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1.
表达传染性法氏囊病病毒VP2基因的重组鸡痘病毒的构建及其免?… 总被引:3,自引:0,他引:3
以脂质体转染技术构建了表达鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因的重组鸡痘病毒FPV-VP2,该病毒性在鸡胚成纤维细胞及鸡体内均能稳定产生子代病毒,经翅皮下5×10^5PFU/羽免疫1日龄SPF鸡,免疫后4周以100LD50/羽IBDV超强毒株G株攻毒,获得了5/6的保护,但不能有效预防临床发病及法氏囊受损萎缩,实验结果证明了VP2是IBDV的宿主保护性抗原,提示T细胞介导的免疫可能在IBDV 相似文献
2.
构建了表达了传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2的两种火鸡疱疹病毒(HVT)重组体vHVT001和vHVT002。用其接种1日龄雏鸡以评价它们对IBDV52/70株和马立克氏病病毒(MDV)RB1B株攻击的保护效果。在IBDV攻击中,vHVT002免疫鸡能预防死亡和法氏囊肉眼病变,具有良好的保护力,以10^5PFU免疫能达100%、10^4PFU免疫能达60%保护,而用vHVT001免疫只获得较低 相似文献
3.
制备2批抗火鸡疱疹病毒(HVT)血清,无菌检验合格,与鸡新城疫病毒(NDV)、鸡传染性支气管炎病毒(IBV)、鸡传染性法氏囊炎病毒(IBDV)和Reo无交叉中和反应。蚀斑减少试验结果表明当病毒含量为10个、5个羽份/0.1ml时,中和后尚有一些蚀斑存在。病毒含量为3.3羽份/0.1ml或更低时,中和后未见典型蚀斑存在 相似文献
4.
传染性法氏囊病病毒的生态学与流行病学研究 总被引:18,自引:3,他引:15
血清学调查结果表明,麻雀、鸭、鹅等均可自然感染传染性法氏囊病病毒(IBDV),其血清阳性率分别为7.4%(4/54),95.5%(363/380)和9.4%(11/117)。从鸭和麻雀分离到的IBDV可适应于鸡胚和鸡胚成纤维细胞,并产生CPE,对SPF鸡有致病性。病毒核酸和结构蛋白的电泳分析结果表明,鸡源、鸭源和麻雀源IBDV均有2条核酸带,5条蛋白带,毒株间的病毒核酸及结构蛋白电泳迁移率无显著差异,但其结构蛋白的相对含量不尽一致。经鉴定,鸡源、鸭源和麻雀源IBDV均属血清Ⅰ型,为同源病毒。本研究结果提示,鸡并非是IBDV的唯一自然动物宿主,非鸡禽鸟类宿主的存在可引起IBD的传播和续源流行,也为IBDV的变异提供了特殊的生态条件,成为诱导IBDV变异的另一重要因素。 相似文献
5.
用表达马立克氏病病毒(MDV(I型疫苗株CV1988/Rispens糖蛋白B(gB)基因的重组鸡痘病毒(rF-PV-gB/R)和鸡痘病毒(FPV)疫苗株282E4免疫1日龄不同品种的鸡,来评价2种病毒株的安全性及免疫母源抗体的商品是我毒性,而对无毒源抗体的SPF鸡的毒性则不同。斑点杂交和Southern杂交产,fFPV-gB/R中无氨苄青霉素的抗性基因。 相似文献
6.
传染性法氏囊病病毒分子结构与功能研究进展 总被引:6,自引:0,他引:6
本文对传染性法氏囊病病毒的分子结构与功能的关系及致病的分子基础作了综述。IBDV的主要保护性抗原及抗原表位的变异位于结构蛋白VP2上。病毒多肽成熟需经二次切割,NCR可影响病毒的转录和/或翻译,VP1-VP3复合体的形成是IBDV装配的重要环节。不同毒力型的IBDV的出现除与基因突变、重组、重排有关,还可能与VP5有关,也证实了NCR与血清型的致病性无关。 相似文献
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用三种不同鸡传染性法氏囊病强毒株,对BWEL-SPF鸡群1-10个家系3周龄鸡进行敏感性试验,观察比较鸡群各家系对不同敏感性,测定不同毒株的毒价。广西强毒株(IBDV-GX株)〈LD50为10^5.0/0.2ml;湖南强毒株,LD50为10^5.2/0.2ml;吉林强毒株(IBDV-JL株),LD50为10^5.5/0.2mml,以100LD50攻毒剂量,对BWEL-SPF鸡1 ̄10家系的致死率为 相似文献
8.
