牛乳中嗜冷假单胞菌胞外蛋白酶的研究进展

假单胞菌通常被认为是危害原料乳及其制品的主要嗜冷菌,其分泌的胞外蛋白酶具有耐热性,甚至能在超高温灭菌处理后仍有活性残留,并减短超高温灭菌乳的货架期.本文对来自牛乳中的嗜冷假单胞菌蛋白酶的研究进展做了总结,重点假单胞菌蛋白酶的催化机制研究进展,相关基因包括蛋白酶基因apr X在假单胞菌鉴别中的应用研究进展.最后讨论了嗜冷假单胞菌蛋白酶需要深入研究的方向.     

绵羊瘤胃微生物胞外蛋白酶性质的研究

本试验测定了pH、温度和EDTA对纯化的绵羊的瘤胃微生物胞外蛋白酶活性的影响,并用一已知氨基酸排列顺序的肽段(由15个氨基酸组成)作为底物,进一步测定了蛋白酶的酶切位点。结果表明,(1)纯化蛋白酶的最适pH在6.0～6.5之间,最适温度为40℃左右。(2)不同浓度的EDTA(浓度分别为1,10,25,50,75和100mM)对蛋白酶活性没有影响,因而该酶属于丝氨酸蛋白酶类。(3)纯化蛋白酶是一种内肽酶,其酶切位点在组氨酸—酪氨酸(?)、天冬氨酸—丙氨酸(?)、亮氨酸—赖氨酸(?)和(或)缬氨酸—赖氨酸(?)相连的肽键。(4)胰蛋白酶和纯化的蛋白酶虽同属丝氨酸蛋白酶类,但前者对底物具有高度的专一性,后者对底物的专一性不强,这是瘤胃内饲料蛋白质强烈降解的主要原因之     

鸡源大肠杆菌胞外蛋白酶的检测

用脱脂奶琼脂平板法检测了 1 0 0株大肠杆菌的胞外蛋白酶。结果 ,在 88株鸡源株中 ,阳性者为 2 2株( 2 5%) ,1 2株参考株中有 3株为阳性 ( 2 5%) ,显示较高比例的大肠杆菌产生胞外蛋白酶这一致病因子。另外 ,用嗜水气单胞菌 J-1株的胞外蛋白酶 ( ECPase54)抗血清作 Dot-ELISA,检测上述 1 0 0株大肠杆菌 ,3株鸡源株表现阳性 ,其脱脂奶琼脂平板法检测结果亦为阳性。     

嗜水气单胞菌不同分离株生化特性及胞外蛋白酶的检测

嗜水气单胞菌可引起多种宿主患病,该菌致病性与其产生的多种毒力因子特别是胞外蛋白酶有关。本研究检测了26株嗜水气单胞菌不同分离株的生化指标,采用脱脂乳平板法检测了胞外蛋白酶的产生情况,并利用PCR技术检测了2种胞外蛋白酶基因ahp-A(编码丝氨酸胞外蛋白酶)和eprCAI(编码温敏胞外蛋白酶)。结果表明,大部分菌株生化指标表现为蔗糖(+)、阿拉伯糖(+)、葡萄糖(+)、甘露醇(+)、鸟氨酸脱羧酶(-)、肌醇(-)、七叶苷(+);脱脂乳平板法检测发现,91.7%(22/24)的致病菌株均能产生胞外蛋白酶,而2株无毒株则不能产生,对2个胞外蛋白酶基因的检测也得到相似的结果。本研究将为嗜水气单胞菌的流行病学调查和致病机制的深入研究奠定基础。     

蜜蜂球囊菌胞外蛋白酶活性与菌株毒力关系的研究

为了探讨蜜蜂球囊菌(Ascosphaera apis)胞外蛋白酶活性(PU)与其毒力的关系,评价胞外蛋白酶活力作为毒力指标的可靠性。本研究测定了9个不同来源地的蜜蜂球囊菌菌株的胞外蛋白酶活性及接种后各日累积蜜蜂幼虫死亡率和致死中时(LT50),将胞外蛋白酶活性与接种后各日累积死亡率及致死中时(LT50)进行回归分析,以确定胞外蛋白酶活性与其对蜜蜂幼虫的毒力间的相关性。结果表明各菌株胞外蛋白酶活性与其毒力间的存在显著相关性。因此,蜜蜂球囊菌胞外蛋白酶活性可作为大量菌株筛选的参考毒力指标,但不能作为测定相关性的唯一指标。     

猪霍乱沙门菌胞外产物的核酸酶活性及其对巨噬细胞胞外诱捕网形成的影响

旨在探究猪霍乱沙门菌胞外产物的核酸酶活性及其对巨噬细胞胞外诱捕网形成的影响.采用平板培养法、琼脂糖凝胶电泳法和琼脂扩散法观察猪霍乱沙门菌胞外产物降解λDNA的活性,同时,分析不同温度、pH和金属离子对胞外产物核酸酶活性的影响以及胞外产物对巨噬细胞胞外诱捕网形成的影响.猪霍乱沙门菌胞外产物具有降解λDNA的DNA酶活性,...     

