牛成纤维细胞生长因子受体3(FGFR3)基因对日本褐牛软骨发育异常性侏儒症的影响

成纤维细胞生长因子受体 3(FGFR3)是成纤维细胞4个不同跨膜酪蛋白激酶受体之一。它是软骨骨化的负调控因子 ,FGFR3的突变体已在软骨发育异常的病人身上检测到。最近 ,将与日本褐牛侏儒症相关的位点定位到牛 6号染色体端粒区 ,该区域与 FGFR3基因紧密相邻。因此 ,FGFR3成为这种侏儒症的定位候选基因。本研究中 ,作者分离克隆了包括 FGFR3基因全部编码区的 c DNA。通过对软骨发育正常和异常牛核苷酸序列的比较分析 ,发现它们的氨基酸序列无特异性差别。进一步利用放射杂交定位的方法对 FGFR3进行精细定位 ,结果FGFR3基因位点与这种疾病位点截然不同。因此 ,认为日本褐牛软骨发育异常性侏儒症不是 FGFR3基因突变引起的     

成纤维细胞生长因子(FGF)在骨骼肌发育中的作用

成纤维生长因子(Fibroblast growth factor,FGF)是个体发育中起重要作用的生长因子之一,主要参与骨骼肌发育过程中早期的生肌前体细胞的转变和迁移,成肌细胞的增殖和分化以及成年后骨骼肌的损伤修复等方面。本文主要对FGF家族成员和FGF受体(FGF receptor,FGFR)在骨骼肌中的表达情况、功能研究进展以及肌细胞中的FGF信号通路等方面进行综述。     

山羊成纤维细胞生长因子受体表达特性研究

为了确定成纤维细胞生长因子受体(Fibroblast growth factors receptor,FGFR)基因FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4在简州大耳羊不同器官组织中的表达水平,以及FGFR3和FGFR4在不同发育阶段肌肉组织中的表达模式,试验以简州大耳羊为试验动物,采用荧光定量PCR(q PCR)方法检测各受体基因在简州大耳羊各器官组织中的表达差异,同时检测了FGFR3和FGFR4在不同发育阶段简州大耳羊背最长肌、股二头肌和臂三头肌中的表达变化。结果表明:各FGFR基因均在各检测器官组织中广泛表达,FGFR1和FGFR2在肺脏中的表达量极显著高于其他器官组织(P0.01),FGFR3和FGFR4在肝脏中的表达量极显著高于其他器官组织(P0.01)。FGFR3和FGFR4在山羊肌肉组织发育过程中均持续表达,且均在育成羊臂三头肌中出现表达高峰。     

ASCL2基因在体细胞克隆牛和自然繁殖牛肺脏中的甲基化分析

为探讨ASCL2基因在体细胞克隆牛中的重编程状态,本研究通过亚硫酸氢盐测序法（BSP）对体细胞克隆牛和自然繁殖牛肺脏中ASCL2基因启动子区CpG岛上的CpG位点进行了甲基化状态分析。结果显示,体细胞克隆牛的甲基化水平（28.41%）显著高于正常对照组（7.62%）（P＜0.05）。推测ASCL2基因的异常甲基化可能是造成体细胞克隆牛新生死亡及肺脏发育异常的原因之一。     

敲除成纤维细胞生长因子5基因对阿尔巴斯绒山羊胎儿皮肤成纤维细胞系的影响

本研究为体细胞核移植生产转基因动物提供核供体,以阳离子脂质体介导转染同源重组成纤维细胞生长因子5(fibroblast growth factor 5,FGF5)基因打靶载体至体细胞中,经正负双筛选获得了51个细胞克隆,扩繁后剩余12个克隆,最终经DNA及RNA水平的分子生物学鉴定得到4个阳性细胞克隆,即建立了敲除FGF5基因的内蒙古阿尔巴斯绒山羊胎儿皮肤成纤维细胞系。与普通细胞相比,所得的阳性细胞克隆在细胞形态、性状及生长特性等方面均发生了极其显著的变化:细胞体积增大;边界模糊,立体感降低;生长速率明显下降;胰蛋白酶消化所需时间明显增加。研究结果表明上述变化可能是受到了敲除FGF5基因、细胞转染和药物筛选作用等的影响所致。     

FGF9调节性腺分化研究进展

性别决定过程是双潜能胚胎发育成睾丸或卵巢的过程.通过小鼠基因敲除试验以及在遗传水平分析性反转病人证明该过程是由多个基因调控的.论文综述了睾丸发育通路中信号分子成纤维细胞生长因子9(FGF9)在性腺分化中的作用.FGF9基因参与调节早期睾丸发育的3个重要事件,为调节性腺体腔上皮细胞增殖,促进Sertoli前体细胞形成,调节中肾细胞迁移,影响睾丸索的形成,FGF9诱导FGFR2在核内定位,并维持Sox9的表达.     

