应用反向遗传技术研究流感病毒

反向遗传技术(reverse genetics,RG)是一种通过cDNA克隆来拯救RNA病毒基因组片段,进而复制出设计表型的病毒的现代生物基因工程手段,目前被广泛应用于流感病毒重配株的构建.回顾流感病毒反向遗传技术发展的历史,并介绍目前该技术在禽流感疫苗研发方面的实际应用,为禽流感的防治、流感病毒以及其他RNA病毒的研究提供新的思路.     

反向遗传操作技术在甲型流感病毒中的应用

反向遗传操作技术是最近几年迅速兴起的一项分子生物学技术,它将解决对RNA病毒基因组难以操作的多年难题,并为负链RNA病毒的研究开创新的途径,使负链RNA病毒得以深入认识。目前,该技术已应用于多种负链RNA病毒的研究,特别在探寻甲型流感病毒基因组复制、转录和研发新型疫苗上发挥着重要作用,使甲型流感病毒研究工作取得了巨大进步,为大流感的再次流行及防控增添了新的研究方法和防控策略。文章就甲型流感病毒基因组特征、致病机理、新型疫苗及病毒载体的研究等最新进展进行了综述,重点介绍了反向遗传操作技术在甲型流感病毒中的应用。     

反向遗传技术在传染性法氏囊病病毒研究中的应用

传染性法氏囊病是鸡的最严重疾病之一,其病原是鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV),IBDV基因组为两片段双链RNA,变异株和超强毒株的出现,给传统的疫苗免疫带来了新的挑战,因此,加强对IBDV的基础研究是控制该病的关键.RNA的结构不稳定成为阻碍RNA病毒研究的主要障碍,近年来兴起的反向遗传技术将RNA病毒的基因组转化为cDNA,从而使RNA病毒的基因操作成为可能,也使RNA病毒的研究获得了快速的发展.文章就传染性法氏囊病病毒反向遗传操作研究的意义、方法、概况及相关分子生物学进行了全面综述.     

反向遗传学技术及在RNA病毒研究中的应用

RNA病毒的反向遗传学技术是指由病毒的cDNA克隆获取RNA病毒的一项技术,该技术通过人为加入DNA基因片段,实现了在DNA水平上对RNA病毒基因组的人工操作。反向遗传系统可以对RNA病毒直接进行遗传操作,为RNA病毒的分子生物学研究提供了一种强大的工具。自20世纪70年代后期第一例RNA病毒感染性克隆构建成功以来,RNA病毒的分子生物学研究取得了长足的进展,这在很大程度上归功于各种RNA病毒反向遗传系统的建立。文章介绍了反向遗传学技术的基本特点、技术方法及其在正、负链RNA病毒的基因功能、致病机制及新型病毒载体等方面的研究及应用情况。     

狂犬病病毒反向遗传学研究进展

反向遗传学(Reverse genetics)是由基因结构认识基因功能的科学,与之相关的研究技术称为反向遗传学技术(Reverse genetic manipulation).RNA病毒的反向遗传学是采用病毒的遗传物质,在培养细胞或易感宿主中重新拯救出活病毒或类似病毒物质.能够拯救病毒的遗传物质称为感染性克隆,一般是在细菌质粒中含有整个病毒基因组的cDNA拷贝,使得cDNA本身或从cDNA体外转录所得的RNA具有感染性.自1978年第1例RNA病毒Qβ噬菌体的成功拯救以来,各类RNA病毒的分子生物学研究取得了长足的进展,这主要归功于各种RNA病毒反向遗传系统的建立和发展.     

反向遗传学及其在冠状病毒中的研究应用

反向遗传学(reversed genetics)是相对于经典遗传学而言的一门方法学,主要指利用基因工程的手段将病毒的核酸(RNA或DNA)以cDNA的形式表现出来,通过体外转录拯救出与母本病毒具有相似感染性的病毒颗粒。目前,已有许多病毒的反向遗传学研究系统被建立起来,如已经成功完成了口蹄疫病毒、猪瘟病毒、狂犬病病毒、鸡传染性支气管病毒等病毒的     

