广东地区鸽禽Ⅰ型副黏病毒分离株生物学特性研究

鸽禽Ⅰ型副黏病毒(Avian ParamyxovirusType Ⅰ,PA/PMV-Ⅰ)感染,因其病原及症状均与鸡新城疫(ND)十分相似,通常又称之为鸽新城疫,或鸽瘟,是鸽的一种急性烈性传染病.近年来我们从广东的深圳、东莞、广州市郊等地区发病鸽群中分离并鉴定到23株禽Ⅰ型副黏病毒,对其中6株病毒进行生物学特性研究.     

鹅源禽Ⅰ型副黏病毒的分离与鉴定

鹅副黏病毒是鹅的一种烈性传染病,该病使10日龄以内的雏鹅发病率和病死率均达到100%,平均发病率和病死率分别为27.7%和18.2%.     

禽Ⅰ型副黏病毒各种禽源分离株对4种禽类的致病性

选取从临床感染禽Ⅰ型副黏病毒（APMV-1）的鸡、鹅、鸽、鹌鹑、珍珠鸡、孔雀、画眉鸟等7种禽类病例分离到的9个代表性毒株，分别对鸡、鹌鹑、鹅和鸽进行了人工感染试验。结果，除鸽源毒株gxp22对鸡和鹅无致病力外，其他8个分离毒株对鸡、鹌鹑和鹅都有较强的致病力，死亡率为60％～100％，试验鸡表现的症状和病理变化特征最明显，鹅的比较明显，鹌鹑的则最不明显；3个鸽源分离株对鸽的致病力都很强，死亡率均为100％。所有毒株对4种禽类的致病性与其临床特征相符。研究结果表明，试验所用的9个分离株除鸽源分离株gxp22外，均为泛嗜性的新城疫强毒株。     

一株Ⅰ型鸽副黏病毒的分离与鉴定

2011年,江苏某鸽场饲养的美国白羽王鸽,4倍剂量饮水免疫新城疫La Sota株活疫苗,2个月后部分鸽出现食欲不振、呼吸困难、水样腹泻、颈部歪斜、瘫痪以及颈翅颤抖为主要特征的疫病,鸽群整体发病率在40％左右,死亡率达到30％.采集肺脏、脾脏、肝脏等组织进行病毒的分离鉴定,最终确认该病毒为Ⅰ型鸽副黏病毒(PPMV-1).     

两株鸽Ⅰ型副黏病毒的分离与鉴定

临床采集的发病鸽组织处理后经绒毛尿囊膜接种10日胚龄SPF鸡胚,并通过免疫学和分子生物学方法进行病原鉴定,确定分离到2株鸽Ⅰ型副黏病毒。结合免疫学试验和分子生物学试验对分离株研究发现,分离病毒与鸽新城疫病毒参考株处于同一个遗传进化分支,核苷酸序列一致性为89.6%~94.5%,分离株F蛋白裂解位点的氨基酸序列与新城疫强毒一致。表明在我国鸽群中仍存在高致病性新城疫病毒。研究结果为鸽瘟的防控提供了一定的理论基础。     

1株鸽Ⅰ型副黏病毒的分离与鉴定

本试验采集病死鸽临床样品,用SPF鸡胚接种传代分离病毒后,通过血凝（HA）与血凝抑制（HI）试验、RT-PCR及F基因部分片段测序与分析对分离株进行鉴定,并通过测定鸡胚平均死亡时间（MDT）、1日龄雏鸡脑内接种致病指数（ICPI）和动物回归试验评估分离株的毒力和致病性。结果表明,从病鸽组织病料中分离获得1株鸽Ⅰ型副黏病毒（PPMV-1）,命名为GXP120012。分离株GXP120012的F基因裂解位点112－117位的氨基酸组成为R-R-Q-K-R-F,符合强毒株特征;GXP120012与PPMV-1参考毒株pi/CH/LLN/110713的核苷酸序列同源性高达98.9%,并处于同一遗传分支,基因型为Ⅵ型。该分离株的MDT为102 h,ICPI为0。动物回归试验发现,分离株GXP120012对鸽具有较强的致病性,而对鸡没有致病力。本试验结果为今后鸽新城疫的分子流行病学研究和疾病防控提供理论依据。     

F一Ⅶ型鹅源禽副黏病毒的分离及其特性研究

从辽宁省某鹅场雏鹅体内分离到1株副黏病毒，该分离毒株具有血凝活性且血凝活性能被NDV标准阳性血清和鹅副黏病毒阳性血清所抑制，能使SPF鸡胚、非免疫鸭胚和鹅胚100％死亡；电镜观察见病毒颗粒呈多形性，多为圆形，有囊膜，直径200nm左右；ELD500为10^8.6／mL，MDT为56h，ICPI为1．94。通过RT—PCR扩增出F基因，鉴定为基因Ⅶ型强毒株，测序结果为HBS209，与CH2000的同源率为91．8％，从而确定分离毒株属于禽副黏病毒Ⅰ型(APMV—Ⅰ)的基因变异强毒株。动物接种试验表明，该毒株对鸭无致病性，对鹅、鸡、鸽的致病率和致死率均达100％。     

