桃果实β-胡萝卜素羟化酶基因的克隆及表达模式分析

胡萝卜素羟化酶是类胡萝卜素合成代谢途径中的关键酶,可以将合成代谢途径中产生的含β-环的类胡萝卜素转化成β-隐黄素和玉米黄素。利用同源克隆技术获得桃果实β-胡萝卜素羟化酶(HYb)基因的全长核苷酸序列,命名为PpHYb。PpHYb基因全长1 405 bp,编码区长933 bp,共编码翻译成310个氨基酸。进化树分析发现PpHYb与草莓FaHYb亲缘性较高。序列分析发现PpHYb与其他物种中的HYb一样,同样含有模体为“HXXXXH”+“HXXHH”的保守基序。实时荧光定量PCR结果显示PpHYb基因在黄肉品种‘金丽’桃果实软核期、硬核期、膨大期、硬熟期和完熟期中均有表达。当果实处于硬熟期之前时,PpHYb基因在果皮和果肉中的表达逐渐升高并达到最大值;当果实处于完熟期时,PpHYb基因在果皮和果肉中的表达略有下降,且在果皮中的表达显著高于果肉。本研究通过对桃果中PpHYb基因的克隆和表达分析,为进一步研究类胡萝卜素生物合成途径提供了基础。     

西红花β-胡萝卜素羟化酶CsBCH1-z基因的分离与生物信息学分析

为更好地理解西红花类胡萝卜素合成代谢途径,从西红花中分离和克隆了1 个新的β-胡萝卜素羟化酶基因CsBCH1-z,并从柱头cDNA中克隆了该基因的全长编码序列为906 bp,编码301 个氨基酸残基,对应的基因组序列为1261 bp,5 个外显子由4 个内含子子间隔开。与已知的CsBCH1 基因的氨基酸序列比较,发现在N端由于6 个碱基的缺失,造成了2 个氨基酸的缺失和1 个氨基酸由异亮氨酸突变为亮氨酸,另外还有一处单碱基的变异造成苏氨酸突变为丙氨酸。通过预测其蛋白含有3 个明显的跨膜结构域,C端包含了2 组“HXXXXH”和“HXXHH”结构域,是典型的脂肪酸羟化酶。β-胡萝卜素羟化酶是西红花苷合成的重要前体物质,CsBCH1-z 柱头中的表达量>叶片>花瓣;雄蕊中表达很低;球茎中表达不可见。     

烟草NtNHX1-1基因特征分析

烟草是中国重要的经济作物之一。盐胁迫对烟草生产造成巨大危害,克隆盐胁迫响应基因,为从分子水平抵御盐胁迫提供基因资源。本研究克隆了Na+/H+反向转运蛋白基因。该基因编码的蛋白为膜蛋白,具有12个跨膜区。进化分析表明,Nt NHX1-1与番茄的Sl-NHX1遗传距离最近,相似性为95%,其次为甜辣椒的Ca-NHX2,相似性为94%。组织特性表达分析表明,NtNHX1-1基因在茎中表达最高、其次为叶、花和根。NaCl处理后NtNHX1-1基因的表达明显上调,表明该基因可能在烟草抵抗盐胁迫中发挥重要功能。通过调控NtNHX1-1基因的表达有望获得耐盐胁迫烟草新品系。     

β-胡萝卜素的研究进展

综述了β-胡萝卜素的理化性状、生理功能、制备方法及国内外对天然β-胡萝卜素及其产品的开发研究状况。     

动物β-胡萝卜素值得开发

<正>有许多甲壳类、节肢类动物,特别是虾、蟹、牡蛎、小鱼、蝗虫、蝉、蚕蛹等的体壳含有很多的胡萝卜素。这些胡萝卜素具有植物胡萝卜素的生理作用,而且在某些方面还另有特点。来自动"     

植物油中β-胡萝卜素的测定

植物油中的β-胡萝卜素的含量,用高压液相色谱法测定,是一种快速、简便和灵敏的方法。使用 Lichrosorb si 60 5μm 分离柱,检测波长为453毫微米。被分析的样品直接溶解在流动相中。试验浓度为10～80毫微克范围内,进样量和峰高呈线性关系。对向日葵油、玉米油、棉籽油、橄榄油等九种植物油分别作了回收,测定结果,回收率在82.2～115%。对精炼菜籽油,精炼棉籽油和山桐籽油Ⅰ号,以不同的加入量作分析精度研究,油中的β-胡萝卜素回收率,分别为92.3%,93.26%和93.26%。样本标准差分别为0.676,0.851和0.822。测出值变动系数分别为6.93%、4.41%和4.05%。用此法分别测定了15种植物油中β-胡萝卜素的含量,其中山桐籽油Ⅰ号和橄榄油为最高,分剐为1108.3微克/100克和393.2微克/100克,玉米油。芝麻油,葵花油和油菜籽沙拉油中表测出。     

