玉树马和德保矮马SLC36A1基因多态性研究

 控制马香槟毛色的CH（Champagne gene）基因家族包含4个候选基因（SLC36A1、SLC36A2、SLC36A3、SPARC）,研究发现SLC36A1基因外显子2的突变是造成马香槟毛色的关键位点。为揭示中国马SLC36A1基因遗传多态性,本研究以玉树马和德保矮马共74个样本为研究对象,以马DNA池为模板扩增SLC36A1基因的10个外显子及部分内含子序列并进行测序分析。共发现马SLC36A1基因5个SNPs,分别位于内含子3（g.26699953 A>G, g.26699851 G>C, g.26699850 G>C）,外显子4（g.26699562 G>A）及外显子6（g.26697018 C>T）。利用PCR RFLP方法对74个家马样本进行基因分型,发现外显子6的SNP有基因型CC、CT;外显子4的SNP有基因型GG、GA;内含子3的g.26699850 G>C突变有基因型GG、GC;内含子3的另外2个SNPs（g.26699953 A>G, g.26699851 G>C）通过测序,发现有AA、AG、GG与GG、GC、CC基因型。所有5个马SNPs均为野生型占主要优势。由此界定了马SLC36A1基因有9种单倍型（H1 H9）,其中H5是最主要的单倍型。德保矮马遗传多样度为0.4190,比玉树马（0.2228）高,表明德保矮马香槟毛色遗传多态性比玉树马更丰富。玉树马与德保矮马的平均单倍型多样度为0.3160,表明其香槟毛色遗传多态性相对较低。     

柴达木马血清白蛋白多态性的研究

采用聚丙烯酰胺电泳对１３１匹柴达木马血清白蛋白的多态性进行研究。结果：（１）柴达木马血清白蛋白基因座有ＡＬＡ＾Ａ和ＡＬＢ＾Ｂ两个等位基因，基因频率分别为０．４１２２和０．５８７８；（２）柴达木马存在ＡＬＢ ＡＡ，ＡＬＢ ＡＢ和ＡＬＢ ＢＢ三种基因型，以ＡＬＢ ＡＢ为优势基因型；（３）基因杂合度为０．４８４６，有效等位基因数为１．９４个。     

湟中马血清酯酶多态性的研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对青海省湟中县９１匹马血清酯酶的多态性进行了研究。结果发现：①湟中马的血清酯酶受ＥＳ＾Ｆ，ＥＳ＾Ｉ，ＥＳ＾Ｓ和ＥＳ＾Ｏ４个等位基因的控制，其基因频率分别为０．４４５０，０．５３３０，０．０１１０和０．０１１０；②在被检湟中马的ＥＳ位点上共发现ＥＳ Ｆ，ＥＳ ＦＩ，ＥＳ Ｉ，ＥＳ ＩＳ和ＥＳ Ｏ五种表型，以ＥＳ ＦＩ为优势表型（４７．２５％）；③ＥＳ等位基因频率无性别差异；④     

辽宁和内蒙古绒山羊血液蛋白质和酶多态的研究及其与生产性能的关系

利用不连续系统聚丙烯酰胺凝胶电泳地测定了辽宁绒山羊（126只），内蒙古绒山羊二狼山品系（48只），内蒙古绒山羊阿尔巴斯品系（48只）的血红蛋白（Hb)，血清白蛋白（Alb)，酯酶（Es)，碱性磷酸酶（Alp)和淀粉酶（Am)的多态性，发现血红蛋白和血清白蛋白表现为半日态，而另三种酶表现为多态，结果表明：血清酯酶共有三种基因型，即EssAA,EsAb,EsBB，受两个共显性基因ESA和ESB控制，碱性磷酸酶共有二种基因型，即Apf和Apo型，受两个基因Apf和Apo控制，淀粉酶共有三种基因型，即AmAA,AmAB,AmBB，受两个共显性等位基因AmA和AmB控制，各品系间Es,Alp,Am的基因频率有很大差异，AmAB型个体产绒量明显高于AmAA和AmBB型个体，Apf型个体产绒量高于Apo型个体，酯酶只与出生重和双羔率有关。     