传染性法氏囊病RT-PCR诊断方法研究 总被引:3,自引:0,他引:3
本文在研究传染性法氏囊病病毒的A片断cDNA结构的基础上,用Primer Design引物设计软件,在VP_5和VP_2的重叠基因区设计了一对引物,使用该引物对6种IBDV的标准毒株,10例自然发病病鸡组织标本,8例IBDV J_1C_7F_3种毒株攻毒病理法氏囊组织标本,进行了RT-PCR检测均得到了阳性的扩增结果。2种参考鸡病病毒和8例健康鸡的法氏囊组织在同样条件下进行扩增均为阴性结果。本法具有扩增方法简单,对各种病毒株的适应性广,特异性高,检测成本较低的特点。 相似文献
9.
抗鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体中和株的建立 总被引:6,自引:1,他引:5
将纯化的鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)组织毒免疫的BALB/c鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用ELISA,病毒中和试验检测分泌抗体,获得了6株稳定分泌抗IBDV单隆抗体的杂交瘤细胞,命名为NIB-1,NIB-2,NIB-3,NIB-4,NIB-5,NIB-6;6株MCAb均具ELISA特性和免疫沉淀特性,亚类鉴定表明,前4株属于IgG2a,后2株属于IgG1。杂交瘤细胞冻存6个月后复苏,均 相似文献
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抗IBDV独特型抗体疫苗的制备与应用 总被引:1,自引:1,他引:0
应用提取纯化的抗IBDVIgG免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞在PEG作用下融合,应用ELISA法检测筛选,经有限稀释法克隆2次,获得2株(2B6株,5F4株)分泌抗IBDV独特型抗体的杂交瘤细胞株,其能诱生BALB/c小鼠产生高效价的含抗IBDV独特型抗体的腹水。用此独特型抗体分别与福氏完全佐剂、福氏不完全佐剂按1∶1比例乳化制备成抗IBDV独特型抗体疫苗,免疫接种SPF鸡和普通京白公鸡,然后用IBDV野毒株经点眼和滴鼻方式攻毒,保护率分别为8/8、14/14,从而证实抗独特型抗体疫苗有潜在的研究和应用价值。 相似文献
11.
Vaccination of chickens with a recombinant fowlpox virus containing the hemagglutinin-neuraminidase gene of Newcastle disease virus under the control of the fowlpox virus thymidine kinase promoter.
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E Nagy P J Krell R A Heckert J B Derbyshire 《Canadian journal of veterinary research》1994,58(4):306-308
When chickens were vaccinated with a recombinant fowlpox virus (FPV) containing the Newcastle disease virus (NDV) hemagglutinin-neuraminidase (HN) cDNA under the control of the thymidine kinase (TK) promoter and inserted into the FPV TK gene, the FPV antibody response to the recombinant virus was similar to the response to vaccination with standard FPV, and the recombinant virus protected chickens against challenge with virulent FPV. While the presence of the NDV HN cDNA was demonstrated in the recombinant virus, which was stable on serial passage, expression of HN was not detected by hemagglutination, Western blot analysis or immunoprecipitation of infected cell lysate. Chickens vaccinated with the recombinant virus failed to mount an NDV hemagglutination-inhibition antibody response, and they did not resist challenge with velogenic NDV. It was concluded that the TK promoter was too weak to drive the HN gene, but that the insertion into the FPV TK gene did not reduce the immunogenicity of the virus. 相似文献
12.
