呼吸型IBV-M41血凝抗原的研制与应用

利用A型魏氏梭菌滤液处理100倍浓缩的IBV-M41株病毒液,成功研制出IBV血凝抗原,HA效价为1∶256～1∶1024,且仅与IBV阳性血清发生反应,而不与其它标准阳性血清反应。建立了IBV的血凝抑制(HI)反应条件,以梅里亚公司和荷兰GD公司生产的IBV商品血凝抗原作为对照,对免疫鸡和SPF鸡血清进行了抗体测定,检测结果无明显差异,且HI检测结果与IDEXX诊断试剂盒的结果符合率为94.2%。研究表明:本实验所建立的方法敏感性高、特异性强,适合于SPF鸡监测和IB疫苗免疫效果检测。     

鸡传染性支气管炎病毒(M41株)血凝抑制试验抗原的制备及检验

用传染性支气管炎病毒(IBV)M41株毒种接种11日龄鸡胚,收获感染鸡胚病毒液,将新鲜的病毒液用小型盒式超滤浓缩系统浓缩,然后用高速离心机离心,去上清,沉淀用原病毒液体积1/100的HA缓冲液悬浮,制备出100倍浓缩的IBV病毒液;将100倍浓缩的IBV病毒液中加入15%^20%的A型魏氏梭菌滤液,充分混匀,放37℃恒温振荡器感作2h,取出置2-8℃条件下48 h.制备出了5批IBV M41株HI杭原.检验结果显示:5批HI抗原的性状均为白色混浊液体,底部有少量沉淀;无菌检验为阴性,HA效价为1:128～1:512,5批杭原与IB阳性血清呈阳性反应,HI效价为81og2,而与阴性血清、新城疫阳性血清、H9亚型禽流感阳性血清、H5亚型禽流感阳性血清及产蛋下降综合征阳性血清呈阴性反应,HI效价低于21og2.各项检验结果均符合要求.     

提高鸡传染性支气管炎病毒血凝抗原滴度途径及抗原灭活

将７株传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）标准株（Ｍ４１、Ｈ１２０、Ｈｏｌｔｅ、Ｇｒａｙ、Ｃｏｎｎｅｃｔｉｃｕｔ、Ｉｏｗａ６０９和Ｔ株）和６株分离株（ＮＩＢＶ、ＧＩＢＶ、Ｍ、ＳＨ、Ｊ和Ｈ株）分别接种于鸡胚，收获尿囊液，经浓缩后，用魏氏梭菌培养液处理，制备血凝抗原。其中，Ｈ１２０株血凝滴度最高，Ｔ、Ｍ、Ｊ和Ｈ株无血凝性。应用含有不同滴度ＩＢＶ母源抗体的鸡胚增殖病毒制备抗原，效价与用ＳＰＦ鸡胚增殖病毒制备的抗原效价一致。尿囊液经反复冻融后再制备抗原会使血凝价降低。抗原分别用甲醛、高碘酸钠、硼氢化钾和ＳＤＳ灭活，其中甲醛灭活效果最理想。抗原对氯仿敏感，对乙醚稳定。适宜浓度的Ｎａ＋、Ｍｇ２＋可显著提高抗原的血凝性     

血凝、血凝抑制实验在生产中的应用详解

1血凝实验(HA)、血凝抑制实验(HI)简介一些禽病病毒如新城疫病毒、流感病毒、传染性支气管炎病毒(经浓缩和酶处理后)、腺病毒127株及几种支原体具有凝集红细胞的活性(血凝素-神经酸酶HN蛋白与红细胞表面受体结合)。这种红细胞凝集现象可被特异性免疫血清所抑制,即血凝抑制实验(HI)。用该实验可检测鸡体注苗后抗体应答水平及证实是否曾受感染。HI实验的基本成分是血凝(HA)抗原,系列稀释的血清和红细胞悬液(0·5%~1·0%)。实验可在小试管或微量板(96孔V型板)中进行。生产中一般多用固定抗原稀释血清法(β-法),而很少用固定血清稀释抗原…     

鸡传染性支气管炎微量血凝抑制试验方法的研究

用胰酶处理鸡传染性支气管炎病毒(IBV)制成血凝(HA)抗原,HA＝1:16384,用此抗原建立了微量血凝抑制试验(HI)方法检测IBV阳性血清。IBV阳性血清鸡胚病毒中和试验(NT)结果与HI效价呈正相关,相关系数r＝0.29,HI效价达1:8以上可保护鸡胚抵抗200个MLD的IBV攻击,表明HI抗体是保护性抗体,该方法具有较大的实用价值。     