负链RNA病毒的反向遗传技术

反向遗传技术是一种新的分子生物学技术,它在深入研究负链RNA病毒基因组结构和功能,探寻其基因组复制、转录和研发新型基因工程疫苗上发挥着重要的作用。文章介绍了分节与不分节负链RNA病毒的复制机理和特征,论述了反向遗传学在研究这些病毒上的策略、最新研究进展及其主要影响拯救效率的因素,进一步涉及了负链RNA病毒载体及其重组病毒的研究动态。因此,通过反向遗传学,人们将更加了解负链RNA病毒,为科学利用和有效控制该病毒奠定基础。     

反向遗传操作技术在猪瘟基础理论研究中的应用

反向遗传操作技术的问世为RNA病毒的研究铺平了道路,研究人员根据需要在DNA水平上对RNA病毒进行加工和修饰,进而深入研究RNA病毒的本质和开发新产品。自反向遗传操作技术在猪瘟病毒上应用以来,在对猪瘟病毒致病机理、分子表达调控机制、细胞生长特性、毒力决定基因等方面的研究已取得明显进展。本文就反向遗传操作技术在猪瘟病毒基础理论研究中的应用作一综述,通过了解病毒基因组的功能、病毒与宿主致病力的关系以及病毒增殖特性等,为研究开发理想猪瘟标记疫苗开拓思路。     

RNA病毒反向遗传学的研究方法和应用

本文介绍了RNA病毒反向遗传学的主要研究方法,RNA病毒反向遗传技术的最新研究进展及其在分子病毒研究和疾病防制种的应用及发展前景,着重介绍了感染性克隆构建的过程和拯救病毒时可能会遇到的问题。     

RNA病毒反向遗传的应用前景

反向遗传操作作为一种新兴技术在RNA病毒的研究中发挥着重要作用,本文介绍了RNA病毒反向遗传学的研究方法以及RNA病毒反向遗传技术的最新研究进展和应用前景.     

负股RNA病毒反向遗传学操作及其应用

负股RNA病毒是动物病毒中重要的一群,包括人和动物许多重要的病原,如流感病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒、呼吸道合胞体、副流感、狂犬病、埃博拉及汉坦病毒等。所有这些病毒均属于基因组分节段(正粘病毒、布尼病毒、嵌砂样病毒属)和不分节段(副粘病毒属、弹状病毒属、丝状病毒属和波纳病毒属)的几个属。同其他RNA病毒和DNA病毒相比,     

副流感病毒5型载体研究进展

负链RNA病毒的反向遗传学技术是一种新兴的分子生物学技术,作为负链RNA病毒的副流感病毒5型(parainfluenza virus 5,PIV5),是一种极具应用潜力的重组病毒活载体。现结合PIV5病毒载体特征,对其重组病毒的反向遗传学及其应用等做简要综述。     

以T7 RNA聚合酶为基础的病毒拯救系统研究进展

文章界定了与病毒拯救相关的一些概念,对T7 RNA聚合酶(RNAP)为基础的病毒拯救系统研究进行概述.介绍了体外拯救方法及其缺点,并以最常用的痘病毒载体表达T7 RNAP为基础的体内拯救方法为例,介绍了该方法对病毒拯救的研究进展及缺点,进一步介绍了无痘病毒表达T7 RNAP细胞系的RNA病毒拯救体系的建立和研究,为病毒拯救,特别是以T7 RNAP为基础的病毒拯救试验方案提供参考.     

正呼肠孤病毒反向遗传系统及病毒载体研究进展

正呼肠孤病毒（orthoreovirus）是一种分节段的双链RNA病毒，其宿主范围广泛，对人和动物健康构成了严重威胁。由于正呼肠孤病毒结构复杂，反向遗传系统构建困难，导致其相关研究滞后于其他RNA病毒。自2007年一种完全基于质粒的正呼肠孤病毒反向遗传系统被报道以来，关于正呼肠孤病毒基因和蛋白功能的研究不断增多。本文以哺乳动物正呼肠孤病毒（mammalian orthoreovirus,MRV）和禽正呼肠孤病毒（avian orthoreovirus,ARV）为例，概述了正呼肠孤病毒反向遗传系统和病毒载体研究的最新进展，并对未来发展趋势进行展望，以期为正呼肠孤病毒载体疫苗研发提供参考。     