中国矮马血液遗传标记的初步研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳对16匹中国矮马血清中白蛋白（ALB）、酯酶（ES）、α1-B糖蛋白（A1B）和维生素D结合蛋白（GC）进行了检测。结果发现：在4个位点中，白蛋白（ALB）和酯酶（ES）位点呈现多态性，而α1-B糖蛋白（A1B）、维生素D结合蛋白（GC）2个位点均呈现单态性。在白蛋白（ALB）位点发现3个基因型，即AA、AB和BB，由等位基因ALB^A和ALB^B控制，其基因频率分别为0.3125和0.6875；在酯酶（ES）位点发现4个基因型，即FS、II、FF和FI，由等位基因ES^s、ES^1和Es^f控制，其基因频率分别为0.1875,0.281和0.5313。     

马生长激素(GH)基因的PCR-SSCP研究

选取4个蒙古马地方品种、1个国内培育品种和1个国外引人品种共281匹马，采用PCR—SSCP技术，检测了GH基因5’侧翼区、第1内含子、第2外显子和第5外显子4个位点的遗传多态性。结果显示：仅第5外显子出现多态性，表现出AA、BB和AB3种基因型，其余位点未检测到多态。群体遗传学分析结果表明：除纯血马外，其余品种都是等位基因A为优势基因；Hardy-Weinberg平衡检验显示，乌审马、乌珠穆沁马、巴尔虎马处于平衡状态，锡尼河马、三河马、纯血马处于非平衡状态；各品种马的多态信息含量均为中度多态（0．25〈PIC〈0．5）。本研究为今后马的分子育种奠定一定基础。     

三河马血液遗传标记的研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳对25匹三河马血清中白蛋白（ALB）、酯酶（Es)、α1-B糖蛋白（A1B）和维生素D结合蛋白（GC）进行了检测，结果发现：在4个位点中，白蛋白（ALB）和酯酶（Es)位点呈现多态性，其中在白蛋白（ALB）位点发现3个基因型，即AA、AB和BB，由等位基因ALB^A和ALB^B控制，其基因频率分别为0．40和0．60；在酯酶（Es)位点发现4个基因型，即FF、II、FI和IS，由等位基因Es^f,Es^I和Es^S控制，其基因频率分别为0．40，0．56和0．04，而α1-B糖蛋白（A1B）、维生素D结合蛋白（GC）2个位点均呈现单态性。     

青海细毛羊血清芳基酯酶多态性的研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对509只青海细毛羊血清芳基酯酶的多态性进行研究。结果发现：①青海细毛羊芳基酯酶位点有ES A′和ES a为优势表型（64.05％）；②ES^A和ES^a等位基因频率分别为0.1997和0.8003；③基因杂合度为0.3196;④除ES A型母羊的周岁毛长显著大于ES a型母羊（P＜0.05）以外，其它各组的生产性状指标没有表型间的差异。     

撒坝猪血清酯酶多态性与日增重关系的研究

本研究采用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳法对１０２头撒坝猪的血清酯酶（Ｅｓ）多态性进行了检测，计算了该位点的基因型频率，基因频率及遗传多样性指数，并用普通方差分析和二因素有互作的最小二乘模型对不同酯酶基因型与几个阶段日增重的关系进行了分析。结果表明，撒坝猪血清酯酶三种基因型ＡＡ、ＡＢ和ＢＢ的频率分别为０．２４５１、０．５９８０和０．１５６９。两个等位基因Ａ和Ｂ的基因频率分别为０．５４４１和０．４５５９。该位点的遗传多样性指数为０．４９６２。在三种基因型中，ＢＢ型个体的２～６月龄平均日增重显著高于其它两种类型，且酯酶基因型与性别之间的互作效应明显，显示了猪的血清酯酶多态性作为２～６月龄平均日增重的遗传标记以进行标记辅助选择的可能性     