鸡产蛋下降综合症病毒快速纯化及其多抗血清制备

为研制鸡产蛋下降综合症病毒(EDS-76)检测用标准抗原及标准多抗血清,以EDS-76国际通用毒株AV-127株为抗原,进行了EDS-76病毒抗原纯化及多抗血清制备。研究表明,经氯仿抽提,并经PEG浓缩处理病毒的尿囊液可获得良好的纯化效果,纯化病毒背景干净,血凝效价达19Log2。以此研制出的鸡抗EDS-76多抗血清血凝抑制效价达13Log2,间接免疫荧光效价达1∶2000,Western-blot试验分析表明该多抗血清可以识别两个分子大小在50 kD至85 kD之间的蛋白抗原,HI及IFA试验发现所制备的特异性,多抗血清与12种常见禽病病原(NDV、AIV-A、ALV-J、ALV、GPV、REV、MDV、IBV、CAV、IBDV、TMUV、REOV)均不反应。本研究建立的快速简便的EDS-76病毒纯化方法以及获得的抗EDS-76多抗血清,为进一步研制EDS-76标准抗原以及标准多抗血清提供了有效的方法与材料。     

鸡产蛋下降综合症病毒快速纯化及其抗血清制备

为研制鸡产蛋下降综合症病毒（ EDS-76）检测用标准抗原及标准多抗血清,以EDS-76国际通用毒株AV-127株为抗原,进行了EDS-76病毒抗原纯化及多抗血清制备。研究表明,经氯仿抽提,并经PEG浓缩处理病毒的尿囊液可获得良好的纯化效果,纯化病毒背景干净,血凝效价达19Log2。以此研制出的鸡抗 EDS-76多抗血清血凝抑制效价达13Log2,间接免疫荧光效价达1∶2000,Western-blot试验分析表明该多抗血清可以识别两个分子大小在50 kD至85 kD之间的蛋白抗原,HI及IFA 试验发现所制备的特异性,多抗血清与12种常见禽病病原（ NDV、AIV-A、ALV-J、ALV、GPV、REV、MDV、IBV、CAV、IBDV、TMUV、REOV）均不反应。本研究建立的快速简便的EDS-76病毒纯化方法以及获得的抗EDS-76多抗血清,为进一步研制EDS-76标准抗原以及标准多抗血清提供了有效的方法与材料。     

鸡传染性支气管炎病毒血凝抑制试验抗原的研制

为应用血凝抑制(HI)试验检验鸡传染性支气管炎疫苗免疫效力(血清、卵黄抗体水平),建立了鸡传染性支气管炎病毒HI试验抗原的制备方法。该方法是通过选取抗原谱最广的鸡传染性支气管炎病毒(IBV)M41株,经SPF鸡胚增殖培养36h后无菌收取鸡胚尿囊液,4℃、12 000r/min离心10min,上清用聚乙二醇(PEG)20000浓缩100倍;兔源A型产气荚膜梭菌中国标准株(C57-1株)37℃增殖培养18h,4℃、12 000r/min离心10min取上清,经PEG 20000透析袋浓缩5倍后通过0.20μm滤膜过滤除菌,然后将IBV液和A型产气荚膜梭菌菌液(含α毒素)二者按一定比例混合后经37℃恒温振荡感作2h,4℃经48h后制成。经大量试验表明,制备的IBV HI试验抗原效价高、稳定性好,可替代进口抗原应用于鸡群IBV疫苗免疫后血清抗体及卵黄抗体的HI效价检测。     

不同鸡传染性支气管炎疫苗毒株对新城疫La Sota株的增殖干扰试验

为观察IBV不同疫苗毒株H120、H52、4/91、28/86、Ma5及W93株对NDV增殖的干扰作用,采用不同浓度的IBV疫苗毒株与NDV La Sot a毒株分别按不同顺序接种,同胚增殖。利用血凝试验(HA)测定NDV效价,以判断IBV对NDV的干扰作用,为同胚增殖两种病毒提供参考数据。试验结果表明,IBV不同疫苗毒株能干扰NDV La Sot a增殖,干扰作用与其接种顺序、接种浓度及收毒时间有关。     

