鱼类精液超低温冷冻保存的基本原理、研究现状及应用前景

<正> 利用低温保存生命是一项新兴的科学手段。自1949年英国Polge用甘油冷冻保存动物精液成功以来,这项技术突飞猛进。目前冷冻配子及胚胎已经应用在医学研究和畜牧业生产上。而水产生物配子(主要是精子)的冷冻保存,经过三十年的努力也取得很大成就。从现有资料看,鱼类精液冷冻保存的研究大多集中在冷水性的鲑鳟鱼类以及某些海水鱼类上,结果较为理想。而有关鲤科鱼类精液冷冻保存的研究报道尚不多。冷冻配子具有超越时空的功效,可以使不同生殖期或地理间隔的品系得以交配,性转换的个体得以自交;可以不间断地为水产遗传学及生物技术研究提供配子材料;还可     

条纹锯精液超低温冷冻保存研究

为建立条纹锯精液超低温冷冻保存方法,实验采用计算机辅助精子分析系统（CASA）分析了采用6种抗冻保护剂（GLY[甘油]、DMSO[二甲基亚砜]、PG[丙二醇]、EG[乙二醇]、METH[甲醇]、DMA[二甲基乙酰胺]）在4种浓度（5%、10%、15%、20%,v/v）下对条纹锯精液的冷冻保存效果。结果发现,以HBSS为稀释液,采用程序降温仪分步降温冷冻保存条纹锯精液,37℃水浴解冻后的精子中,15% PG 作为抗冻保护剂的精子运动率最高,达到（93.1±0.9）%,与鲜精差异不显著（P>0.05）,15% PG 作为抗冻保护剂的精子水浴解冻后精子的运动速度最高,平均直线速度、平均曲线速度、平均路径速度分别达到了（88.3±0.3）μm/s、（76.2±0.5） μm/s、（86.7±0.7） μm/s,与鲜精差异不显著（P>0.05）。在不同种类及不同浓度抗冻保护剂保护下,15% PG 作为抗冻保护剂的精子解冻后 1 min内运动率变化与鲜精差异不显著（P>0.05）。研究表明,15% PG为条纹锯最佳抗冻保护剂,可用于条纹锯精液的超低温冷冻保存。     

鱼类精液冷冻保存技术操作规程

经过十多年的努力，完成了我国主要淡水养殖鱼类，如青鱼、草鱼、鲢鱼、鳙鱼。兴国红鲤、镜鲤、团头动，以及大口鲶、长吻既和中华鳄等十余种鱼类基础生物学的多项研究，超低温冷冻保存技术和批量冷冻保存技术研究，达到生产上实际应用水平。在长江水产研究所建成我国第一座淡水渔类冷冻精液库，冷冻精液的解冻复活率、解冻后冻精受精率和孵化率分别达到（60－75％。80-95％和75－90％。为促进我国鱼类精液冷冻保存技术的进一步发展，使淡水养殖鱼类精液冷冻保存规范化、标准化，并逐步在渔业生产上推广应用，特制订本规程。l亲鱼的选择和精…     

条纹锯鮨精液超低温冷冻保存研究

为建立条纹锯鮨精液超低温冷冻保存方法,实验采用计算机辅助精子分析系统(CASA)分析了采用6种抗冻保护剂(GLY[甘油]、DMSO[二甲基亚砜]、PG[丙二醇]、EG[乙二醇]、METH[甲醇]、DMA[二甲基乙酰胺])在4种浓度(5%、10%、15%、20%,v/v)下对条纹锯鮨精液的冷冻保存效果。结果发现,以HBSS为稀释液,采用程序降温仪分步降温冷冻保存条纹锯鮨精液,37℃水浴解冻后的精子中,15%PG作为抗冻保护剂的精子运动率最高,达到(93.1±0.9)%,与鲜精差异不显著(P0.05),15%PG作为抗冻保护剂的精子水浴解冻后精子的运动速度最高,平均直线速度、平均曲线速度、平均路径速度分别达到了(88.3±0.3)μm/s、(76.2±0.5)μm/s、(86.7±0.7)μm/s,与鲜精差异不显著(P0.05)。在不同种类及不同浓度抗冻保护剂保护下,15%PG作为抗冻保护剂的精子解冻后1 min内运动率变化与鲜精差异不显著(P0.05)。研究表明,15%PG为条纹锯鮨最佳抗冻保护剂,可用于条纹锯鮨精液的超低温冷冻保存。     

鱼类精子超低温冷冻保存技术及其应用

鱼类精子的超低温冷冻保存对鱼类种质资源保护、低温生物学、遗传育种和水产养殖业都具有重要的意义。鱼类精子超低温冷冻保存技术主要包括冷冻保存方法、抗冻保护液、降温、解冻速率、冷冻保存温度、抗冻剂去除等过程。本文就鱼类精子超低温冷冻保存技术及其应用进行了综述。     