β-胡萝卜素与油脂稳定性的研究

本研究通过对二级菜籽油、菜籽色拉油、二级大豆油、大豆色拉油添加适量的β—胡萝卜素来提高油脂的稳定性。研究结果表明。添加β-胡萝卜素的油脂稳定性优于未添加的油脂。同时还对不同种类的油脂添加量进行对照试验,找出了β-胡萝卜素的最佳添加量。     

富含β-胡萝卜素的酸凝乳的研制

阐述了富含β-胡萝卜素的酸凝乳的加工工艺。以鲜牛奶、胡萝卜为主要原料,先将胡萝卜经粉碎、取汁等工艺制成胡萝卜汁,再配合适当比例的鲜牛奶,经乳酸发酵,生产出集胡萝卜与鲜牛奶营养于一体的新型酸凝乳,采用正交试验法确定出最佳发酵工艺条件。     

甘薯番茄红素β-环化酶基因的克隆与转化烟草的研究

番茄红素β-环化酶（LYC-B）催化番茄红素形成β-胡萝卜素，是β-胡萝卜素生物合成的关键酶之一。从甘薯块根总RNA逆转录的cDNA中扩增出lyc-b的保守序列后，用cDNA末端快速扩增方法（RACE）获得了该基因全长cDNA，共1 844 bp，开放阅读框1 503 bp，编码501个氨基酸。构建了lyc-b植物表达载体p23-lyc-b，通过农杆菌介导法转化烟草，经PCR及Southern杂交表明该基因已整合到烟草的基因组中。     

一个苹果β-微管蛋白基因及其启动子序列特征分析

为了探讨来自苹果的β-微管蛋白基因家族成员之一(转录本号:MDP0000749824.1)对茎生长的影响,以普通型苹果品种烟富3号和柱型苹果品种舞姿的茎尖为材料,克隆到了该基因的编码序列,该序列全长1 332 bp,编码443个氨基酸。DNAMAN比对结果表明,烟富3号和舞姿上该基因的编码序列完全一致。以舞姿及烟富3号的DNA为模板,用启动子特异性引物PCR扩增后,均获得一段1 661 bp的核苷酸序列,二者有6处碱基差异。启动子序列分析发现,其中具有赤霉素、脱落酸、茉莉酸甲酯和水杨酸等激素响应元件。构建Cam35S-MDP0000749824-GFP重组载体,在烟草叶片中完成瞬时表达,激光共聚焦显微镜观察结果表明,MDP0000749824.1编码蛋白位于细胞膜和微管上。以普通型苹果品种烟富3号和柱型苹果品种舞姿的茎尖组织为试材,实时荧光定量PCR(q RT-PCR)分析表明,该基因在柱型苹果舞姿茎尖中的转录水平显著低于普通型的烟富3号。因此,推测该基因的表达水平可能受激素调控的作用,进而对茎的伸长生长造成影响。     

优选β-胡萝卜素提取方案与其工艺改进

β－胡萝卜素属脂溶性维生素A原的一种，是一种抗氧化剂，可清除氧自由基，抑制自由基生成。具有促进免疫细胞增殖、增强免疫细胞功能的作用。因此，β－胡萝卜素可有效防治肿瘤、癌症、心脏病及冠心病。并且，β－胡萝卜素本身无毒，当大量摄入时，在体内可积累但不引起中毒。     

黄花蒿黄烷酮3-羟化酶基因AaF3H的克隆及其在烟草中的表达

通过SMART-RACE技术从黄花蒿中克隆得到了2 136 bp的黄烷酮3-羟化酶基因AaF3H的cDNA全长序列,该序列包含一个1 092 bp的完整编码区,编码364个氨基酸组成的蛋白。该蛋白的分子量为41.18 k D,理论等电点(p I)为5.67,是一种稳定的非分泌和非跨膜的亲水性蛋白,共有13个磷酸化位点,属于典型的2OG-FeⅡ_Oxy加氧酶超家族,二级结构以无规则卷曲为主。利用NCBI分析表明,AaF3H与菊花F3H蛋白的一致性达97%。经基因克隆、农杆菌介导将该基因转入烟草中,结果显示,相较于野生烟草,过表达AaF3H基因能显著转化柚皮素,说明AaF3H基因在黄花蒿黄酮类物质的生物合成中起重要作用,也为进一步研究黄花蒿中黄酮类物质的生物合成调控提供了基础。     

