甘蓝型油菜微卫星标记PAGE及银染的高效检测

一方面对甘蓝型油菜微卫星标记（SSR）的小垂直板聚丙烯酰胺变性凝胶电泳体系做了两点优化：①在制胶方面,确定了在不同温度下的最佳催化剂使用量,可保证顺利凝胶和不缩胶,②在保证电泳带型质量的前提下适当提高电泳电压,可缩短电泳时间,提高效率;另一方面对PAGE胶中DNA的银染方法做了简化：省略固定处理,简化为制胶前用乙醇擦净玻璃板、用纯水漂洗胶片后银染及降低染色液的AgNOs浓度,该简化可减少操作步骤,显著提高效率,并可节约药品。     

甘薯AFLP扩增产物的PAGE胶快速银染方法

对目前6种常用的PAGE银染方法的成本、时间及染色效果等进行比较.结合笔者所在实验室的具体情况,用简易强碱法对甘薯AFLP扩增产物进行银染,分析银染过程中漂洗时间、次数,银染用水对银染效果的影响,建立了甘薯AFLP扩增产物的PAGE胶快速银染方法,可以批量生产银染AFLP扩增产物,银染效果较好.     

大豆SSR标记PAGE银染方法的改进

比较改进后的两种最常用的银染方法Bassam和Sanguinetti,建立了一种更加行之有效、简便快捷的应用于大豆SSR标记的PAGE银染检测方法。     

小麦基因组DNA快速提取及SSR标记PAGE的银染检测

为了提高SSR-PCR速率,降低试验成本,以8份抗条锈小麦幼苗为材料,比较分析了两种DNA提取方法(CTAB法和SDS法)以及两种SSR标记PAGE银染法(Sanguinetti银染法和Bassam银染法).结果表明:用CTAB法和SDS法均可获得质量较好的DNA,但CTAB法花费的时间较长,提取效率低(在相同条件下SDS法提取速度约为CTAB法的2倍);Sanguinetti银染法染色背景较浅、条带清晰、分辨率高、具有较高的多态性检出率,并且在速度上优于Bassam法,仅需30多min,而Bassam银染法染色步骤烦琐,对试剂质量和水质要求均较高,且未能染色成功.     

一种简便快速高效的DNA银染方法

以葡萄叶片为试材,对变性聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)中DNA银染及显色方法进行了改良,改良后的方法省略了预处理、固定、用试剂终止显色过程等步骤。使用改进的显带方法得到的PAGE胶图片,DNA带型和背景具有更高的对比度和分辨率;同时操作简单,耗时短,使用试剂少。改良方法使PAGE中DNA银染显色全程时间缩短至15~20 min,且效果较好,可较好的替代常规的银染方法。     

用银染方法分析RAPD产物

本文介绍了采用聚丙烯酰胺凝胶分离ＲＡＰＤ产物，以及凝胶银染技术。与传统的溴化乙锭染色法相比，银染法染色灵敏而清晰，具有广泛的推广应用价值。     

微卫星DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染技术的探讨

采用PCR一非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、硝酸银染色检测DNA片段。结果表明,该方法检测DNA具有灵敏度高、背景浅、条带清晰等突出特点。聚丙烯酰胺凝胶电泳后采用银染技术分析,方便快捷,易长期保存,且减小了对人体、环境的毒害作用。     

微卫星DNA非变性PAGE银染法的分析探讨

微卫星DNA非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE),是一种常用的DNA检测手段,具有很好的分离微小差异DNA片段的能力,而银染法使该方法得到了广大科研工作者的青睐,但是,在染色过程中,常可能出现一些问题,令结果的判断难以达到满意的效果.为此,对该方法进行了一系列的分析和探讨.     

一种简易银染程序的确定与优化

在对5种银染方法进行比较后发现改进的聚丙烯酰胺银染方法效果最好而且简单经济.通过对改进方法进行不同的温度和pH以及试剂的优化试验,最终确立了一种较为简单,快速而且效果不错的银染程序.     

甘蔗AFLP标记和SSR标记的PAGE胶快速银染检测方法

银染方法是一种重要的DNA染色法.其原理是利用银离子和核苷酸结合,在碱性环境下甲醛使银离子还原从而使凝胶中的DNA片段得以显现[1,2].     

银染聚丙烯酰胺凝胶电泳技术体系的优化

【目的】针对银染PAGE实验中常出现的背景颜色深、条带弥散、凝胶变形及条带不整齐等问题进行归纳总结并提出优化方法。【方法】以甘蓝型油菜基因组DNA为研究对象,通过PAGE电泳后银染并调整试剂配方、实验条件,筛选出适合实验的技术体系。【结果】甲醇浓度、电压稳定性、电泳温度、气泡等显著影响实验结果。甲醛浓度过高(1.25%)时,虽所需染色时间短,但凝胶背景深;甲醛浓度过低(0.001 25%)时,背景浅但条带淡,需要长时间染色;电压不稳定会造成条带弥散;电泳温度过高,导致凝胶变形,条带弯曲;凝胶中的气泡会扰乱DNA条带的形状;NaOH浓度在0.875%~1.375%,染色结果无明显差异。【结论】甲醛用量4 mL(1%)、保持稳定电压、在冰浴中电泳、制胶时及时赶走所有气泡,可得到凝胶背景浅、条带清晰且正常的结果。     

