The outer membrane protein type of five dominant Eschedchia coli serotypes in pigs in Guangdong area

对从广东地区部分猪场分离的大肠杆菌进行血清型鉴定后，选取优势血清型09、026、060、0100和O107的8个致病性较强的分离株，采用超声波裂解、N-十二烷基肌氨酸钠处理和超速离心技术提取大肠杆菌的外膜蛋白（0MP），利用SDS-PAGE电泳进行OMP分型。结果8个菌株共有3个OMP型（I～III型），其中026。、0101、0107型的3个分离株的外膜蛋白型由1条带组成，为0MP—I型；060、0101、0107型的4个分离株的外膜蛋白型由2条带组成，为OMP—II型；09型的1个分离株的外膜蛋白型由3条带组成，为OMP-Ill型。这表明，优势血清型09、O26、0101、O107的分离株OMP型不单一；同一血清型的分离株，存在不同OMP型；而不同血清型的分离株却可有相同的OMP型。     

鸡源大肠杆菌OMP和OmpT基因与血清型相关性

为了解禽致病性大肠杆菌分离株OMP、OmpT基因与血清型相关性,对6种血清型(O78、O38、O9、O91、O11、O157)的7株鸡源大肠杆菌菌株进行了外膜蛋白(OMP)和外膜蛋白酶T(OmpT)基因的研究.用N-十二烷酰肌氨酸法提取其外膜蛋白,经SDS-PAGE电泳后考马斯亮蓝染色,对鸡源大肠杆菌菌株进行了外膜蛋白分型;用PCR和生物信息学的方法对OmpT基因进行检测与分析.7株大肠杆菌共有3个OMP型,其中,分离株5,32,9主要由相对分子质量接近的2条带组成,为OMP-1型;分离株11主要由相对分子质量接近的3条带组成,为OMP-2型;分离株14,7主要由相对分子质量接近的1条带组成,为OMP-3型.这表明同一血清型的菌株可能属于不同的OMP型,而血清型不同的分离株之间却可具有相同的OMP型.PCR检测结果显示7株鸡源大肠杆菌均携带OmpT基因,与GenBank登录的序列比较发现其同源性为91.9％～100.0％,不同血清型菌株间的同源性为91.9％～98.0％.该试验证实了同一血清型分离株之间可发生遗传分化,而不同血清型分离株之间也可具有不同程度的遗传相关性;不同血清型分离株间的OmpT基因的同源性存在一定的差异.     

天津地区部分猪源大肠杆菌的OMP型

从天津各区主要养猪场分离的16株(7种血清型O20、O21、O139、O141、O93、O108、O147)大肠杆菌中提取外膜蛋白(OMP),经SDS-PAGE分析表明,5株O21菌株有2个OMP型(OMP-1和OMP-3型).3株O1s9菌株和3株O20菌株各出现2个OMP型(OMP-1和OMP-2型).2株O141菌株共出现2个OMP型(OMP-2和OMP-3).1株O93菌株、1株O108菌株和1株O147菌株均为OMP-1型.结果表明,相同血清型的菌株可以有不同的OMP型,不同血清型的菌株可以有相同的OMP型.     

广东省猪大肠杆菌优势血清型O107外膜蛋白的提取

实验室从广东省鉴定的猪大肠杆菌优势血清型O₁₀₇中,选出一株有致病性菌株。通过细菌培养、超声波裂解、N—十二烷基肌氨酸钠处理和超速离心技术提取出大肠杆菌O₁₀₇的外膜蛋白。提取物经SDS—PAGE电泳检测后发现蛋白条带大小与预期的实验结果相同。     

陕西省部分禽源性大肠杆菌的外膜蛋白型

从陕西省部分优势血清型的禽源性大肠杆菌中提取外膜蛋白 (outer membrane protein,OMP) ,用 SDS- PAGE进行 OMP分型。 18株菌共产生了 3种 OMP型 ,其中 4株 O1菌株 ,4株 O2菌株 ,4株 O78菌株和 3株 O89菌株各属2个 OMP型 (OMP- 1,2型 ) ;3株 O75菌株属 3个 OMP型 (OMP- 1,2 ,3型 )。结果表明 ,陕西省分离的优势血清型禽源大肠杆菌具有多样性的 OMP型 ,且多种血清型间具有共同的 OMP型。     