牛乳中荧光假单胞菌耐热性脂肪酶的活性影响因素

以新鲜牛乳中分离到的荧光假单胞菌为研究对象,对其分泌产生的耐热性脂肪酶进行纯化,并研究不同温度、pH值、Ca2+质量浓度对该脂肪酶活性的影响.结果表明:经过初步纯化的脂肪酶分子质量为55 kD,纯度为91.5％,并且发现该耐热性脂肪酶在50℃、30 min,63℃、30 min,72℃、20 s,90℃、10 min,121℃、0.1 MPa、20 min处理之后,相对酶活力分别为75.02％、86.21％、73.25％、17.62％、13.63％;并且该脂肪酶的最适温度为63℃,最适pH值为8.0;在荧光假单胞菌体外,Ca2+质量浓度对荧光假单胞菌脂肪酶的活力并无显著影响.     

不同基质传代白僵菌菌株胞外蛋白酶和几丁质酶产生水平与菌株对桑天牛幼虫毒力的关系

研究了对桑天牛幼虫具有不同致病力的各种传代白僵菌菌株胞外蛋白酶和几丁质酶的产生水平,并分析其与菌株致病力变化的关系。结果表明:不同基质传代菌株随着培养时间的延长,胞外蛋白酶和几丁质酶活性逐渐升高,达到最高值后基本趋于稳定,几丁质酶产生时间要滞后于胞外蛋白酶;通过寄主桑天牛幼虫传代的白僵菌菌株比通过普通查氏培养基传代的菌株具有更强的产酶能力;不同菌株胞外蛋白酶和几丁质酶产生水平与菌株毒力有一定相关性,尤其是产酶高峰值与菌株的LC50呈显著相关性,可将其作为菌株初步筛选的参考性毒力指标。     

嗜冷菌对UHT乳品质的影响研究

摘要：原料乳嗜冷菌污染是影响uHT乳保质期的重要原因之一,并且嗜冷菌分布具有地域特征性本研究对蒙牛8个牧场原料乳中的嗜冷菌进行了分离和鉴定,确定了牧场常见嗜冷菌种类及特性,并分析了其对uHT乳品质的影响．结果表明,从试验样品中分离出的嗜冷菌为假单胞菌属、微球菌属和产碱杆菌属;牧场原料乳的嗜冷菌数量与气温有关,1～3月份数量较高,6～9月份数量较低;原料乳嗜冷菌数越多,UHTqL货架期越短;原料乳中嗜冷菌数达到10^5 CFU／mL时,对uHT乳苦味值的影响显著（p〈（1．（15）;嗜冷菌脂肪酶活力达10IU／mL、蛋白酶活力为15Iu／mL、25IU／mL时对UHTSfL苦味值的影响显著（P〈0．05）;原料gLpH值为6．7和3.5％2冷藏条件下,蛋白酶、脂肪酶活性较高,不利于uHT乳长期贮存、综上研究,原料乳中嗜冷菌数过多会严重影响uHT乳品质和风味;低温贮藏条件下,嗜冷菌产生的脂肪酶和蛋白酶会破坏UHT乳品质,因此不建议长期低温保存uHT乳、     

原料乳中耐冷菌群及其产酶特点

耐冷菌及其分泌的耐热酶是原料乳中常见污染物,会导致乳制品腐败。通过16S rRNA基因测序分析了分离自上海地区原料乳的耐冷菌群,以及通过平板法研究不同耐冷菌的蛋白酶和脂肪酶活力。结果表明:所有的分离株属于9个菌纲,含33个菌属,其中数量占主要的菌属是假单胞菌(Pseudomonas)(55％)、不动杆菌(Acinetobacter)(10％)和黄杆菌(Flavobacterium)(5％),其余30个菌属占所有菌株数的30％。耐冷菌产酶能力平板法实验显示,大部分的耐冷菌都有产蛋白酶或脂肪酶的能力,不同菌属之间产酶特点存在差异。假单胞菌和黄杆菌主要表现为产蛋白酶活性,克雷伯氏菌(Klebsiella)主要表现为产脂肪酶活性,而大多数的不动杆菌没有产蛋白酶或脂肪酶活性。     

原料乳嗜冷菌分泌热稳定性酶类检测方法的研究进展

嗜冷菌是导致原料乳以及乳制品腐败的主要微生物类群。巴氏杀菌或超高温瞬时(UHT)灭菌后,几乎除去了全部的嗜冷菌,但细菌分泌的热稳定的蛋白酶和脂肪酶却并未完全钝化,进一步影响原料乳风味以及质地。测定原料奶中热稳定蛋白酶和脂肪酶的活性是控制嗜冷菌污染原料奶的前提。本文综述了原料乳中嗜冷菌分泌的热稳定性酶类的快速检测技术,比较了这些方法的优缺点,并对此领域的技术发展方向进行了展望。     

