6种水产常用抗生素对鳗弧菌的抗菌后效应研究

为了解水产养殖业常用抗生素对鳗弧菌的抗菌后效应,本研究采用试管二倍稀释法测定乳酸恩诺沙星、乳酸诺氟沙星、盐酸沙拉沙星等6种抗生素对鳗弧菌的最小抑菌浓度(MIC);采用菌落计数法测定6种抗生素的抗菌后效应(PAE)。结果显示,6种抗生素在1、2、4倍MIC时对鳗弧菌的PAE分别为:0.17±0.11,1.45±0.21,1.81±0.33(乳酸恩诺沙星);0.54±0.11,0.72±0.12,1.17±0.22(乳酸诺氟沙星);0.52±0.19,0.72±0.25,1.13±0.22(盐酸沙拉沙星);0.46±0.16,0.86±0.16,1.88±0.30(盐酸二氟沙星);0.68±0.21,1.42±0.34,1.91±0.20(盐酸恩诺沙星);0.67±0.13,0.79±0.12,1.25±0.17(烟酸诺氟沙星)。6种抗生素对鳗弧菌均表现出不同程度的抗生素后效应,并随着抗生素浓度的增加,PAE的时间也延长,呈药物剂量依赖模式。     

动物用氟喹诺酮类药物的研究进展概况

喹诺酮类(Quinolones,Qs)抗菌药自20世纪60年代萘啶酸(Nalidixic acid)(第一代喹诺酮)问世以来,至今已发展到第四代.有关氟喹诺酮类药物合成和报道有数篇,但开发应用最成功的该类兽医药物包括胺氟沙星、环丙沙星、单诺沙星、恩诺沙星、麻保沙星、诺氟沙星、倍诺沙星、奥比沙星、诺氟沙星尼古丁、沙拉沙星、二氟沙星、洛美沙星、倍氟沙星、氟甲喹、恶喹酸等;其它被使用在动物上的人用氟喹诺酮类药物还有氧氟沙星、依诺沙星、司帕沙星、替马沙星、托氟沙星等;尚在开发中的动物专用产品有宾氟沙星、依巴沙星、普马沙星等.     

分散固相萃取法结合高效液相色谱-串联质谱法测定禽蛋中喹诺酮类兽药残留量

试验建立了一种分散固相萃取前处理技术结合高效液相色谱-串联质谱法检测禽蛋中9种喹诺酮类(丹诺沙星、恩诺沙星、沙拉沙星、环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、依诺沙星、培氧沙星、双氟沙星)兽药残留的分析方法。样品以乙腈、EDTA-Mcllvaine和乙酸为提取试剂、无水氯化钠为脱水剂、C18为吸附剂进行净化,以甲醇-0.1%甲酸水为流动相,反相C18色谱柱分离,正离子多反应监测模式进行质谱分析。结果:9种喹诺酮在1.0~200μg/kg范围内具有良好的线性关系,相关系数(r~2)均在0.991以上;检出限范围为0.07~0.20μg/kg,定量限范围为0.22~0.67μg/kg;平均回收率介于73.5%~92.9%之间,相对标准偏差(RSD)低于11.8%。结果表明,该方法适合于检测禽蛋中喹诺酮类药物残留量。     

胶体金免疫层析法快速检测牛奶中氟喹诺酮类药物残留

利用胶体金标记的抗氟喹诺酮类单克隆抗体制备了氟喹诺酮类胶体金免疫检测试纸条。该试纸条对牛奶中恩诺沙星、沙拉沙星、双氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、培氟沙星、氟甲喹、达氟沙星检测限为20g／L。对依诺沙星、恶喹酸检测限为40g／L,检测时间5min,与三聚氰胺、磺胺类药物、氯霉素、大环内酯类药物、氨基糖苷类药物、四环素类药物在500g／L浓度时,不发生交叉反应。试纸条的检测结果与仪器检测结果一致,重复性较好,在4℃条件下可以保存12个月,所以该研究制备的氟喹诺酮类药物残留检测试纸条可用于牛奶中11种氟喹诺酮类药物残留。     

