 a接种2菌株主基因遗传率均在78.5%～85.5%。该实生群体对菌株03-8的感病性的变异由5个主基因位点分离所致,而对菌株xc56的感病性分离与4个主基因位点有关,且年份间表现稳定。【结论】离体枝条接种病原后,发病/不发病表现为质量性状遗传,发病对不发病为显性。感病的实生树接种后发病的病斑长度表现为多基因数量性状遗传。     

贺兰山紫蘑菇遗传多样性RAPD分析

应用RAPD技术对43个贺兰山紫蘑菇(Cortinarius)属菌株进行遗传多样性分析。结果表明,在供试的17条RAPD随机引物中,有7条可扩增出清晰、稳定的DNA条带,利用筛选出的7条引物进行RAPD扩增,共得到79条清晰的DNA条带,其中68条多态性片段占总扩增片段的86.1%;聚类分析表明,在相似系数0.63水平时,供试的43个菌株被分为紫红丝膜菌(C.rufo-olivaceus)和蓝丝膜菌((C.caerulescens)两个组群,同时紫红丝膜菌种内41个样品间的差异较显著,其中种内最大相似系数为0.956,最小相似系数为0.515;在相似性系数为0.68时,可将紫红丝膜菌的41个样品分为7类。研究结果表明RAPD技术可以有效地区分紫蘑菇菌株并分析种内的遗传多样性。     

苹果树腐烂病发生规律及防治措施

苹果树腐烂病又被称为烂皮病、臭皮病,是一种在我国分布广泛、危害严重的真菌性病害。近些年来,苹果树腐烂病在我国的苹果主要产区普遍发生,并产生了严重的危害。等对我国十个果品主产区的147个果园进行了苹果树腐烂病的发病调查,发现十个果品主产区苹果树腐烂病总发病株率为52.7%,其中河北省的发病株率为42.3%。     

杏鲍菇多孢分离菌株ISSR、RAPD分子标记及体细胞不亲和性分析

通过杏鲍菇多孢分离菌株的ISSR、RAPD分子标记和体细胞不亲和性分析,体细胞不亲和性分析得出子代杏1、杏3、杏4与出发菌株湘杏98有拮抗线,杏1、杏2、杏3、杏4四株子代均有明显的拮抗线。16条ISSR引物和19条RAPD引物分别扩增出99、154个条带,多态性条带分别占48.48%、61.00%;相似系数变异范围分别为0.63~0.86、0.57~0.83。湘杏98、杏2、杏3在2种标记的聚类结果上存在差异。体细胞不亲和性分析从表型上(拮抗线有无)反应了菌株的遗传变异。RAPD标记遗传相似系数小于ISSR标记,表明ISSR标记更适合亲缘关系较近的种群间遗传多样性分析。     

利用rep-PCR技术研究我国9省柑橘溃疡病菌遗传多样性

采用rep-PCR技术,对从我国9省(区)收集、分离、筛选的18株柑橘溃疡病菌株进行遗传多样性研究,并与A菌系标准菌株进行UPGMA聚类分析和相似性分析。结果表明,使用引物BOXA1R扩增供试菌株,可得到不同的条带31条。以遗传相似距离0.4划分,供试菌株可划分为5个簇;以遗传相似距离0.5划分,供试菌株可划分为4个簇;15个菌株与标准A菌株遗传相似距离较近,菌株CJX、CZJ1、CGDN2与标准A菌株遗传相似距离较远;来自同一省的少数溃疡病菌株的遗传相似性也较低,说明我国柑橘溃疡病菌基因组存在丰富的遗传多样性。     

北京地区杏鲍菇菌株遗传多样性的RAPD分析

对北京地区24个杏鲍菇栽培品种的遗传多样性进行RAPD分析,选取了40条RAPD随机引物对供试的24个杏鲍菇菌株的基因纽DNA进行PCR扩增,最终成功筛选出9条RAPD引物,共扩增出142条稳定、清晰的DNA条带;聚类分析结果表明,在相似系数为0．850的水平时,可将24个供试菌株分为5大类;主坐标分析结果与聚类分析基本一致;RAPD分子标记技术成功的表明了北京地区杏鲍菇菌株的遗传多样性,为杏鲍菇的遗传育种研究奠定基础。     

RAPD和SRAP分子标记在真姬菇菌种鉴定中的应用

利用RAPD及SRAP分子标记技术对从国内外收集到的12个真姬菇菌株进行遗传多样性分析.结果表明,20条RAPD引物共扩增出多态性条带285条,18对SRAP引物共扩增出多态性条带176条.在相似系数0.800水平时,RAPD和SRAP分子标记分别将12个真姬菇菌株分为5个和6个类群.两种方法均适用于真姬菇种内鉴定,而SRAP标记较RAPD标记稳定性好,更适于真姬菇的种内鉴定.     

姬松茸种质资源的遗传多样性研究

为分析不同地区来源的姬松茸菌株亲缘关系,为姬松茸资源保藏与利用提供理论支撑,利用RAPD、ISSR和酯酶同工酶(EST)技术对收集的11个姬松茸菌株进行遗传多样性分析,并通过UPMGA亲缘关系树状图对其进行聚类分析.结果表明,10条RAPD引物共扩增出110条DNA片段,多态性比例为76.9％;12条ISSR引物共扩增...     

中韩野生软枣猕猴桃种质资源遗传多样性分析

【目的】利用RAPD分子标记技术研究国内长白山地区和韩国由来野生软枣猕猴桃种质资源的遗传多样性。【方法】以长白山地区和韩国由来的28个野生软枣猕猴桃的叶片为材料,利用RAPD分子标记技术进行了遗传多样性分析,并明确了它们之间的亲缘关系。【结果】利用131个随机引物进行PCR,从中筛选出了多态性高、重复性好且扩增条带清晰的24个引物。24个引物在28个野生软枣猕猴桃中共扩增出191条带,其中多态性条带为186条,占97.4%。平均每个引物产生7.75个多态性条带。应用NTSYSpc 2.10e软件进行遗传一致度和遗传距离分析后用UPGMA方法进行聚类分析。28个野生软枣猕猴桃种质资源之间的遗传距离为0.020 2~0.934 2。遗传距离0.58时可将28个野生种划分成2大类。在遗传距离最小的0.02处,有蛟河2号和3号2个野生种,其RAPD分子标记相似性为98%。【结论】来自不同地理区域的野生软枣猕猴桃之间存在较高的遗传多样性,而在同一地理区域内遗传多样性较低。韩国野生软枣猕猴桃之间的遗传多样性较低,且与二道白河、汪清、左家等地的野生软枣猕猴桃亲缘关系较近。即具有同一地理区域聚类趋势,且不同地理区域间存在较高的遗传多样性。