天津地区鸡致病性大肠杆菌血清型分布及其优势血清型的外膜蛋白型研究

从天津地区各区县养鸡场分离 ,鉴定出 45株鸡致病性大肠杆菌。对 45株致病性大肠杆菌进行血清型鉴定 ,共定型出 3 1株 ,分属 1 4个血清型 ,其中 O78、O88、O2 、O4 5、O53、O14 5为优势血清型 ,占定型菌株的 58.3 %。提取 O78、O88、O2 、O4 5、O53和O14 56个血清型 1 8个分离株的外膜蛋白 ( Outermembrane protein,OMP) ,测定外膜蛋白型 ( Outmembrane protein patterns,OMPS) ,SDS-PAGE分析表明这些分离株共产生了 3个 OMP型 ( 1～ 3型 )。 OMP-1型为 O78、O88、O2 、O53、O14 55个血清型分离株所共有 ,OMP-2型为 O78、O4 5、O14 53个血清型分离株所共有。这表明同一血清的菌株可能属于完全不同的 OMP型 ,而血清型不同的菌株也可能为同一 OMP型。     

鸭致病性大肠杆菌外膜蛋白型研究

测定了从我国分离到的130株鸭病原性大肠杆菌外膜蛋白型（Outer membrane protein patterns,OMP型）,其中O93、O92、O78和O76优势血清型53株,O46等30个其他血清型分离株77株,这些分离株共产生了4个OMP型,其中OMP-1型81株,占62.3%（81/130）,覆盖O93、O92、O78和O76等29个血清型,占85.3%（29/34）,为主要的OMP型;根据GenBank中大肠杆菌K-12外膜蛋白A基因（ompA）的核苷酸序列设计引物,从9株优势血清型和1株O46血清型的鸭大肠杆菌中分别扩增得到ompA基因,进行序列测定及分析,发现优势血清型9个菌株的ompA均由1 171个碱基组成,均只有1个大的开放阅读框（ORF）,长1 053 bp,编码由350个氨基酸组成的前外膜蛋白A（pro-OmpA）,前21个氨基酸残基组成信号肽,成熟的OmpA由329个氨基酸残基组成;O46菌株的ORF全长1 041 bp,在400-411 bp位缺失了12个碱基,成熟的OmpA由325个氨基酸残基组成;10个鸭致病性E.coli的ompA基因核苷酸序列高度同源,相似性达95.8%~100%。     

禽多杀性巴氏杆菌血清型与外膜蛋白型相关性研究

为了解禽多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)分离菌株的荚膜血清型、菌体血清型与外膜蛋白型之间的相关性,首先对自行分离的10个菌株采用间接血凝试验和琼脂扩散试验进行鉴定(均为A:1);然后采用超声波破碎、高速离心和十二烷基肌氨酸钠提取外膜蛋白,通过SDS-PAGE电泳的方法对上述10个菌株与C48-1(A:1)、X73(A:1)、P1059(A:3)、CU(A:3,4)等一起进行外膜蛋白(Outer membrane proteins,OMP)分型研究。结果表明:14个禽多杀性巴氏杆菌菌株以2个主要蛋白OmpH和OmpA的差异为依据分为3种主要OMP型;依据次要蛋白的差异,OMP-1,3菌株进一步分为OMP型1.1,1.2和3.1,3.2,其中OMP型1.1有6个菌株,OMP型1.2有5个菌株;OMP型2有1株(YZ7031);P1059为OMP型3.1;CU为OMP型3.2;另外,血清型为A:1的12个菌株中有11个菌株外膜蛋白型均为OMP-1型,血清型为A:3、A:3,4的菌株外膜蛋白型属于3型。说明禽多杀性巴氏杆菌血清型与特定的外膜蛋白型具有很强的相关性。     