转GFP基因核移植牛胚胎的研究

试验采用脂质体转染法与电穿孔法,以携带绿色荧光蛋白（GFP）-新霉抗性（neo-）双标记基因的pMSCV质粒转染胎牛耳成纤维细胞为供体与体外成熟的牛卵母细胞为受体构建克隆胚。研究了体外成熟培养液中添加EGF（表皮生长因子）对转基因胚的影响,不同转染方法构建供体细胞对重构胚发育的影响和在不同体外培养系统中的发育效果。结果显示,体外成熟培养液中添加EGF 30 ng/mL组的卵母细胞成熟率最高,但对后期转基因重构胚的囊胚发育率的影响,以添加EGF 20 ng/mL组的最高;以胎牛耳成纤维细胞为供体细胞,不同转染方法转染供体细胞构建重构胚,其囊胚发育率差异不显著（P>〖JP2〗0.05）;mSOFaa+颗粒细胞单层细胞共培养体系中的转基因囊胚发育率最好,该体系更适合体细胞核移植法生产转基因牛胚胎。     

利用CRISPR/Cas9n系统编辑绵羊成纤维细胞生长因子5(FGF5)基因

成纤维细胞生长因子5(FGF5)是影响毛囊周期性活动及毛发生长的重要生长因子。本研究利用CRISPR/Cas9n系统靶向编辑绵羊成纤维细胞中FGF5基因。首先利用Gibson Assembly法将U6启动子引导表达单导向RNA(sgRNA)的原件构建至pX461质粒中,获得pX461-U6质粒;再将设计并合成好的1对靶向FGF5基因第3外显子的sgRNA及其互补链,经退火连接形成sgRNA-sg1和sgRNA-sg2双链后,分别克隆至带有BbsⅠ和BsaⅠ黏性末端的pX461-U6质粒。构建好的重组质粒pX461-U6-sg1+sg2经测序鉴定后,以电转染的方式转入绵羊成纤维细胞,72 h后收集细胞进行检测分析。经T7E1酶切检测分析表明,成功获得1对具有靶向效果的sgRNA,PCR扩增的FGF5基因片段经TA克隆后进行测序鉴定,结果sgRNA-sg1+sg2在靶位点的打靶效率为100%;缺失的核苷酸数从10到64个不等;基于预测的3D模型和RT-PCR结果显示,FGF5基因的突变将会影响FGF5蛋白与其受体的结合,导致FGF5蛋白失去其生物学功能。本研究构建了可以在同一载体中同时表达...     

溶葡萄球菌素基因乳腺特异表达载体的构建与检测及转基因核供体细胞的制备

本研究旨在构建溶葡萄球菌素基因牛乳腺特异表达载体(pEPB),转染牛胎儿成纤维细胞,为制备溶葡萄球菌素基因的转基因克隆牛提供核供体细胞.本研究以pEGFP-C1为载体骨架,通过PCR扩增牛2.6 kb的β-酪蛋白5′调控区及0.6 kb的3′侧翼区(poly A)序列作为调控序列,制备成含有绿色荧光和新霉素筛选标记的牛乳腺特异表达载体,经PCR和酶切鉴定正确后,用转染试剂FuGene HD反复转染牛pEPB乳腺上皮细胞3～5次,用催乳素诱导后,经免疫荧光分析,检测目的蛋白的表达.然后,用电转染法转染牛胎儿成纤维细胞,经G418筛选得到阳性细胞后,把阳性细胞扩大培养并提取其基因组,因为溶葡萄球菌素基因是外源基因,经PCR及Southern blot 检测来确定目的基因是否已经整合到细胞的基因组上.结果表明,溶葡萄球菌素基因在牛乳腺细胞中得到了表达,并整合到牛胎儿成纤维细胞的基因组中,得到了转溶葡萄球菌索基因的核供体细胞.结果显示,本研究所获得的转基因牛胎儿成纤维细胞可作为体细胞核移植的供体细胞进行转基因克隆牛研究.     

酸性成纤维细胞生长因子与肿瘤细胞生长的相关性

将 p RSV- a FGF(含 a FGF基因的劳斯肉瘤病毒载体 )与 HL - 6 0细胞 (人急性早幼粒细胞白血病细胞系 )悬液直接转移至裸鼠背部肌肉 ,11d后出现了可视肿瘤。比较病理学观察结果显示 ,试验组肿瘤组织内血管再生明显增多 ,2例裸鼠肝脏出现转移性 HL- 6 0细胞 ,表明酸性成纤维细胞生长因子 (a FGF)具有促进肿瘤组织内血管形成的作用 ,从而促进了 HL - 6 0细胞生长与转移。提示应用 FGF抗体对抑制肿瘤的生长与转移可能有一定的作用     

山羊成纤维生长因子受体（FGFR1）基因的多态性检测

选择与羊同源性较高的牛FGFR1基因组序列（NM_001110207）设计3对特异性引物,采用DNA池PCR直接测序法快速检测黔北麻羊FGFR1基因的多态性,并以内蒙古白绒山羊和关中奶山羊比较,结果表明：在引PCR产物中只有黔北麻羊检测到多态,分别处于外显子5和内含子5的T133C和C211T的碱基突变,而其他2个品种...     