鱼类精液冷冻保存的若干问题

保存鱼类精子，在人工繁殖和育种工作中具有重要的作用，早在十八世纪就为各国研究者所重视。     

斑鳜精液超低温冷冻保存及其效果分析

实验所用翘嘴鳜(♀, Siniperca chuatsi) 2~3龄, 体质量1 000~1 500 g; 斑鳜(♂, Siniperca scherzeri Steindachner)1~2龄, 体质量300~500 g。于繁殖季节选取成熟度好的亲鱼以促黄体素释放激素类似物(LHRH-A2)、绒毛膜促性腺激素(HCG)和马来酸地欧酮(DOM)进行催产。通过筛选D-15、D-17、Ringer液 和 M-Hank’s液4种稀释液和二甲基亚砜 (DMSO)、 甘油(Gly)、乙二醇 (EG)、1,2-丙二醇 (PG)和二甲基甲酰胺 (DMF)5种抗冻剂, 发现DMSO和D-17分别是优选的抗冻剂和稀释液。以D-17作为斑鳜精子的稀释液, 按照1︰3(精液︰稀释液)体积比稀释, 添加10%体积的DMSO作为抗冻剂, 按照三步冷冻法超低温冷冻保存, 37℃水浴解冻的斑鳜精子, 经CASA分析精子活率为(83.26±18.20)%, SCGE检测表明70%以上的精子核DNA不会发生损伤; FCM分析表明26.74%的解冻精子有完整的细胞膜且线粒体功能正常; 用冷冻复苏斑鳜精子与翘嘴鳜精卵进行人工授精, 最高受精率(39.6±6.5)%, 温度24~28℃孵化时间38 h, 孵化后的鱼苗发育正常, 开口1周以后的鱼苗全长(1.346±0.255 ) cm, 体高(0.438±0.103) cm, 体质量(0.045±0.020) g。鲜精受精鱼苗和冻精受精鱼苗在开口后1周的生长没有显著差异。因此认为D-17+10% DMSO可用于斑鳜精液的超低温冷冻保存。本研究将有助于斑鳜种质资源的收集保存和冷冻保存的斑鳜精液在翘嘴鳜(♀)×斑鳜(♂)杂交中的应用。

     

棘皮动物精子超低温冷冻保存技术研究进展

棘皮动物(Echinodermata)是无脊椎动物中进化地位最高等的类群,其海参纲(Holothurioidea)和海胆纲(Echinoidea)的一些物种具有非常高的经济价值和营养价值.由于受到人类活动的影响,很多棘皮动物物种数量和生物多样性遭到了严重破坏,种质资源保存迫在眉睫.超低温冷冻保存是种质资源长期保存的重要...     

史氏鲟精子超低温冷冻保存研究

比较了史氏鲟精子在3种不同配比浓度稀释液的保存效果。试验结果表明,配方Ⅲ作为稀释液,8%甲醇作为抗冻剂,二步法超低温(-196℃)冷冻保存,5h后取出,38℃水浴解冻取得最好的冻后激活率,解冻后激活率为(52.3±3.5)%。解冻精子分别采用井水和激活液D(10mmol/L Tris+10mmol/L NaCl+25mmol/L Glu,pH 8.0)激活,进行人工授精。结果显示配方Ⅲ冻精采用激活液D激活授精获得最高受精率为68.56%,最高孵化率为52.91%。本次试验表明,1～2mmol/L范围内,低浓度K+比高浓度K+对史氏鲟精子保存有利;52～82mosmol/kg范围内,高渗稀释液有利于史氏鲟精子的保存;且激活授精方法是影响冻精受精率和孵化率的关键因素之一。     

虹鳟鱼精液的冷冻保存

<正> 本研究探讨长期冷冻保存虹鳟鱼精液的可能性。用保存了343天的精液进行授精试验,卵子发眼率接近40%。精细胞内主要阳离子浓度的变化和冷冻解冻过程的关系被作为造成精子受精能力下降的可能因素进行研究。研究发现,在冷冻解冻过程中,精细胞中钠、钙离子增加,钾、镁离子减少。目前,精液长期保存技术为家畜育种工作带来了很多益处。鲑鱼精液保存技术发展也必将促进选育技术的发展。从1960年     

栉孔扇贝精子的超低温保存研究

于１９９９年５￣６月对栉孔扇贝精子进行超低温保存研究。结果表明,抗冻液为ＤＭＳＯ５％＋蔗糖５％并以２０℃ｍｉｎ的降温速率通过０￣－８０℃时的保存效果最好,冻精的活力、受精率、化率分别为４９．３９％、４２．０６％和１２．１５％。样品体积对超低温存效果产生影响,体积为０．６ｍｌ或１ｍｌ比较适宜。此外,在０℃进行预处理平衡是必须的,但时间不宜太长。冻精用３５℃水浴解冻效果最佳,５０℃次之,２０℃最差。对     

鱼类胚胎低温冷冻保存降温速率研究

在低温下采用慢速降温速率，以０．２－０．５℃／分降至－４０℃以上温度，胚胎获得２０％以上成活率。在超低温下采用快速降温速率，以２℃／分降至－４０℃，再以１０℃／分降至－１９６℃，胚胎获得了９０％以上复活率。     