鸡新城疫诊断抗原制备方法的研究

将疑似新城疫病料无菌采集后进行RT-PCR鉴定,将阳性病料研磨后接种SPF鸡胚,收获的阳性尿囊液进行血凝试验(HA)及血凝抑制试验(HI)检测病毒效价,病毒效价达到2~7~2~8,病毒凝集效价达到10log2。使用10%蔗糖溶液及18-25k Da透析袋对阳性尿囊液进行浓缩,浓缩至原体积的1/5;10%福尔马林灭活诊断抗原,经过6h后灭活达100%;诊断抗原效价测定:血凝效价为2~(10);血凝抑制效价为10log2。利用制备的鸡新城疫诊断抗原和鸡新城疫标准诊断抗原与鸡新城疫标准检测抗体进行血凝试验(HA)与血凝抑制试验(HI),对比结果:鸡新城疫诊断抗原病毒效价为2~(10),高于鸡新城疫标准诊断抗原的2~9,鸡新城疫诊断抗原凝集效价为10log2,等同于鸡新城疫标准诊断抗原,证明所制备鸡新城疫诊断抗原符合要求,可以应用到生产实践中。     

A型产气荚膜梭菌滤液的质控标准研究

制备鸡传染性支气管炎病毒(IBV)血凝抑制试验抗原需用到A型产气荚膜梭菌滤液,拟建立A型产气荚膜梭菌滤液的质控标准。对29批A型产气荚膜梭菌滤液进行小鼠致死性、卵磷脂酶活性、处理IBV后其血液凝集活性和滤液最小加入量试验。结果显示,不同批滤液的小鼠最小致死量(MLD)及卵磷脂酶效价之间存在较大差异,但两者之间存在正相关关系,而这两者与处理后IBV的HA活性没有明显的相关关系。试验证明以小鼠最小致死量或卵磷脂酶效价作为滤液质控标准不可行,而以处理后IBV的HA活性作为滤液的质控方法,该方法简单可靠,可直接反映滤液使IBV产生血凝活性的能力。     

鸡传染性支气管炎病毒血凝抑制试验研究

用A型魏氏梭菌滤液处理鸡传染性支气管炎病毒(IBV)M41株,使其产生血凝性,成功建立IBV血凝抑制试验方法(IBV-HI).血凝效价为1:256～1:1024.抗原在2～8℃的保存期至少为5个月.用该抗原对IBV标准阳性血清、SPF鸡血清、其它鸡病标准阳性血清以及含M41株病毒的灭活苗免疫的鸡血清进行检测,证明IBV-HI试验具有很好的特异性.结果表明,该方法简便、快速、特异性强,可用于疫苗质量控制和疫苗免疫效力测定.     

鸡腺胃型IBV分离株血凝特性初探

从不同发病地区患鸡传染性腺胃病的鸡中分离出４株病毒，选择Ｈ９５和Ｓ９６两株流行株，采用胰蛋白酶和卵磷脂酶Ｃ处理，在不同条件下测定其血凝性，试验表明：用２％胰蛋白酶３７℃处理０．５小时后的病毒株对鸡的红细胞凝集价高达２１４，这种血凝性不能被抗Ｈ９５毒株的单克隆抗体、鼠、鸡特异性抗血清所抑制。经４单位／ｍｌ卵磷脂酶Ｃ３７℃处理３小时后血凝价可达２９，而能被相应的特异性单克隆抗体、鼠、鸡抗血清所抑制。     

盒式超滤系统对四联苗中NDV及IBV的浓缩试验

采用Filtron中型盒式超滤系统，对新城疫病毒（NDV）抗原液和NDV与传染性支气管炎病毒（IBV）混合抗原液进行浓缩试验，结果显示，浓缩抗原液的HA效价按浓缩比率成倍上升，而超滤液的HA为阴性，以浓缩抗原液，未浓缩抗原液及超滤液为水相，分别制成NDV浓缩油苗，NDV未浓缩油苗，四联浓缩苗，四联未浓缩油革以及超滤液乳剂，分别对久．鸡免疫后，NDV浓缩苗与未膛缩苗免疫鸡均产生了对NDV强毒攻击的抵抗力，保护率达100％，而NDV浓缩苗诱导产生的HI抗体效价明显高于未浓缩苗；比较浓缩四联苗与未浓缩四联苗的免疫效力，当2种疫苗注射剂量不同而抗原量相同时，诱导产生的免疫效力相同；浓缩苗与未浓缩苗效价测定及超滤液乳剂免疫试验结果证实，浓缩过程中既无有效抗原丢失，也无抗原活性变化，试验结果显示，该设备浓缩工艺简单，抗原回收率达100％，是一种理想的病毒浓缩齐备。     