泰州地区鸡大肠杆菌分离鉴定及耐药性调查

研究旨在了解泰州地区鸡大肠杆菌的血清型和耐药情况。试验于2020—2021年从该地区部分鸡场分离了65株大肠杆菌,进行了血清型、致病性和耐药性检测。结果显示,定型菌株56株,共覆盖13个O血清型,优势血清型为O₇₈(23%)、O₁(15%)、O₁₈(12%)、O₈₈(9%)。测试致病性的41株分离菌中高致病性菌株25株,中致病性菌株7株,低致病性菌株9株,中、高致病性菌株占78.0%,其中O₂和O₇₈血清型菌株致病性最强。药敏试验结果显示,多西环素、红霉素耐药率100%,阿莫西林、氨苄西林、庆大霉素、新霉素耐药率50%以上。敏感性最高的是阿米卡星,为87.7%,其次是头孢噻呋,为67.7%。研究表明,该地区大肠杆菌多重耐药问题已经非常严重,临床治疗可优先选用阿米卡星和头孢噻呋。     

肉鸡源致病性大肠杆菌外膜蛋白型的研究

对分离自陕西省的16株肉鸡源致病性大肠杆菌的外膜蛋白（outer membrane proteins,OMP)进行提取，采用SDS-PAGE法进行分型，结果发现有3种外膜蛋白型，其中2株O4、2株O35、2株89，1株O18、1株O78属OMPⅠ型，2株O35，1株O4，1株O18属OMPⅡ型；1株O2，1株O75，1株O78，1株O89属OMPⅢ型，表明肉鸡源E.coli同一血清型中有不同OMP型，而不同血清型间也有相同OMP型，其中有2株菌OMP型表达丰富。     

广西部分地区猪链球菌的分离鉴定及小鼠致病性研究

对来自广西边境地区部分发病猪场及屠宰场的370份猪组织进行细菌分离鉴定,共分离到16株链球菌,对这16株链球菌进行了形态学观察、PCR鉴定及小鼠致病性试验。结果表明,其形态、染色、生化特性均符合猪链球菌的特点,通过GDH鉴定与测序,证实这16株菌株均为猪链球菌,分别命名为GX1~GX16。通过特异性引物PCR分型（35个血清型）,其中有1株为1型,1株为2型,1株为5型,1株为29型,5株为8型,7株未分出型。用这16株猪链球菌对昆明小鼠和BALB/c小鼠进行动物致病性试验,结果发现,菌株GX10对昆明小鼠和BALB/c小鼠致死率均为100%;菌株GX11对BALB/c小鼠致死率为80%;其他菌株对昆明小鼠和BALB/c小鼠均无致病性。菌株GX10、GX11对BALB/c小鼠的LD₅₀分别为4.5×10⁵和3.6×10⁹ CFU。本试验结果表明,广西边境地区存在致病性猪链球菌8型。BALB/c小鼠对猪链球菌的敏感性高于昆明小鼠,更适合作为猪链球菌致病性研究的动物模型。     

Isolation,Identification and Pathogenicity on Mice of Streptococcus suis in Pig in Guangxi Border Area

16 strains of Streptococcus were isolated and identified from 370 pig tissues of clinically morbidity farms and slaughter houses in Guangxi border area.Morphological observation, PCR identification and pathogenicity test were carried out. The results showed that the morphology,dyeing,biochemical characteristics were coincidence with the characteristics of Streptococcus suis,confirmed that 16 strains were Streptococcus suis,and named as GX1 to GX16. Further by divided type identification (35 serotypes) by GDH,1 strains was type 1,1 strains was type 2,1 strains was type 5,1 strain was type 29,5 strains were type 8 and 7 strains could not differentiate types. The pathogenicity of 16 strains Streptococcus suis were detected by Kunming mice and BALB/c mice. The results showed that the letal rate of GX10 for Kunming mice and BALB/c mice was 100%;GX11 for BALB/c mice was 80%;Other strains were apathogenicity to the Kunming mice and BALB/c mice. The LD₅₀ of GX10 and GX11 was 4.5×10⁵ and 3.6×10⁹ CFU for BALB/c mice,respectively. The results showed that pathogenic Streptococcus suis type 8 occured in Guangxi border area. The sensitivity of BALB/c mice to Streptococcus suis was higher than Kunming mice, BALB/c mice was more suitable for the pathogenic study of Streptococcus suis.     