一个棉花β-1,3-葡聚糖酶基因全长cDNA的克隆与特征分析

利用本实验室分离的防卫基因类似物片段,通过5’和3’RACE,从海岛棉海7124中克隆了一个β-1,3-葡聚糖酶基因全长cDNA,命名为GbGLU。其全长1 266 bp,含一个编码361个氨基酸残基的开放阅读框。该基因编码产物理论分子量和等电点为MW = 39.66 kD,pI = 9.15,含有糖基水解酶家族17的保守结构域,N端有26个氨基酸残基组成的信号肽。Southern结果显示,GbGLU在棉花基因组中以单拷贝形式存在,研究发现,GbGLU的表达受黄萎病菌的诱导。聚类分析表明,棉花葡聚糖酶基因可分为3类,分别含有糖基水解酶家族3、9、17的保守结构域。无论棉花中的还是本研究中参考的其他作物中,受病菌诱导的葡聚糖酶基因都含有糖基水解酶家族17的保守结构域,故推断其为此类基因参与抗病反应的功能域。     

高效液相色谱法测定甘薯全粉中的β-胡萝卜素

采用高效液相色谱法(HPLC)测定甘薯全粉中的β-胡萝卜素。取鲜样品,用80%石油醚+20%丙酮进行超声萃取,旋转蒸干,用石油醚定容,然后进行HPLC测定。分析柱为Intersil-ODS-C18,流动相为90%甲醇+10%乙腈,在波长448nm处紫外检测定量。     

反相高效液相色谱法测定果蔬中的β-胡萝卜素

从检测波长、流动相、柱温等方面优化了反相高效液相色谱测定果蔬中的β-胡萝卜素的色谱条件,并对方法的应用性进行了评价。用单因子实验方法优化得到的反相高效液相色谱分析果蔬中β-胡萝卜素的条件,指出了β-胡萝卜素标准曲线的回归方程、相关系数、线性范围、最小检出限、加标样品回收率、变异系数。反相高效液相色谱法能简便、快速、准确地测定果蔬样品中的β-胡萝卜素,为果蔬质量的检测与评价提供了依据。     

烟草NtNramp1-1基因克隆及特征分析

在植物中Nramp蛋白参与重金属的吸收转运,为了研究烟草重金属的吸收转运机理,本文在烟草中克隆了NtNramp1-1基因。该基因ORF由1 602个核苷酸组成,编码534个氨基酸。生物信息学分析结果表明,NtNramp1-1基因编码跨膜蛋白。对NtNramp1-1基因进行组织特异性表达,结果表明该基因主要在烟草根部表达。Cd和As处理能够大幅提高NtNramp1-1基因的表达水平,推测该基因参与烟草Cd、As的吸收转运。     

菜籽油β-胡萝卜素变化对油脂储藏品质的影响

本文研究了四川省62份菜籽油中β—胡萝卜素含量及其储藏期的变化以及对油脂储藏品质的影响。二级菜籽油β—胡萝卜素含量为30～60ppm。室温储存一年β—胡萝卜素分解率为14％,储存二年其分解率为20％左右,随β—胡萝卜素分解;油脂品质降低。此外,对于榨油机型、储油装具、储存温度等因素对储油品质的影响也进行了讨论。     

胡萝卜栽培过程中β-胡萝卜素含量的动态研究

对４个品种的胡萝卜（新黑田五寸人参,ＨＥＲＴＡＧＥ,ＸＰＨ３９１０和ＴＥＢＥ）进行栽培和取样,研究其干物质积累和β－胡萝卜素含量的变化,结果显示,在胡萝卜生长过程中,随着地上部分同化器官的建成,其于物质积累不断增加,干／鲜比例呈上升趋势β－胡萝卜素含量的变化不是均匀递增的,β－胡萝卜素大量形成期主要在莲座期以后的肉质根生长期,此间β－胡萝卜素的合成量占全生长期的７５％以上;不同熟性的品种β－胡萝卜素快速形成期和达到最大含量所需的时间不一样,但各类型品种都在生理成熟期时达到β－胡萝卜素含量的最大值。     

高效液相色谱法测定番茄皮渣中的β-胡萝卜素

采用高效液相色谱法确证番茄皮渣中含有丰富的"-胡萝卜素,并对其含量进行了准确的测定。测定结果表明,该方法的线性范围为0.05￣10.0#g/mL,回收率为82.3%￣96.4%,相对标准偏差为2.0%￣7.7%。