维氏气单胞菌TH0426株ompW基因的克隆、生物信息学分析及其原核表达

为研究维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)ompW基因的生物信息学特性及相关功能,试验克隆了维氏气单胞菌ompW基因片段,通过生物信息学软件分析其编码蛋白的理化性质、疏水性、信号肽、跨膜区、二级及三级结构,并对其进行原核表达及反应原性检测。结果显示,ompW基因全长594 bp,编码197个氨基酸,TH0426株ompW基因与A.veronii B5B6株属于同一分支;该蛋白属于外膜蛋白,在19～29位氨基酸之间有一个典型的疏水区域,不存在跨膜区、信号肽,二级结构以β折叠与无规则卷曲为主。Western blot结果显示OmpW重组蛋白能与鼠抗维氏气单胞菌(A.veronii)TH0426株血清发生特异性结合。综上,OmpW重组蛋白具有一定的免疫原性,为进一步研究A.veronii疫苗奠定基础。     

液相色谱-串联质谱法测定饲料中氟喹诺酮类药物

本试验建立了饲料中氟喹诺酮类药物添加剂的液相色谱-串联质谱检测方法 。样品经含1%甲酸的甲醇溶液提取,HLB固相萃取柱净化,0.22μm滤膜过滤后用液相色谱-串联质谱检测法测定,外标法定量。该法适用于配合饲料、浓缩饲料、预混合饲料和鱼饲料等饲料中盐酸环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、甲磺酸达氟沙星、盐酸沙拉沙星含量的测定。6种药物的检测限为60.0μg/kg,定量限为200.0μg/kg。该方法步骤简单、易于操作,准确度、精密度和灵敏度高,符合我国对饲料中氟喹诺酮类药物含量检测要求。     

交体金免疫层析法快速检测牛奶中氟喹诺酮类药物残留

利用胶体金标记的抗氟喹诺酮类单克隆抗体制备了氟喹诺酮类胶体金免疫检测试纸条。该试纸条对牛奶中恩诺沙星、沙拉沙星、双氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、培氟沙星、氟甲喹、达氟沙星检测检测限为20ug／L;对依诺沙星、恶喹酸检测检测限为40ug／L,检测检测时间5min：与三聚氰胺、磺胺类药物、氯霉素、大环内酯类药物、氨基糖苷类药物、四环素类药物在500μg／L浓度时,不发生交叉反应。试纸条的检测结果与仪器检测结果一致,重复性较好,在4℃条件下可以保存12个月,所以本研究制备的氟喹诺酮类药物残留检测试纸条可用于牛奶中11种氟喹诺酮类药物残留的检测。     

胶体金免疫层析法快速检测牛奶中氟喹诺酮类药物残留

利用胶体金标记的抗氟喹诺酮类单克隆抗体制备了氟喹诺酮类胶体金免疫检测试纸条.该试纸条对牛奶中恩诺沙星、沙拉沙星、双氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、培氟沙星、氟甲喹、达氟沙星检测,检测限为20μg/L;对依诺沙星、恶喹酸检测,检测限为40μg/L.检测时间为5min.与三聚氰胺、磺胺类药物、氯霉素、大环内酯类药物、氨基糖苷类药物、四环素类药物在500μg/L浓度时,不发生交叉反应.试纸条的检测结果与仪器检测结果一致,重复性较好,在4℃条件下可以保存12个月.本研究制备的氟喹诺酮类药物残留检测试纸条可用于牛奶中11种氟喹诺酮类药物残留的检测.     

三种氟喹诺酮类药物体外抗家蚕病原菌活性的对比实验

为筛选新的抗生素替代氯霉素防治家蚕细菌病 ,采用试管二倍稀释法研究了盐酸诺氟沙星、盐酸蒽诺沙星、盐酸环丙沙星 3种药物对家蚕黑胸败血病菌、苏云金杆菌的体外抗菌活性。盐酸诺氟沙星对黑胸败血病菌和苏云金杆菌的最低抑菌浓度MIC(mg/L)分别为 0 78和 0 19,最低杀菌浓度MBC分别为 3 12 5和 0 78。盐酸蒽诺沙星对黑胸败血病菌和苏云金杆菌的MIC(mg/L)分别为 0 78和 0 39,MBC为 3 12 5和 12 5。盐酸环丙沙星对黑胸败血病菌和苏云金杆菌的MIC(mg/L)分别为 0 78和 0 39,MBC为 12 5和 6 2 5     