反向遗传学操作技术在禽流感研究中的应用

反向遗传操作技术的建立为负链RNA病毒的研究开创了新的途径,使负链RNA病毒的许多特性得以深入认识。禽流感近年在全球的广泛暴发,使得对流感病毒的深入研究更加迫切,反向遗传操作技术的应用,使禽流感病毒的基因结构、致病机理、与宿主细胞的相互关系等各方面的研究工作都取得了巨大进步。笔者就国内近几年反向遗传操作技术在禽流感研究中取得的进展做一综述,并对该技术的发展趋势做一分析,提出对策思考。     

1型鸭肝炎病毒衣壳蛋白的分子特征

本研究测定了2株1型鸭肝炎病毒(DHV-1)的衣壳蛋白编码区序列,并将推导的氨基酸序列与其他小RNA病毒衣壳蛋白的氨基酸序列进行了比较分析.结果显示,DHV仅编码3种衣壳蛋白,3种衣壳蛋白中均存在类似于其他小RNA病毒的核心结构,即八链反向平行β桶结构.DHV-1与其他小RNA病毒之间衣壳蛋白的氨基酸序列差异主要位于VP1的两端、VP3的N端以及连接β链的环,特别是βB-C、βE-F及βG-H环的序列差异更为显著.与9个属小RNA病毒P1蛋白的比较结果表明,DHV-1与双埃柯病毒属的成员具有相近的遗传关系,但在P1进化树中,DHV-1形成一个独立的分支,故应在小RNA病毒科中为该病毒成立一个新属.     

动物RNA病毒VLPs疫苗的研究进展

RNA病毒引发了众多的人类、动物重大疫病和公共卫生事件,然而目前尚无针对RNA病毒的特效药物,开发安全且有效的疫苗是控制RNA病毒感染的最有效手段,新型疫苗研发和使用已经是第3次疫苗革命的主题。病毒样颗粒(virus-like particles, VLPs)是病毒的一种或几种结构蛋白构成的纳米级空心颗粒,不含有感染性遗传物质,无法自我复制,具有较高安全性。另外,VLPs形态结构与天然病毒粒子类似,保留了天然病毒粒子的空间构象,易被宿主免疫系统有效的识别、摄取和递呈,进而高效地诱导T细胞和B细胞的免疫反应,是近年来新型疫苗领域中的研究热点。现对RNA病毒结构与功能、VLPs疫苗的分类、包装与嵌入、表达系统及载体动能、免疫原性评价、蛋白定量及纯化等方面进行综述。     

禽偏肺病毒分子生物学及基因工程疫苗研究进展

禽偏肺病毒为不分节段的单股负链RNA病毒,属于副黏病毒科肺炎病毒亚科偏肺病毒属,主要引起火鸡和鸡上呼吸道系统疾病,分布广泛,严重危害养禽业的经济效益。本文简要综述禽偏肺病毒粒子的结构、理化特性、基因组构成、结构蛋白及功能、RNA转录与复制、致病性和抗原性,以及基因工程疫苗研究的进展。     

BVDV Singer＿Arg株全基因组克隆及其感染性RNA制备

克隆牛病毒性腹泻病毒Singer＿Arg株全长cDNA,并获得其感染性RNA。将病毒基因组分段克隆后再拼接成全长cDNA;通过巨细胞病毒即早期启动子控制病毒cDNA转录,5’-UTR上游的锤头状核酶和3’-UTR下游的丁肝病毒核酶控制转录产物5’-UTR和3’-UTR的完整性和准确性,以获得不经体外转录,直接转染细胞产生病毒感染性RNA的反向遗传操作系统;并通过Western blot、RT-PCR技术、免疫荧光等方法对子代病毒进行了一系列鉴定与遗传稳定性分析。获得了Singer＿Arg株全基因组序列并通过反向遗传拯救出该毒株。成功构建了基于Singer＿Arg株的BVDV反向遗传操作系统,为BVDV疫苗研发和基础研究提供了技术平台。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒反向遗传技术的研究进展

反向遗传操作技术可以在DNA水平上对RNA病毒基因组进行各种修饰或改造,然后通过拯救病毒的表型变化来判断这些基因操作的效果,从而可以对病毒基因组的表达调控机制、病毒致病的分子机理等进行研究。本文就反向遗传操作技术在PRRSV基因功能结构研究以及新型疫苗开发等研究中的应用进行了综述。