蓝马鸡和藏马鸡血清淀粉酶和酯酶同工酶酶谱

采用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳法对19只蓝马鸡和15只藏马鸡血清淀粉酶和血清酯酶同工酶酶谱进行了研究。结果发现：（1）蓝马鸡和藏马鸡血清淀粉酶有AMY1,AMY2,AMY3三种同工酶,其中AMY1和AMY2存在多态性;（2）两种马鸡的血清酯酶均存在ES1,ES2和ES3三种同3-酶;蓝马鸡的ES1同工酶存在显现酶活性的ES1A（36．8％）和不显现活性的ES10（63．2％）2种表型,而藏马鸡全部为ES10型。     

欧拉羊血清酯酶多态性及其与血液指标的联系

采用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳法对100只欧拉羊的血清酯酶（ES）多态性的特征进行了研究，同时比较了不同ES型欧拉羊的15项血液指标。结果发现：①欧拉羊的ES位点有ESA和ESa两种表型而呈现多态性；②ES表型受一对等位基因ES^A和ES^a的控制，ES^A对ES^a呈显性，其基因频率分别为0．5490和0．4510；③欧拉羊ES位点的基因杂合度、有效等位基因数和基因均质度指数分别为0．4935、1．9744和0．0129；④不同ES型欧拉羊15项血液指标没有显著性差异。     

玉树藏马血清酯酶的遗传多态性

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳对来源于青海省杂多县 1 0 9匹藏马血清酯酶多态性进行了测定。在藏马酯酶位座共发现 5种表型 ,由EsF、EsI 和EsS 等 3个等位基因控制 ,其基因频率分别为 0 .4 1 2 8、0 .5367及 0 .0 50 5;基因的杂合度、基因均质度指数和有效等位基因数分别为 0 .5390、0 .1 91 5和 2 .1 692。     

蓝马鸡和藏马鸡的血清酯酶同工酶酶谱

采用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳法对 1 9只蓝马鸡和 1 5只藏马鸡的血清酯酶同工酶酶谱进行了研究。结果发现 :(1 ) 2种马鸡的血清酯酶存在ES1 ,ES2和ES3 3种同工酶 ;(2 )蓝马鸡的ES1同工酶存在显现酶活性的ES1A (36 8% )和不显现酶活性的ES1O (63 2 % ) 2种表型 ,而藏马鸡全部为ES1O型 ;(3)ES2同工酶只有一条浓染的酯酶区带 ;(4)ES3同工酶存在ES3ABC ,ES3AB和ES3BC 3种表型 ,蓝马鸡和藏马鸡均以ES3ABC为优势表型 (分别为 68 4%和 60 0 % )。     

MicroRNA fingerprints in serum and whole blood of sarcoid‐affected horses as potential non‐invasive diagnostic biomarkers

Serum and whole blood microRNA (miRNA) fingerprints have been proposed as a new class of non‐invasive human cancer biomarkers. In this study, we compared equine sarcoid (ES) disease‐specific serum and whole blood miRNA fingerprints and correlated them to miRNA expression in sarcoid tissue. After high throughput sequencing, miRNA differential expression analysis between six ES‐affected and five control horses was carried out in serum and whole blood using a DESeq algorithm, accounting for the influence of hemolysis and the white blood cell count. Target gene, pathway prediction and enrichment analyses were conducted using TarBase, mirPath and GeneCodis. After exclusion of 4 hemolyzed out of a total of 11 serum samples, 9 miRNAs were found to be differentially expressed in serum of ES vs control horses. In whole blood, all 11 samples showed normal white blood cell counts and 19 miRNAs were found to be differentially expressed. A total of 2/9 serum and 7/19 whole blood differentially expressed miRNAs were also highly expressed at the tissue level and their predicted target genes were associated with cancer pathways. Serum and whole blood miRNA expression allowed discrimination between ES and control horses and merits further validation in a larger study cohort. The use of whole blood might be superior because it has higher miRNA content and is less influenced by pre‐analytical variables compared to serum. Concurrent dysregulation of single miRNAs in tissue and blood suggests a possible biological function of circulating miRNAs.     