单诺沙星对大肠杆菌和金葡球菌的体外抗茵后效应

采用菌落计数法测定了单诺沙星在三种不同浓度下对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌 (金葡球菌 )的体外抗菌后效应 (PAE)。当药物浓度为 0 .5MIC、2MIC、4MIC时 ,对大肠杆菌的PAE值为 (0 .6 4 6 4± 0 .0 2 94 )h、(1.2 0 77± 0 .0 2 84 )h、(1.6 5 2 9± 0 .0 4 96 )h ;对金葡球菌的PAE值为 (0 .5 6 6 0± 0 .0 0 75 )h、(1.174 6± 0 .0 0 5 7)h、(1.4 913± 0 .0 2 5 7)h。这表明单诺沙星对大肠杆菌、金葡球菌均有不同程度的较强的PAE ,且PAE值与药物浓度呈正相关     

胶体金法快速检测猪尿中氟喹诺酮类药物的残留

本文采用胶体金标记的抗氟喹诺酮类单克隆抗体构建出一款试纸条,它可以特异性地检测猪尿中氟喹诺酮类药物的残留。通过透射电子显微镜进行表征,确定所制备的胶体金颗粒平均直径为40nm;通过紫外一分光光度计扫描得到的胶体金氟喹诺酮单克隆抗体最大吸收波长为524 nm。浓度为1 mg/mL的该单克隆抗体最佳加入量为10μL。用该方法制备的试纸条,可以检测猪尿中恩诺沙星、沙拉沙星、双氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、培氟沙星、依诺沙星和恶喹酸等9种氟喹诺酮类药物,检出限为20μg/L,在37℃时可以保存160天左右,在4℃时可以保存24个月。     

五种喹诺酮类药物体外诱导鸡白痢沙门菌耐药与交叉耐药的研究

采用萘啶酸、恩诺沙星、诺氟沙星、环丙沙星、加替沙星等5种喹诺酮类药物进行了鸡白痢沙门菌体外诱导耐药试验,观察和分析了细菌耐药性发展进程及药物间的交叉耐药情况。鸡白痢沙门菌标准株C79-3以药物浓度递增法分别在5种药物的次抑菌浓度下诱导传代至30代,每10代进行药敏试验检测耐药性,并对诱导株诱导前和诱导30代后的药物最低抑菌浓度(MIC)进行测定和比较。结果:随着诱导代次增加,诱导株对诱导药物的敏感性逐渐下降,至30代时所有诱导株均对诱导药物产生耐药。不同药物诱导耐药的进程有一定程度的差异,萘啶酸最易诱导耐药,其次为恩诺沙星、环丙沙星和加替沙星,最后为诺氟沙星。环丙沙星诱导株的环丙沙星MIC增幅最大,萘啶酸诱导株的萘啶酸MIC值最高。5种药物间存在不同程度的交叉耐药现象,恩诺沙星、诺氟沙星和环丙沙星之间为双向交叉耐药,而萘啶酸与恩诺沙星、诺氟沙星、环丙沙星和加替沙星间以及加替沙星与恩诺沙星、诺氟沙星和环丙沙星间为单向交叉耐药。此外,药物间的交叉耐药与菌株的耐药水平密切相关。     

优化高效液相色谱法对水产品中4种氟喹诺酮类药物残留的检测

为同时测定水产品中4种氟喹诺酮类药物(环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星、沙拉沙星)的残留量,对高效液相色谱法进行优化,样品采用酸化乙腈提取,正己烷脱脂。结果:采用流动相2 mL进行洗脱,流动相乙腈∶四丁基溴化铵溶=7∶93,4种氟喹诺酮类药物在0.001~0.1μg/mL线性关系良好,相关系数均0.999;在10~40μg/kg加标浓度下,回收率为72.40%~83.68%,相对偏差(RSD)为1.30%~6.94%。结果表明:优化后的方法回收率高,重复性和分离效果好,能够用于水产品中氟喹诺酮类药物残留检测。     