鱼类免疫学研究的进展

鱼类免疫学是从脊椎动物免疫学、鱼类微生物学以及鱼类组织学等学科中分划出来的。最近二十多年来,它发展很快,已形成一门新的学科。本文力图对该领域的发展现状和趋势作一概要的综述。     

淡水鱼在保温鱼箱中贮存期限的研究

我国养殖淡水鱼类居世界首位。特别是近年来淡水鱼的产量迅速增长,淡水鱼从生产到流通上市过程中的保鲜问题日趋重要。以往淡水鱼的贮运除活鱼车运输外,大多采用传统的木桶、竹篰、蒲包等落后的包装容器,由于保温条件差,鱼体受挤压,鱼货容易腐败变质。保温鱼箱是近年来渔业生产上使用的新型包装容器,从目前使用于海水鱼的情况来看,它具有良好的保鲜效果。为了进一步开拓保温鱼箱在淡水鱼流通领域中的应用,我们选用了上海市水产供销公司研制的8B-3型塑料保温鱼箱,以养殖     

吉林镇贲养鱼场鱼池生态系的分析

本文根据1988—1990年对吉林省镇赉渔场养鱼池的生态学调查材料,论述了鱼池生态系统的非生物环境、生物群落、初级和次级生产量、有机碳的平衡、能流和生物能量收支。一年约有28.3—51.4％收入有机碳沉积池底。各池鱼产量约为总收入能量的4.7—10.2％;鲢鳙产量约为浮游植物毛产量的5.1—13.7％;鲤产量约为人工饲料能量的6.5—13.1％。浮游植物和细菌的能量有55.2—81.4％为浮游动物所利用,18.4—22.4％为鲢鳙所利用,仅0.2％为底栖动物所利用。     

辽宁省水库鲢鳙鱼产力的评估↑（*）

本文在对辽宁５８座水库调查的基础上，根据Ｆｕｚｙ聚类分析和逐步回归筛选的结果，采取了国内外实践证明效果较好和比较流行的评估鱼产力的模型，以现实连续五年的最高渔获量和浮游生物数据作为自变量，计算了其间的相关显著程度。认为形态土壤学指数（ＭＥＩ）效果最佳；形态流域指数（ＭＤＩ）在水库交换率大的地区使用时，应当增加径流深度与ＭＤＩ组成复回归分析。本文用形态土壤学指数和浮游生物两个变量，以吉林省高产的海龙水库对比，求出４３座水库可能达到的鱼产量。高产量达１００ｋｔ／ｋｍ２，低产者亦在１０ｔ／ｋｍ２以上。     

中国鱼类遗传育种研究的进展

实践表明,品种是水产养殖的物质基础,良种的选择和培育是增产的有效途径。要从根本上提高水产品的数量和质量,必须在品种上狠下功夫。凡是水产养殖业比较发达的国家,良种繁育和品种改良都被列为重要的研究课题。自50年代以来,苏联、东欧、美国、日本和以色列等国家都在致力于养殖鱼类的遗传改良,并取得了一定的成效。在这方面,尽管我国起步较慢,基础较差,但近年来也取得了长足的进展。自1958年至70年代初,主要是开展杂交育种工作,而且基本上是自发进行的,缺乏计划性和信息交流。直到1972年局面才有所改变,因为这一年在湖北沙市召开了全国淡水养殖鱼类优良品种选育和     

几种淡水养殖鱼鲜度变化的特点

本文对常见几种淡水养殖鱼鲜度变化的特点作了研究。结果表明鲢、鳙、草鱼等几种淡水鱼在０℃贮藏下的ＴＶＢ－Ｎ变化，呈现的趋势大体相同。在０℃及－３℃低温下ＴＢＶ－Ｎ变化缓慢，且数量水平较低，在２０℃下则变化迅速，呈直线上升之势。实验结果也表明这几种淡水鱼在０℃下的Ｋ值变化速率随鱼种而异，其大小依次为链、镛＞草鱼＞团头鲂＞鲫。文中根据对草鱼、团头鲂等淡水鱼在不同温度下Ｋ值变化的测定结果作了阿列纽斯图，并     

三种淡水鱼类胚胎低温保存及其降温和复温速率的研究

用自行研配的低温保存液对泥鳅等三种鱼的心脏跳动期胚胎进行低温保存试验。试验中分别采用慢速，分段慢速及分段快速且种降温程度，保存后的胚胎又分别以４，２５和４０℃的未浴中复温。从存活率和孵化率看，分段快速降温程序较好，分段慢速降温次之，慢速降温最差；而复温方式以４０℃方式最佳，２５℃次之，４℃最差。     

卤虫胚胎和无节幼体超低温冷冻保存的研究↑（*）

用玻璃化液作为低温保护剂，对卤虫胚胎和无节幼体进行超低温冷冻保存实验。通过实验筛选出５种适宜卤虫胚胎保存的玻璃化液，找出了影响胚胎成活的降温温层和升温温层，使胚胎经－１９６℃保存后的成活率稳定在９０％。建立了较为完善的卤虫胚胎冷冻保存的程序。卤虫无节幼体经超低温冷冻保存后，获得３－５％的成活率。