Evaluation of various compounds to inhibit activity of matrix metalloproteinases in the tear film of horses with ulcerative keratitis

OBJECTIVE: To examine in vitro effects of various antiproteolytic compounds on activity of matrix metalloproteinase (MMP)-2 and -9 in the tear film of horses with active corneal ulcers. SAMPLE POPULATION: Samples of tear film obtained from the eyes of 34 horses with active ulcerative keratitis. PROCEDURE: Horses were sedated, and tear samples were collected from the lower fornix of 34 ulcerated eyes by use of capillary tubes. The protease inhibitors 0.2% EDTA, 0.1% doxycycline, 10% N-acetylcysteine (NAC), 0.1% solution of a modified dipeptide that contains hydroxamic acid (ie, ilomostat), 0.1% alpha1-proteinase inhibitor (PI), 0.5% alpha1-PI, and 100% fresh equine serum (ES) were used to treat pooled samples. Amount of latent and active MMP-2 and -9 was measured by optical density scanning of gelatin zymograms of treated and untreated tear samples. RESULTS: Pooled tear samples obtained from ulcerated eyes contained the latent and active forms of MMP-2 and -9. Compared with MMP activity in untreated samples, total MMP activity (sum of all bands detected) observed on the gelatin zymogram gels was reduced by 99.4% by EDTA, 96.3% by doxycycline, 98.8% by NAC, 98.9% by ilomostat, 52.4% by 0.1% alpha1-PI, 93.6% by 0.5% alpha1-PI, and 90.0% by ES. CONCLUSIONS AND CLINICAL RELEVANCE: We documented that EDTA, doxycycline, NAC, ilomostat, alpha1PI, and ES inhibited MMP activity in vitro. Because these compounds use different mechanisms to inhibit various families of proteases in the tear film of horses, a combination of these protease inhibitors may be beneficial for treatment of corneal ulcers in horses.     

白唇鹿血清同工酶酶谱的电泳研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳地对３４头白唇夜以继日的４种血清同工酶酶谱及其多态性进行研究。结果（１）酯酶包括ＥＳ１，ＥＳ２和ＥＳ３三种同工酶，其中ＥＳ２存在多态性；（２）碱性磷酸酶存在在ＡＬＰＢ和ＡＬＰＯ两种表型，以ＡＬＰＯ型为优势表型（６７．６５％）；（３）淀粉酶包括ＡＭＹ１，ＡＭＹ２和ＡＭＹ３三种同工酶，ＡＭＹ１和ＭＡＹ２两种同工酶存在多态性，（４）白唇鹿的乳酸脱氢酶显现出与众不同的同工酶酶谱。     

安宁果下马(中国矮马)血液蛋白多态性及与其他马品种遗传距离的研究

本研究采用淀粉凝胶和聚丙烯酰胺凝胶电泳技术测定了安宁果下马(中国矮马)和建昌马的血红蛋白(Hb)、血清白蛋白(AIb),血清运铁蛋白(Tf)、碳酸酐酶(CA)和酯酶(ES)同工酶等3个多态位点的基因型和基因频率。为了分析安宁果下马在马种中的地位,本研究利用当地安宁果下马和建昌马与其它7种马的3种蛋白质多态位点的等位基因频率资料,计算出遗传距离和遗传相似系数,并进行聚类分析,证明了安宁果下马是我国自古以来遗留下来的一个独立的马匹系统,与其它马无较近的亲缘关系。     

MEI1基因可变剪切事件对蒙古马精子生成的调控作用

旨在探索发生可变剪切事件的MEI1基因对蒙古马精子生成的调控作用,实现利用分子调控技术提高马的精子数量和精液品质,有效提高繁殖效率,降低生产成本,加快遗传进展,促进种群繁衍.本研究以两岁蒙古马的睾丸支持细胞(SC)作为研究对象,构建未发生外显子跳跃(exon skip,ES)事件的MEI1-1-pIRES2-EGFP重...