维氏气单胞菌TH0426株主要黏附素基因的克隆、生物信息学分析及原核表达

为研究维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)主要黏附素Aha1基因的生物信息学特性,本试验克隆了A.veronii TH0426主要黏附素Aha1基因片段,构建了Aha1基因序列进化树,通过生物信息学软件分析其编码蛋白的理化性质、疏水性、信号肽、跨膜区、二级结构及三级结构,并进行了Aha1蛋白的原核表达及免疫原性的检测。结果显示:Aha1基因全长1 038bp,编码345个氨基酸。TH0426株Aha1与A.veronii属同一分支,具有信号肽,跨膜区,二级结构以β折叠、无规则卷曲为主。SDS-PAGE及Western blot分析结果显示,Aha1蛋白在大肠杆菌中成功表达且其能被鼠抗黏附素阳性血清识别,表明Aha1蛋白具有一定的反应原性。以上结果为进一步研究Aha1蛋白的结构功能Aha1基因工程亚单位疫苗的制备奠定了基础。     

氟喹诺酮类药物的毒性研究概况

自从１９７９年合成氟喹诺酮类药物以来 ,该类药物发展十分迅速 ,在人医和兽医临床中应用十分广泛。人医临床代表药物主要有 :诺氟沙星（氟哌酸）、培氟沙星（甲氟哌酸）、依诺沙星（氟啶酸）、洛美沙星（氟嗪酸）、氟罗沙星（多氟哌酸）、二氟沙星（双氟哌酸）、氨氟沙星（氨氟哌酸）、左氟沙星、乙氨氟哌酸（ＣＩ -９３４）和托氟沙星（多氟啶酸）等 ,由于高效、广谱、低毒、口服吸收迅速、组织分布广等特点 ,在１９９５年名列世界处方药市场第二位的抗感染药物中 ,氟喹诺酮类药物占首位。兽医临床专用的氟喹诺酮类药物有恩诺沙星、单诺沙…     

5种抗菌药物对嗜水气单胞菌的体外抗菌后效应研究

为比较研究水产养殖中几种常见抗菌药物对嗜水气单胞菌(A.hydrophila)的体外抗菌后效应(PAE),本研究选取5种典型的抗菌药物(恩诺沙星、盐酸多西环素、诺氟沙星、氟苯尼考以及甲砜霉素),采用常量肉汤稀释法测定它们对A.hydrophila的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),并在0、1/2 MIC、1 MIC、2 MIC和4 MIC药物浓度下进行PAE诱导,再用活菌计数法测定并记录细菌生长曲线,计算PAE值。结果显示,5种抗菌药物的MIC和MBC分别为0.016和0.023μg/m L(恩诺沙星),0.250和0.500μg/m L(盐酸多西环素),0.250和0.500μg/m L(诺氟沙星),1和4μg/m L(氟苯尼考)以及2和4μg/m L(甲砜霉素);5种抗菌药物在不同浓度下均有一定的PAE,其中盐酸多西环素最长可达2.84 h。本研究结果表明,这5种抗菌药物对A.hydrophila均有相当的PAE,并且在一定范围内呈浓度依赖性。提示在治疗鱼病及临床给药时,可以考虑PAE的独有特性,延长给药间隔,科学用药。     