一株鸭源副黏病毒的分离鉴定

2010年8月,湖北某种鸭场免疫过禽流感、产蛋下降综合征疫苗的产蛋鸭出现产蛋下降症状,1周内产蛋率锐减50%左右,发病率达30%,有轻微的呼吸道症状,腹泻,或产软壳蛋、畸形蛋、沙壳蛋等劣质蛋,成年鸭几乎无死亡,青年鸭死亡率10%.剖检病鸭发现肝脏有坏死,脾脏肿大,脑组织表面有点状出血,气管环出血,肺脏有出血性或纤维素性炎症,有典型的卵黄性腹膜炎症状.发病初期投喂各种抗生素疗效不明显,初步怀疑为副黏病毒感染.现将该病毒的分离鉴定情况报道如下:     

一株鸭副黏病毒的分离鉴定

2006年3月中旬,山东省东营市广饶县一养殖厂所养的20日龄肉鸭,发生了一种以高度呼吸困难、肿头、流泪、甩鼻、折颈、软脚、排黄绿色稀便、肠道溃疡及肝脏肿大、出血、坏死为主要特征的疾病.在不到1个月的时间内迅速蔓延至周边数十个县市,发病情况严重.     

鸽Ⅰ型副黏病毒的分离鉴定及生物学特性研究

利用SPF鸡胚传代的方法从北京、天津病死鸽的脑组织中分离到两株病毒,研究证实两株病毒能凝集鸡红细胞,且这种凝集效应能被鸡新城疫标准阳性血清所抑制。通过动物回归试验、EID50、MDT、ICPI、IVPI及其他生物学特性试验,证实两分离株均为鸽Ⅰ型副黏病毒中等毒力毒株,分别命名为L18、TJ11株,分离毒株对8周龄鸽有很强的致病性。用2个毒株制备的油乳剂灭活疫苗进行免疫保护实验,结果显示两个分离株之间具有较好的交叉保护性,为该病的疫苗防制奠定了基础。     

禽Ⅰ型副黏病毒不同禽源株P基因编码蛋白的分子特征分析

采用RT-PCR技术对禽Ⅰ型副黏病毒鸡源分离株(WF00C)、鹅源分离株(WF00G)和鸽源分离株(WF00P)P基因进行了克隆和序列分析。结果表明:这些毒株的P基因最大ORF的长度均为为1188bp,编码395个氨基酸。P蛋白同源性和系统发育分析显示,WF00C株和WF00G株与NA-1、ZJ1、FP1/02、PX2/03、Duck/1/05、SP02和SRZ03的同源性较高,WF00P株与意大利鸽源分离株IT-227/82、2736/00和法国鸽源分离株99106、99299的亲缘关系较近,而且WF00C株、WF00G株和WF00P株均与传统疫苗株或弱毒株HB92、LaSota、Clone30和B1以及国内标准强毒株F48E9的遗传距离较大,这预示目前流行的APMV-1已经发生了较大程度的变异。V蛋白羧基端氨基酸比对分析发现,APMV-1V蛋白的特有序列有较高的一致性,即氨基酸序列(132KKG134)和V蛋白羧基端的5个Cys残基位点在所有的毒株中是高度保守的,但在138～170位和201～240位存在较大的变异,APMV-1毒株V蛋白羧基端氨基酸的突变呈现"基因型一致性"。     

雏番鸭基因IX型禽1型副黏病毒分离鉴定及F基因序列分析

自发病死亡雏番鸭中分离到一株(XBT14株)基因Ⅸ型禽1型副黏病毒,该病毒可引起雏鸭明显神经症状及急性死亡,致死率达44.4%;病毒融合(F)蛋白裂解位点处具有强毒株特有的多碱性氨基酸序列(112RRQRR↓F117),与Gen Bank数据库中已发布的基因IX型毒株核苷酸序列同源性高达99.7%~99.9%,与基因VII型毒株核苷酸序列同源性为85.5%~86.6%。该分离株与近来报道的GD09-2等基因IX型毒株处于同一进化分支。以上结果表明对水禽致死性的禽1型副黏病毒呈现基因型多样性,水禽禽1型副黏病毒病的防控日益严峻。     