酸马奶源发酵乳杆菌对致病性大肠杆菌O8的体外抑菌研究

为了探究天然发酵酸马奶中发酵乳杆菌对致病性大肠杆菌O₈（E.coli O₈）的抑菌机理,本试验从酸马奶中分离筛选出抑菌效果最佳的菌株,对其进行16S rDNA序列鉴定,经NCBI网站BLAST对比鉴定菌种;对菌株进行培养发酵,制备无细胞发酵上清液（CFS）;通过排酸、排过氧化氢（H₂O₂）、不同蛋白酶处理等方法初步确定CFS中的抑菌活性物质性质及其含量;采用牛津杯法和二倍稀释法确定CFS对致病性E.coli O₈ 24 h生长曲线的最佳抑菌浓度;试剂盒法测定CFS对致病性E.coli O₈的细胞膜和细胞壁通透性的影响。结果显示,从酸马奶中分离出22株对致病性E.coli O₈有抑制作用的菌株,对抑菌作用最好的菌株进行16S rDNA序列鉴定及系统进化树分析后确定其为发酵乳杆菌属;CFS中主要的抑菌物质为蛋白,含量为399.5 μg/mL;最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）分别为25.0和49.9 μg/mL;CFS能使致病性E.coli O₈的碱性磷酸酶（AKP）含量在1 h内快速升高,之后呈缓慢增长趋势,且使致病菌培养液中的蛋白含量明显升高。综上所述,发酵乳杆菌CFS的主要抑菌物质为蛋白,蛋白浓度越高抑菌能力越强;CFS通过破坏或改变致病性E.coli O₈细胞膜和细胞壁的通透性,使其释放出AKP和胞内蛋白,从而在短时间内起到抑制致病性E.coli O₈生长的作用。     

贵州省猪繁殖与呼吸综合征病毒分子流行病学调查

为了解2007年4月至2008年7月贵州省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)分子流行病学特征,在此期间基于PRRSV的Nsp2基因在全省33个发病猪场展开调查。结果表明,有3种不同Nsp2基因缺失类型毒株在贵州省流行。参考PRRSV经典毒株相应序列,根据Nsp2基因缺失的不同情况将PRRSV贵州省流行毒株分为3种类型,类型Ⅰ(3/33)缺失177个碱基,类型Ⅱ(29/33)缺失90个碱基,类型Ⅲ(1/33)缺失93个碱基。类型Ⅱ毒株与近年来国内广泛流行的高致病性PRRSV缺失情况一致,类型Ⅰ和Ⅲ是2种新发现的缺失型毒株,但其系统发生地位与高致病性PRRSV接近。     

2株Ⅰ群禽腺病毒的分离鉴定及致病性分析

为了解山东省禽腺病毒（fowl adenovirus,FAdV）毒株的基因遗传演化情况及致病性,本试验对山东省两家疑似暴发鸡包涵体肝炎和心包积液综合征鸡场采集的病料（肝脏、脾脏）进行PCR鉴定,并将鉴定为FAdV的2份阳性病料提取病毒液,接种鸡肝癌细胞（LMH）进行毒株传代培养和细胞病变（CPE）观察、PCR检测、TCID₅₀测定、鸡胚致病性试验、SPF鸡回归试验、病毒hexon部分基因扩增及序列分析。结果显示,试验成功分离到2株FAdV,2株分离株细胞传第1代即可观察到CPE,PCR均可扩增出大小为500 bp的片段,且2株分离株细胞F5代TCID₅₀分别为10^-7.75/0.1 mL和10^-7.60/0.1 mL,均对7日龄SPF鸡胚有强致病性;第1分离株和第2分离株对21日龄SPF鸡攻毒死亡率分别为80%和15%。hexon基因核苷酸同源性分析结果显示,第1分离株与FAdV-4株同源性最高（99.57%）,第2分离株与FAdV-8b株同源性最高（99.18%）。这2株FAdV分离株均与Ⅰ群禽腺病毒同源,与火鸡出血性肠炎病毒（HEV）所在的血清Ⅱ群及减蛋综合征病毒（EDSV）所在的血清Ⅲ群禽腺病毒位于不同分支。第1分离株基因型为C型,血清型为4型,命名为FAdV-SDC4株;第2分离株基因型为E型,血清型为8b型,命名为FAdV-SDE8b株。综上所述,FAdV-SDC4和FAdV-SDE8b株属于近几年国内流行毒株。本研究结果可为鸡包涵体肝炎、心包积液综合征的防控工作和疫苗株的选择提供科学依据。     