盐酸沙拉沙星胶囊对家蚕细菌性败血病的防治研究

盐酸沙拉沙星胶囊是以兽用喹诺酮类药物盐酸沙拉沙星为主要成分制成的蚕用抗菌药剂。盐酸沙拉沙星胶囊对家蚕细菌性败血病的防治效果试验表明,用100mg/L盐酸沙拉沙星药液给感染卒倒芽孢杆菌的4龄起蚕连续添食3d(第1天添食24h,第2、3天每天添食6h),对家蚕败血病的防治效果与用500mg/L盐酸诺氟沙星药液、125mg/L盐酸环丙沙星药液添食的防治效果无明显差异(P0.05);用400mg/L盐酸沙拉沙星药液给感染灵菌的4龄起蚕连续添食3d(添食方法同上),对家蚕败血病的防治效果明显优于用500mg/L盐酸诺氟沙星药液、250mg/L盐酸环丙沙星药液添食的防治效果(P0.05),与用500mg/L盐酸环丙沙星药液添食的防治效果无明显差异(P0.05)。盐酸沙拉沙星对卒倒芽孢杆菌、灵菌的最低抑菌浓度分别为1.25、5μg/mL,最低杀菌浓度分别为5、10μg/mL。分别给4龄、5龄家蚕添食400、800、1200、2000mg/L的盐酸沙拉沙星药液,对家蚕的生长发育、茧质和丝质均未见明显不良影响(t检验,P0.05),且不存在明显的剂量-反应关系。分别给5龄第4天家蚕添食剂量为5、10、20mg/kg的盐酸沙拉沙星后,药物在蚕体内吸收良好,血药浓度-时间曲线符合一级吸收的一室开放式模型。研究结果显示,盐酸沙拉沙星胶囊对卒倒芽孢杆菌或灵菌感染引发的家蚕细菌性败血病具有明显的防治效果,并且对家蚕安全无害。     

禽大肠杆菌DNA旋转酶活性改变与其对氟喹诺酮类药物耐药性的关系研究

用亚ＭＩＣ（药物最低抑菌浓度）连续递增式传代培养法获得了禽大肠杆菌（血清型为Ｏ１、Ｏ２、Ｏ７８）对氟喹诺酮类药物（ＦＱｓ）—诺氟沙星（ＮＦＬＸ）、依诺沙星（ＥＮＸ）、环丙沙星（ＣＰＬＸ）稳定的高度耐药菌株（ＭＩＣ提高≥１２８倍）,通过对耐药菌株和敏感菌株ＤＮＡ旋转酶的分离、提取及活性检测,并进行统计学分析比较,研究ＤＮＡ旋转酶活性改变与细菌耐药的关系,结果表明：禽大肠杆菌对氟喹诺酮类药物产生耐药的一个重要因素为其ＤＮＡ旋转酶的活性改变。     

金黄色葡萄球菌临床分离耐氟喹诺酮类药物株的gyrA和grlA基因突变

对 5株临床分离的耐氟喹诺酮类药物的金黄色葡萄球菌 (MIC值范围 :4～≥ 12 8mg/ L) ,提取各细菌染色体DNA,对 gyr A和 grl A基因进行 PCR扩增 ,产物与 p MD18- T载体连接 ,转化至大肠杆菌 JM10 9感受态细胞 ,筛选阳性克隆 ,测序。序列分析结果表明 ,5株菌均发生了基因突变。突变位点 grl A:Ser80 (TCC)→ Phe(TGC) ,Ser80 (TCC)→ Tyr(TAC) ;gyr A:Ser84 (TCA)→ L eu(TTA )、Ser84 (TCA)→ Ala(GCA)、Glu88(GAA)→ L ys(AAA) ,其中 2株对氟喹诺酮类药物的 MIC值低 (4～ 6 4 m g/ L) ,均发生 grl A单一点突变 ,其余 3株在 gyr A和 grl A上产生多突变位点 ,且对氟喹诺酮类药物的 MIC值较高 (8～≥ 12 8mg/ L )。说明单一的点突变只能引起低水平或中等水平的耐药 ,高水平的耐药需要多位点的突变。 5株耐药菌株均发生 grl A Ser80→ Tyr(Phe)点突变 ,提示环丙沙星、诺氟沙星等氟喹诺酮类药物作用于金黄色葡萄球菌的首要靶酶是拓扑异构酶 Iv     

氟喹诺酮类药物对草鱼常见病原菌的体外抑菌试验

为有效治疗草鱼常见细菌性疾病,指导临床合理用药,本试验选用了氟喹诺酮药物乳酸诺氟沙星、盐酸环丙沙星、甲磺酸培氟沙星进行了对草鱼常见病原菌的体外抑菌试验。3 种氟喹诺酮药对荧光假单孢菌和肠型点状产气单孢菌的最小抑菌浓度(MIC)分别为0.625、1.25、1.25μg/m l和5、1.25、1.25μg/m l,而对照药硫酸链霉素的MIC 均大于1000μg/m l。结果表明了氟喹诺酮药物具有很强的抗菌能力,与硫酸链霉素相比抗菌效果更为显著。