Effect of Anti-Basic Fibroblast Growth Factor (Anti-bFGF) on In Vitro Embryonic Development in Rat

In this study, we aimed at the in vitro effects of anti-fibroblast growth factor-2 (anti-FGF-2 or anti-bFGF) on embryo culture in rats. In vitro effects of anti-bFGF on total embryonic development were investigated in 40 rat embryos (which were divided into four groups) (obtained from five pregnant females) at 9.5 days of gestation that were cultured in whole rat serum (WRS), and in WRS+ 2.5, 5, and 10 μg/ml anti-bFGF. After 48 h of culturing, the embryos from each group were harvested to be analysed morphologically according to a morphological scoring system and biochemically to obtain the embryo protein content. The morphological score, embryo protein content, somite number and crown-rump length of embryos indicated that embryos cultured in WRS+ anti-bFGF had significant embryonic retardation. Mean morphological scores for the embryos grown in WRS, in the presence of 2.5, 5 and 10 μg anti-FGF-2 were 61.4 ± 1.64, 46.3 ± 8.42, 27 ± 2.58 and13.6 ± 0.96 respectively. These results suggest that bFGF is very important for normal embryonic development and rat anti-bFGF neutralizes bFGF effect.     

Localization of Vascular Endothelial Growth Factor and Fibroblast Growth Factor 2 in the Ovary of the Ostrich (Struthio camelus)

Vascular endothelial growth factor (VEGF) and fibroblast growth factor 2 (FGF‐2) play a paramount role in the regulation of normal and pathologic angiogenesis in the ovary of mammals. Very little is known on the expression of these two growth factors in the avian ovary. The aim of this study was to determine for the first time the localization of VEGF and FGF‐2 in the ovary of the ostrich using immunohistochemical techniques to investigate the vascularization of the rapidly growing huge ostrich oocyte. At the oocyte periphery, distinct VEGF‐positive granules are visible. In our opinion, the expression of VEGF in the growing oocytes, which does not occur in mammals such as bovines, does not significantly contribute to angiogenesis in the theca interna and externa, where all the original and developing vessels are located, but may contribute to the mitoses and survival of granulosa cells during folliculogenesis. A different immunostaining can be demonstrated for FGF‐2: from late pre‐vitellogenic follicles, FGF‐2 immunopositivity can be observed at the inner perivitelline layer area. In the stroma, the smooth muscle cells of small arteries and the endothelial cells of venules and veins are positively stained for FGF‐2. Another interesting finding of this study is the occurrence of a significant number of VEGF‐ and FGF‐2 positive heterophilic granulocytes within the ovarian stroma, which migrate from the periphery of the ovary towards the growing follicles. We assume that the growth factors of the heterophilic granulocytes contribute significantly to the angiogenesis seen in both theca layers.     

成纤维细胞生长因子（FGFs）对小鼠实验性创伤愈合的作用

实验利用酸性和碱性成纤维细胞生长因子（ａＦＧＦ和ｂＦＧＦ）,分别对小鼠进行实验性创伤修复试验。结果表明,ａＦＧＦ和ｂＦＧＦ对创伤愈合有显著的促进作用,而且ａＦＧＦ的效果优于ｂＦＧＦ。     

成纤维细胞生长因子对动物的营养研究

成纤维细胞生长因子是广泛存在于机体组织细胞的一类生长因子。它对动物具有十分重要的营养作用。它可以促进动物生长、刺激骨骼肌细胞增殖、抑制胫软骨发育不良等作用，现已知ＦＧＦ家族至少有１８名成员。该家庭存在２类受体：高亲和力受体具有酷氨酸蛋白激酶活性；抵亲和力受体为肝素样受体，它们对机体内激素的分泌以及多种细胞的生长和分化有一定的影响。     

成纤维细胞生长因子信号通路与小鼠肺发育

成纤维细胞生长因子(FGFs)是一类参与多种生物生命活动的多肽类物质,在哺乳动物多个器官发育中具有调控细胞增殖、迁移和活化等生物功能。已有研究表明,不同的FGFs参与调控小鼠肺发育过程,其表达异常可引起肺癌、肺纤维化等,同时在肺损伤修复中发挥关键作用。论文系统总结了FGFs信号通路相关配体和受体在小鼠肺发育过程及相关肺疾病中发挥的作用。