冬季不同饲养密度对湖羊育成公羊生长发育和舍内CO2、NH3浓度的影响

试验旨在研究冬季不同舍饲密度对育成公羊生长性能、屠宰性能、内脏器官发育和饲养环境的影响,采用单因素完全随机区组设计,将144只6月龄、体重相近的健康育成公羊随机分为4组,即Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组,每组6个重复,每个重复6只羊。每组饲养密度分别为0.70、1.05、1.40和1.75 m²/只,试验期55 d。结果显示：①Ⅱ组平均日增重和末重均极显著高于其他组（P < 0.01）,Ⅲ、Ⅳ组极显著高于Ⅰ组（P < 0.01）,Ⅱ组体增重最高,分别比Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ组高20.27%、11.98%和10.23%（P < 0.01）,Ⅱ组料重比极显著低于Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ组（P < 0.01）;②Ⅱ组宰前活重极显著高于其他组（P < 0.01）,净肉重、净肉率和肉骨比均显著高于Ⅰ组（P < 0.05）,而Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组间无显著差异（P > 0.05）;③各组间除心脏和脾脏重有显著差异外,其余各器官重均未表现出显著差异（P>0.05）,Ⅳ组心脏和肝脏重占活体重量比最高;④舍内的NH₃和CO₂平均浓度大小为：Ⅰ组 > Ⅱ组 > Ⅲ组 > Ⅳ组,与羊饲喂空间大小呈负相关（R²=－0.995和R²=－0.999）;⑤在不计算人工和饲料成本的情况下,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组分别获利6 345.67、7971.77、6977.80和7 025.42元,Ⅱ组经济效益最高。综上所述,试验Ⅱ组各项指标均优于其他3组,舍饲育肥羊饲养密度与生长性能的物理性拐点是1.05 m²/只。     

广西部分地区猪链球菌血清型及其毒力因子流行性调查分析

为探究广西部分地区猪链球菌(Streptococcus suis,SS)流行菌株主要血清型及毒力因子分布情况。本试验于2018年1月至2018年6月对从多个猪场采集到的116份疑似链球菌感染的组织病料(脑、肺脏、淋巴结等)进行病原菌检测,采用细菌分离鉴定、形态学观察及PCR扩增等方法对病原菌及其血清型和部分毒力因子进行鉴定。结果显示,116份样品共分离到链球菌32株,阳性率为27.59%(32/116),其血清型主要以SS2和SS9为主,分离率分别为40.63%(13/32)和43.75%(14/32),其他血清型为15.63%(5/32);毒力因子检测结果表明:SLY、MRP、EPF以及SBP2′因子的检出率分别为:81.25%(26/32)、59.38%(19/32)、50.00%(16/32)和71.88%(23/32)。32株链球菌中以SLY^+MRP^+EPF^+SBP2′^+(13株)、SLY^+MRP^-EPF^-SBP2′^-(5株)、SLY^+MRP^+EPF^-SBP2′^+(5株)为主要的毒力基因型,其中SS2均能检测出3个或3个以上的毒力因子。玉林、柳州市主要分布SS9型,南宁、百色市主要分布SS2型;广西不同地区毒力因子的分布情况存在差异且不同血清型或同一血清型的链球菌毒力因子的分布情况也各不相同,其中SS2携带的毒力因子检出率明显高于其他血清型。该研究可为今后猪链球菌疫苗及致病机理研究提供理论依据,为广西地区猪场链球菌血清型疫苗选择提供指导。     