猪传染性胃肠炎病毒的血凝作用

将猪传染性胃肠炎病毒Ａ株在ＩＢＲＳ２细胞上增殖，增减物经差速离心浓缩后与鸡红细胞出现了高凝集价。这种凝集作用能被兔抗ＴＧＥＶ高免血清所抑制。试验的最适反反应体积分数０．５０％红细胞４℃作用１ｈ。通过反复建立了一种简单实用的血凝抗原制备方法，病毒增减液不需浓缩可直接应用。     

鸡腺胃型IBV分离株血凝特性初探

从不同发病地区患鸡传染性腺胃病的鸡中分离出４株病毒，选择Ｈ９５和Ｓ９６两株流行株，采用胰蛋白酶和卵磷脂酶Ｃ处理，在不同条件下测定其血凝性，试验表明：用２％胰蛋白酶３７℃处理０．５小时后的病毒株对鸡的红细胞凝集价高达２＾１４，这种血凝性不能被抗Ｈ９５毒株的单克隆抗体、鼠、鸡特异性抗血清所抑制。经４单位／ｍｌ卵磷脂酶Ｃ３７℃处理３小时后血凝价可达２＾９，而能被相应的特异性单克隆抗体、鼠、鸡抗血清所抑制     

鸽Ⅰ型副粘病毒的分离与鉴定

采用鸡胚接种的方法从病死鸽中分离到了一株病毒，其血凝效价（HA）平均为2^8，该病毒株能凝集鸡红细胞的作用可被新城产凤标准阳性血清所抑制，所分离的病毒株Ⅰ型副粘病毒，该病毒对1日龄雏鸡脑 内致死指数（ICPI）为0.39,肌肉注射1日龄雏鸡不发病，该毒株对雏鸡和鸡胚来说为弱毒力株。用30日龄的幼鸽做人工发病试验时可复制此病，并使其HI平均抗体滴度由第15d的2.9log2上升到第25d的7.25log2。     

NDV地方分离株与La Sota株抗原交叉性研究

用新城疫弱毒疫苗株La Sota阳性血清测定NDVMM,NDVLD,NDV-NH3株新城疫病毒地方分离株和标准株La Sota,F48E9的HI效价,以La Sota阳性血清对La Sota疫苗株的HI效价为参照,分析NDV地方分离株与疫苗株抗原交叉性。结果表明,NDV-MM,NDV-LD 2个野毒株HI效价与NDV-LD HI效价相近,但比La Sota HI效价低2．3个～2．7个滴度;NDV-NH与F48E9 HI效价相近,比La SotaHI效价低4．2个～4．3个滴度,提示以上3个野毒株与疫苗株之间的抗原相关性差异较大。动物免疫保护试验结果表明,经La Sota免疫（HI效价〉2^5）后攻毒保护率为80％-100％。     

鸡腺胃型传染性支气管炎及大肠杆菌病二联灭活油乳剂苗的研制和应用

用本地分离株及标准株筛选出 4个IBV强毒株 (呼吸型和腺胃型 )及 7个E .coli强毒菌株 (血清型为O1 、O2 、O78) ,作为制苗基础毒株和菌株 ,并加入发病鸡场的自家分离株 ,作为制苗毒种和菌种 ,并将制成灭活的尿囊液和菌液以及油佐剂配成鸡腺胃型传染性支气管炎及大肠杆菌病二联灭活油乳剂苗。试验证明 :二免后 10个月攻毒保护率达 10 0 % ,IBV抗体的HI价为 1∶2 5 6 ,E .coli抗体直接凝集价为 1∶12 8。     

我国H9N2亚型禽流感病毒血凝素蛋白145和153位抗原位点变异分析

H9N2亚型禽流感病毒(AIV)血凝素蛋白(HA)易发生抗原漂移,但识别我国H9N2亚型AIV流行株抗原差异性的关键抗原位点还不清楚.选取两株血凝抑制(HI)效价高的H9N2亚型AIV单克隆抗体2E4与2D6对A/Chicken/Shanghai/F/1998(H9N2)毒株施加抗体压力制备单抗逃逸突变株,鉴定抗原位点...