SSR标记变性聚丙烯酰胺凝胶电泳方法改进

[目的]改良SSR标记变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)技术,提高大规模SSR分子标记分析的工作效率。[方法]在利用SSR标记构建中国春/兰考大粒F2群体遗传图谱的基础上,对变性PAGE点样方法进行改进,并对中国春/兰考大粒筛选的122对差异引物进行组合分析。[结果]试验表明,引物扩增条带特异性强、覆盖范围不大即可采用两次点样法分析;两次点样和单次点样的凝胶扩增条带均清晰可辨;分析相同数量的样品,两次点样法较单次点样法节约了41%的试验时间,节约了50%的试剂用量。[结论]两次点样法简化了试验步骤,节约了试验成本,加速了试验进程,更适用于遗传作图。     

2种方法银染的AFLP片段再扩增效果比较及改进

Bassam银染法和Sanguinetti银染法是AFLP标记最常用的检测方法.本研究比较这2种方法银染的AFLP条带再扩增效果的差异,发现Bassam法银染的AFLP片段再扩增效率达到100%,而用同样的PCR条件,sanguinetti法银染的AFLP片段不能被扩增,限制了Sanguinetti法在AFLP标记分析中的应用.为提高Sanguinetti法银染的AFLP片段再扩增效率,对Sanguinetti法银染的AFLP片段回收和再扩增条件进行了改进.通过增加Sanguinetti法显色后的胶板漂洗次数、延长漂洗时间、改变AFLP条带浸泡溶液、增加浸泡液体积和增加PCR循环次数,成功地将Sanguinetti法银染的AFLP条带的再扩增效率提高到100%,从而解决了San-guinetti银染法应用的限制因素.     

蛋白质凝胶电泳的高灵敏度染色法——复合银染

本实验以牛血清白蛋白为样品进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,然后用考马斯亮兰Ｒ－２５０和银染法分步染色。这种复合银染法的灵敏度比单独使用银染法提高约１０００倍,比单独使用考马斯亮兰Ｒ－２５０染色法提高约１０６倍。它在１ｍｍ厚的聚丙烯酰胺凝胶上至少可检测出５ｐｇ／ｍｍ２的蛋白质。在没有放射性防护设施的任何一个生物实验室中,采用复合银染法基本上能够达到或接近放射性标记检测的灵敏度。相比之下,它不仅省去了繁琐的各式各样的标记过程及其放射性污染,同时还具有很高的灵敏度,因此复合银染具有广泛的应用性。     

几种SDS-PAGE凝胶电泳染色方法的比较

[目的]对几种SDS-PAGE凝胶电泳染色方法进行比较。[方法]从凝胶背景颜色、染色时间及灵敏度的角度对6种SDS-PAGE凝胶电泳快速染脱色方法进行比较研究,并对适用于椰子和油棕总蛋白质SDS-PAGE凝胶电泳的实用方法进行总结。[结果]方法 F最快速,条带清晰,染料及试剂都较少,是一种经济、快速、安全、实用的染色方法,整个过程仅需1 h左右。[结论]试验比较了几种SDSPAGE凝胶电泳染色方法,对进一步开展椰子和油棕蛋白质组学研究具有重要意义。     

聚丙烯酰胺凝胶电泳检测致病疫霉菌SSR标记方法改良

[目的]改进聚丙烯酰胺凝胶电泳检测致病疫霉菌SSR标记方法。[方法]以2009年在宁夏固原地区采集的马铃薯晚疫病样为试验材料,提取其DNA,PCR扩增,并将其产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳。[结果]采用12%聚丙烯凝胶电泳检测引物D13、G11,8%聚丙烯凝胶电泳检测引物PI4B、PI63、SSR4,最后采用0.1%硝酸银染色,取得了比较理想的电泳及染色效果。[结论]该研究建立的适用于致病疫霉菌SSR标记的电泳和染色技术方法具有检测灵敏度高、操作简单、获得的条带清晰等特点,是一种行之有效、简便快捷的检测方法。     

小麦春溶蛋白酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳（A-PAGE）方法的优化与改良及其应用

为了形成一套适合实际情况的小麦醇溶蛋白酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳(A-PAGE)方法和谱带分析技术;依据国际种子检验协会1986年公布的标准小麦醇溶蛋白A-PAGE方法,结合国内实验室的实际情况,摸索出了适合中国试剂和仪器的小麦醇溶蛋白A-PAGE的改良方法.该方法克服了标准方法中的胶韧性差、剥胶困难、分辨率不高、谱带识别繁琐、实验效率较低的限制.该方法适合中国小麦品种纯度的快速鉴定、血缘关系分析、遗传育种种质材料的选择等.     

几种SDS—PAGE蛋白质染色方法的比较

本文在对已报道的三种不同的SDS—PAGE蛋白质染色方法加以改进的基础上,对各测定方法的灵敏度、重复性及有关影响染色的因素进行了比较和讨论。结果表明,改良的Pharmacia公司银染色法所得到的结果最好,适合作为实验室常规检测手段。