一株广西鸽Ⅰ型副黏病毒的分离鉴定及F基因序列分析

为了确定鸽Ⅰ型副黏病毒(PPMV-1)分离株的基因型及遗传变异,试验对广西某鸽场疑似感染PPMV-1的临床样品进行RT-PCR诊断、病毒分离鉴定和人工感染试验,并对分离株进行F基因测序、相似性分析及构建遗传进化树。结果表明:临床样品经RT-PCR扩增可得到特异性目的条带,病毒分离株具有血凝活性并能被特异性新城疫(ND)阳性血清抑制。分离株能引起非免疫鸽发病,发病率和死亡率分别为100%和10%。对分离得到的PPMV-1(命名为pi/CH/GX1026/2016)进行序列分析,该分离株F蛋白的裂解位点为~(112)RRQKR↓F~(117),符合新城疫病毒(NDV)强毒株的特征。pi/CH/GX1026/2016分离株与毒株Grey heron/Ch/GD/GZ333/2015和European turtle dove/Ch/GD/GZ23/2015核苷酸和氨基酸相似性较高,核苷酸相似性分别是99.6%和99.4%,氨基酸相似性分别是99.3%和98.9%;与疫苗株La Sota核苷酸和氨基酸相似性较低,分别是83.8%和88.3%。分离株与基因Ⅵ型NDV毒株Grey heron/Ch/GD/GZ333/2015和European turtle dove/Ch/GD/GZ23/2015遗传关系亲近,与基因Ⅱ型疫苗株La Sota的遗传关系较远。说明pi/CH/GX1026/2016分离株为基因Ⅵ型的PPMV-1,该毒株与NDV常用疫苗株La Sota的遗传关系较远。     

鸽副黏病毒Ⅰ型(川沙株)的分离与鉴定

利用SPF鸡胚培养法从上海川沙某具有典型新城疫症状和病理变化的高死亡率发病鸽场的死亡鸽体内分离到一株病毒.对该病毒E5代尿囊液进行病原学鉴定、RT-PCR鉴定、理化特性测定、致病指数、病毒血清学试验及鸽体致病性试验,结果显示该病毒具有血凝性,且血凝特性可被新城疫病毒参考阳性血清所抑制,而不能被减蛋综合征病毒、禽流感病毒（H5、H9和H7）阳性血清抑制;该病毒对氯仿、乙醚和酸敏感;致病指数分别为：最小致死量鸡胚平均死亡时间为55.2 h,1日龄雏鸡脑内致病指数为1.8,6周龄雏鸡静脉致病指数为2.39.经鉴定,该分离毒株为鸽副黏病毒Ⅰ型强毒株,将其命名为鸽副黏病毒Ⅰ型（川沙株）.     

贵州省鹅副黏病毒分离株的病原学特性鉴定

鹅副黏病毒D1分离株能致死鹅胚、鸭胚和鸡胚,致死率达到100%,感染的尿囊液能产生较高的血凝效价.血凝素对热不稳定,经56℃水浴处理10min血凝活性消失.副黏病毒感染鹅血清与D1分离株和La Sota毒株均发生血凝抑制现象,大多数血清样本对2株病毒的HI效价存在两个以上的滴度差异.病毒粒子呈球形、椭圆形、杆状或棒状,呈现显著多形性的特征.D1分离株ELD50经测定为10-7.84/0.1 mL,油乳剂灭活疫苗接种鸡能够抵抗20000ELD50病毒的攻击,免疫保护率达到88.9%.     

鸭源禽4型副黏病毒的分离鉴定及致病性研究

为探究鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)感染鸭群是否存在病毒与RA共感染的情况,试验采用鸭胚尿囊腔接种、盲传的方法从一例感染RA的肉鸭病例中分离到一株禽4型副黏病毒(APMV-4),通过动物回归试验初步探索了该病毒对雏鸭的致病性.结果 显示:分离毒株具有血凝性,其F基因遗传进化分析...     

广东鸽禽Ⅰ型副黏病毒基因Ⅶ型的分离鉴定

2007年在广东某发病鸽群中分离到一株鸽禽Ⅰ型副黏病毒（GM01）．经测定,其鸡胚平均死亡时间（MDT）为76h,鸡脑内接种致病指数（ICPI）为1．3,在鸡和鸡胚上为中等毒力病毒。应用RT—PCR对F基因片段进行扩增并测序,结果表明该F蛋白裂解位点处氨基酸序列为112R—R—Q—K—R—F 117,是典型的强毒株序列。用DNASTAR软件对GM01株F基因片段与国内外相关的NDV参考株进行比较,结果表明GM01株与Chicken／Gx／14／2005株的核苷酸和氨基酸相似性分别为98．6％和98．4％;与Pigeon-Gxp40毒株核苷酸和氨基酸相似性分别为98．5％和98．7％,在遗传进化树中位于同一个分支,同属于基因Ⅶ型;与国内代表性弱毒疫苗株LaSota毒株和NDV强毒株F48E9的核苷酸及氨基酸相似性分别为84．1％和86．5％及86．3％和88．0％。     

鸽Ⅰ型副黏病毒HT40克隆株的筛选及其生物学特性鉴定

鸽Ⅰ型副黏病毒病是由鸽Ⅰ副黏病毒(PPMV-1)引起的一种高度接触性传染病,是危害养鸽业的主要疫病之一。PPMV-1与鸡的NDV具有一定的同源性,有一定的血清学交叉反应,在没有得到鸽PPMV-1疫苗的情况下,使用鸡的ND疫苗对PPMV-1有一定的免疫效果;不过由于PPMV-1在鸽体内传代,已成为适     

一株鹅副黏病毒的初步分离及鉴定

试验从疑似鹅副黏病毒感染的雏鹅肝、脾中分离到一株病毒,经鸡胚培养试验、血清学检测、特异性试验、RT-PCR测定,初步证明该分离株为鹅副黏病毒。该毒株的成功分离为鹅副黏病毒病的进一步研究奠定基础。