鸡痘母源抗体对重组鸡痘疫苗免疫效果的影响 总被引:2,自引:1,他引:1
为了检测抗鸡痘病毒母源抗体对喉气管炎重组鸡痘疫苗的影响,孵化一批来自禽痘病毒高免母鸡的雏鸡,采用ELISA方法检测鸡痘疫苗免疫鸡后代的血清抗体。检测结果表明,雏鸡自孵出2d开始,血清鸡痘病毒抗体水平就开始缓慢下降,到15日龄时下降至临界值,已有部分鸡开始出现抗体阴性反应;到21日龄时,全部被检血清抗体水平均转为阴性。分别于不同日龄对试验雏鸡免疫接种重组鸡痘疫苗,结果只有当鸡体内的鸡痘病毒母源抗体全部为阴性(21日龄)后免疫时才能产生可靠的保护作用,保护率达到80%以上。这说明鸡痘病毒母源抗体对重组鸡痘疫苗的效果有一定的影响,因此重组疫苗合理的首免时间应选择在3周龄以后。 相似文献
13.
将重组鸡痘病毒vFV282疫苗用生理盐水作10^-1,10^-2,10^-3,10^-4系列稀释,分别免疫7天龄鸡,于免疫后21d,分别用NDV、IBDV和FPV攻毒,观察其保护率,结果除NDV攻毒在10^-4组保护率为40%(4/10),其余各组均为100%(10/10)保护。表明该疫苗的最小免疫剂量≤10^-3TCID50/0.02mL。 相似文献
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15.
A vaccine strain of fowlpox virus (FPV) was genetically engineered to produce avian influenza virus hemagglutinin (HA). This was accomplished by inserting a cDNA copy of the avian influenza virus HA gene, which was regulated by a vaccinia virus promoter, into the FPV thymidine kinase (TK) gene. Two types of recombinant viruses, differing only in the orientation of the HA gene relative to an adjacent foreign gene (lacZ), were created. Following preliminary identification of FPV recombinants based on the generation of beta-galactosidase (lacZ gene product), correct insertion of the HA gene into the genomes of these viruses was verified by hybridization studies. Susceptible chickens vaccinated with these FPV recombinants produced specific hemagglutination-inhibiting antibodies against the HA antigen. In view of this immune response, these viruses may serve as vaccines against avian influenza virus. In this regard, they appeared to be less virulent than the parental virus. 相似文献
16.
传染性法氏囊病病毒VP2/VP0基因在重组鸡痘病毒中的表达 总被引:3,自引:1,他引:2
以鸡痘病毒复制非必需区TK基因为侧翼,在牛痘病毒A型包涵体晚期启动子(ATI)与16个串联的突变型早期痘苗病毒p7.5启动子组成的复合启动子的下游,分别插入编码传染性法氏囊病病毒(IBDV)结构蛋白VP2和VP2-4-3(VP0)的基因片段后,进行了同源重组和蓝斑筛选,获得2株重组病毒vUTALacVP2-7和vUTALacVP0-10。经ELISA、SDS-PAGE和Westernblot检测表明,重组病毒vUTALacVP2-7能表达VP2,vUTALacVP0-10能表达VP2和VP3,VP2和VP3的Mr分别为41000和32000。 相似文献
17.
WANG Jie-qiong ZHAO Yu-jie ZHOU Yun-fei HUANG Zong-mei CHEN Pan-pan ZHOU Wei-fan LIU Lin LI Xin-sheng 《中国畜牧兽医》2017,44(12):3585-3591
This study was aimed to investigate the relationship between the virulence characteristics of infectious bursal disease virus(IBDV) C4 strain and its VP2 amino acid sequence. The RNA of IBDV C4 strain was extracted,and its VP2 gene was amplified by RT-PCR.VP2 nucleotide sequences and deduced amino acids of different virulent IBDV strains were compared. At the same time, prokaryotic expression vector pET-32a(+) was used to express the VP2 gene. The expression of recombinant VP2 protein was detected by SDS-PAGE and Western blotting. The results showed that the VP2 gene of IBDV C4 strain belonged to the very virulent infectious bursal disease virus (vvIBDV) in