副猪嗜血杆菌外膜蛋白表型分析

为揭示副猪嗜血杆菌外膜蛋白与毒力的关系,采用SDS-PAGE测定了82个副猪嗜血杆菌分离株细胞外膜蛋白(OMP),比较了不同临床背景分离株的OMP表型差异,根据外膜蛋白的电泳迁移率Rf值和蛋白含量对OMP与毒力菌株的相关性和PAGE分型进行了聚类分析。图谱表型分析结果表明,82个分离株分成以相对分子质量36～40ku为特征的Ⅰ型和以42～45ku为特征的Ⅱ型2种类型,约34%患病猪分离株属于PAGEⅠ型,只有8.7%健康猪分离株属于PAGEⅠ型。Rf值聚类分析结果显示外膜蛋白分为3种类型,PAGEⅠ、PAGEⅡ和PAGEⅢ型。图谱蛋白含量聚类分析显示5个PAGE型。结果提示,36～40ku蛋白与菌株的毒力相关。     

日粮中添加虾青素和维生素B2对蛋鸡生产性能的影响

为研究日粮中添加虾青素和维生素B2对蛋鸡生产性能的影响,试验选用45周龄产蛋率和体重相近、健康的海兰褐蛋鸡 600 只,随机分成 5 组,每组 3 个重复,每个重复 40 只鸡。对照组饲喂基础日粮,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组在基础日粮中分别添加0.25 %虾青素＋5.0 mg/kg维生素B2、0.25 %虾青素＋8.0 mg/kg维生素B2、0.25 %虾青素＋11.0 mg/kg维生素B2、0.25 %虾青素＋14.0 mg/kg维生素B2。预试期 7 d,各组均饲喂基础日粮。正试期 28 d,对照组饲喂基础日粮,试验组分别饲喂配方饲料,共35 d。结果表明：（1）试验Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组产蛋率分别较对照组提高2.89%、4.14%、5.01%（P < 0.05）。（2）试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组平均蛋重分别较对照组增加1.69%、2.51%、3.38%、3.93%（P < 0.05）。（3）试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组料蛋比分别较对照组降低2.22%、6.67%、11.85%、12.59%（P < 0.05）。综上,日粮中添加虾青素和维生素B2能提高蛋鸡的生产性能,且添加0.25%的虾青素和14.0 mg/kg维生素B2效果最佳。 [关键词] 虾青素|维生素B2|蛋鸡|生产性能     

Effect of Soybean Meal Replaced by Fermented Rapeseed Meal on Growth Performance,Meat Quality and Serum Biochemical Indexes of Broilers

This experiment was conducted to study the effect of soybean meal replacement by fermented rapeseed meal on growth performance,meat quality and serum biochemical indexes of broilers.A total 400 23-day-old Yellow-feathered male broilers were randomly divided into 4 groups with 4 replicates per group and 25 broilers per replicate.The broilers in control group were fed a basal diet,and the others were fed the basal diets with the 3% (group Ⅰ),6% (group Ⅱ) and 9% (group Ⅲ) fermented rapeseed meal equal-nutritionally replacing the soybean meal,respectively.The experiment lasted for 43 days.The results showed as follows:① Compared with control group,the ADG,ADFI and F/G of groups Ⅰ,Ⅱ and Ⅲ showed no significant differences (P>0.05);The ADG of group Ⅲ were 16.47% (P<0.05),15.03% (P<0.05) higher than that of groups Ⅰ and Ⅱ,the F/G of group Ⅲ were 7.71% (P<0.05),4.27% (P>0.05) lower than that of groups Ⅰ and Ⅱ.② There were no significant differences in the pH₁,pH₂₄,meat color (L^*,a^*,b^*),cooking loss and tenderness of chest muscle among all groups(P>0.05);Compared with control group,the water loss rate of groups Ⅰ,Ⅱ and Ⅲ were significantly decreased (P<0.05).③ Compared with control group,the serum GLU content of groups Ⅰ,Ⅱ and Ⅲ were decreased by 13.06%(P<0.05),8.12%(P>0.05) and 9.57%(P>0.05);The serum TP content of groups Ⅰ,Ⅱ and Ⅲ were increased by 2.50%(P>0.05),20.86%(P<0.05) and 33.92%(P<0.05);The serum GPT content of groups Ⅰ,Ⅱ and Ⅲ were decreased by 7.99%(P>0.05),18.85%(P>0.05) and 26.98%(P<0.05).It was concluded that it would be feasible to replace the soybean meal with 3% to 9% fermented rapeseed meal in broiler feeding,and the optimum supplemental level of fermented rapeseed meal was 9%.