原料乳中嗜冷菌计数及产脂肪酶特性的研究

从乳中分离出产脂肪酶活力较大的菌种，该菌种属革兰氏阴性短杆菌，在Rodamine B培养基中产生较大的荧光圈，即产酶活力较大。该菌种最佳生长温度为30℃左右，最佳生长pH值为7．0左右。根据菌落形态，菌体特征及生理生化反应特征分析结果，对其进行了初步鉴定。将该菌种接入产酶培养基中，对其产酶特性进行研究发现，其最佳产酶温度为30℃左右，最佳产酶pH值为7．0左右，产酶高峰出现在接入产酶培养基后24h左右，在确定最佳产酶条件后，对不同时间测得的酶活与菌数之间的关系进行了初步探讨。     

乳酸菌发酵青贮对奶牛产奶量及乳成分的影响

利用从优质青贮饲料中分离鉴定并筛选的2株乳酸菌进行全株玉米的青贮中试试验,玉米青贮30天即可成熟。感官评定的结果表明,乳酸菌处理组的青贮饲料品质比对照组显著提高(p<0.05)饲喂添加乳酸菌的玉米青贮饲料对奶牛的产奶量没有显著影响,但是牛乳中蛋白质和非脂乳固体的含量也显著提高(p<0.05),而对乳脂肪的含量没有影响。     

乳酸菌发酵青贮对奶牛产奶量及乳成分的影响

利用从优质青贮饲料中分离鉴定并筛选的2株乳酸菌进行全株玉米的青贮中试试验,玉米青贮30天即可成熟。感官评定的结果表明,乳酸菌处理组的青贮饲料品质比对照组显著提高（P〈0．05）饲喂添加乳酸茵的玉米青贮饲料对奶牛的产奶量没有显著影响,但是牛乳中蛋白质和非脂乳固体的含量也显著提高（P〈0．05）,而对乳脂肪的含量没有影响。     

产蛋白酶乳酸菌的筛选及蛋白酶的纯化

乳酸菌已广泛的应用到酸奶和微生态制剂中.为获得具有产蛋白酶优良性能的乳酸菌种,对实验室保存的21种乳酸菌种进行产蛋白酶能力筛选,并对蛋白酶进行分离纯化.从而获得一种产蛋白酶的乳酸菌种,并将所产蛋白酶成功纯化,得到其分子质量在35 KD左右.     

酶法水解牛乳蛋白技术的研究

为获得易消化、低致敏的婴儿配方食品原料,采用胰蛋白酶水解牛乳蛋白,研究酶解过程中酶解时间、酶解温度、加酶量对乳蛋白水解度的影响。通过单因素试验设计方法,确定最佳酶解条件为:酶解时间40min、酶解温度40℃、加酶量1200U/g蛋白质。     

不同乳酸菌发酵乳对高血脂症大鼠肠道菌群的影响

试验旨在探究不同乳酸菌发酵乳对高血脂模型大鼠血脂与肠道菌群的调节作用。将体重为(120±10)g的 40 只 SD 雄性大鼠随机分为空白对照组(C 组)、高脂模型组(M 组)、L. rhamnosus LV108 发酵乳组(LV组)及混合乳酸菌(LV108 发酵乳∶grx08 发酵乳∶grx12 发酵乳=2∶1∶1)发酵乳组(H 组),每组 10 只,建模后干预(1 mL/100 g,1×108 CFU/mL)4 周,测定大鼠血脂及大鼠粪样细菌 16S rDNA 的 V3-V4 区,并对大鼠肠道微生物和血清血脂水平的相关性进行分析。结果表明:LV 组和 H 组大鼠血清中甘油三酯、总胆固醇及低密度脂蛋白胆固醇含量显著降低,体重增长被抑制;LV 组和 H 组中大鼠肠道菌群的丰度及多样性显著提高,且 H 组大鼠肠道菌群的丰度高于 LV 组(P<0.05);LV 组和 H 组大鼠粪便中 Lactobacillus spp.、S24-7 spp 和 Treponema spp.等菌属显著升高,Peptostreptococcus spp.、Clostridium spp.、Turicibacter spp、Escherichia spp.及 Desulfovibrio spp.等菌属显著降低。结果提示,L. rhamnosus LV108发酵乳及混合乳酸菌发酵乳均能改善大鼠血脂水平并恢复大鼠肠道菌群的多样性及菌群构成。     

农场高细菌数牛奶解决方案

本文旨在为帮助奶牛场的管理和服务人员辨别原料奶中的细菌来源和如何消除原料奶中的高细菌数,所介绍的方法主要是如何为待挤奶牛卫生消毒、如何清