evolutionary relationship, the VP2 nucleotides homology between IBDV C4 strain and other vvIBDV strains were 98.1% to 98.7%, and there were no mutations in S-W-S-A-S-G-S (326-332 amino acids) and 222(A), 256(I), 294(I) and 299(S). The VP2 amino acid sequence of IBDV C4 strain was consistent with the characteristics of other vvIBDV strains. However, there were three differences amino acids sites at 201(D/G), 281(G/R) and 313(V/A) between the amino acids of the C4 strain and the very virulent strain UK661. And the change of 281(R) was in the small hydrophilic region of 279 to 290, which was related to the antigenicity of the virus; The recombinant VP2 protein molecular weight expressed in Escherichia coli BL21 was about 67 ku. This study provided a basis for further research on antigenic changes resulting from amino acid variation of 201(G), 281 (R) and 313(A). These results indicated that the VP2 gene of the IBDV C4 strain was consistent with the major characteristics of the vvIBDV strain VP2 gene. The difference of three amino acid sites in the vvIBDV strain C4 might be related to the evolution of virulence of IBDV strain in China. 相似文献
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试验旨在研究一株传染性法氏囊病病毒(IBDV)河南分离株的毒力特征及其与VP2氨基酸序列特征的关系。通过提取IBDV C4株RNA,利用RT-PCR扩增其VP2基因,与其他不同毒力IBDV毒株进行核苷酸及推导的氨基酸序列比对分析,同时使用pET-32a(+)原核表达载体表达VP2基因,用SDS-PAGE和Western blotting检测重组VP2蛋白的表达。结果显示,扩增的IBDV C4株的VP2基因序列在进化关系上属于超强毒力IBDV(vvIBDV)分类,与选取的vvIBDV毒株代表毒株核苷酸序列同源性在98.1%~98.7%之间,其七肽区为S-W-S-A-S-G-S(第326-332位氨基酸)符合超强毒株特征,且222(A)、256(I)、294(I)和299(S)位氨基酸与超强毒力毒株的4个特征性氨基酸一致;但IBDV C4毒株的VP2蛋白氨基酸序列与超强毒力毒株代表毒株UK661相比,201(D/G)、281(G/R)、313(V/A)位氨基酸不同,其中281位氨基酸的改变处于279-290的小亲水区内,与病毒抗原性有关;构建的pET-32a(+)-VP2原核表达载体在大肠杆菌BL21感受态细胞上表达出分子质量约67 ku的重组VP2蛋白,为进一步比较201(G)、281(R)、313(A)位氨基酸差异导致的抗原特性改变提供了研究基础。本试验结果表明,IBDV C4株VP2基因与vvIBDV毒株VP2基因的主要特性一致,但也有3处氨基酸与代表毒株UK661存在差异,这些改变可能与中国IBDV毒株毒力的进化有关。 相似文献
19.
为获得可用于鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)抗体检测的重组抗原VP2蛋白,根据GenBank中发表的IBDV VP2序列设计一对特异性引物,应用RT-PCR技术克隆IBDV经典标准攻毒株(BC6/85株)的VP2基因,插入质粒pET-32a中构建重组表达质粒pET-32a-VP2,经IPTG诱导后获得了以包涵体形式表达的重组蛋白。重组蛋白纯化后,Western-blot检测表明具有良好的反应原性。本研究为下步建立IBDV抗体的间接ELISA方法及新型疫苗的研制奠定了基础。 相似文献
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高效表达H9亚型禽流感病毒HA基因的重组鸡痘病毒的构建及免疫效力试验 总被引:8,自引:1,他引:8
将禽流感病毒血凝素 H9A基因克隆入插入载体 p FG11S中 ,通过酶切鉴定获得了正向转移载体 p FG11SHA;将其与禽痘病毒疫苗株 (w FPV)共转染鸡成纤维细胞 (CEF) ,通过蓝白斑筛选纯化得到重组病毒 r FPV- Ps- HA;以间接免疫荧光法证实 HA基因得到了表达。将该病毒经颈部皮下免疫 1日龄 SPF鸡 ,免疫后 15 d以 H9亚型禽流感病毒 F株翅静脉攻毒 ,攻毒后第 5天采集泄殖腔棉拭子样品进行病毒分离。将此重组病毒与以痘苗病毒 P7.5启动子表达相同基因的重组病毒 r FPV- P7.5 - HA作比较 ,结果表明 ,r FPV- Ps- HA相对于 r FPV- P7.5 - HA明显抑制了病毒的排出 ;攻毒后第 2、5、7、9、11天分别对 r FPV- Ps- HA、油乳剂灭活苗免疫鸡进行泄殖腔、气管排毒规律的检测 ,发现疫苗组均能很好地抑制排毒 ,攻毒对照组泄殖腔的排毒率明显高于气管排毒率 相似文献