柑橘天然杂种秭归橘橙来源探究

秭归橘橙为天然柑橘杂种,果实无核、早熟,但其亲本来源未得到深入的分析和验证。为探明秭归橘橙的亲本,应用倍性检测、形态学标记和AFLP、cpSSR、nSSR等分子标记,对其进行遗传鉴定。倍性检测证实秭归橘橙为二倍体,叶形指数、气孔密度和大小、花粉育性和花粉形态分析表明秭归橘橙形态特征上偏向于甜橙,而其花粉染色活力介于甜橙与红橘之间。AFLP聚类分析表明秭归橘橙介于橙和橘之间。cpSSR、nSSR确认秭归橘橙的母本为甜橙(Citrus sinensis[L.]Osbeck),父本为橘类(C.reticulate Blanco)。     

红江橙的嵌合体现象及其在生产上的利用

红江橙(改良橙)以其红色的果肉、柔滑化渣的优良品质以及鲜艳的外观,广受国内外消费者的欢迎。但是,红江橙的果实性状不稳定,除了红肉果外,还常有黄肉果以及桔变果等变异果实出现。根     

通过重复照射培育无核红江橙新品系

红江橙是甜橙和宽皮柑桔的嫁接嵌合体,果实有5种类型,其中红肉果品质优,外观美,但种子很多。本试验目的是通过用~(60)Co-γ射线处理其接穗,培育出无核(每果种子数不超过3粒)或少核(每果种子数多于3粒而少于6粒)、优质的红江橙新品系。     

柑橘10个品种实生后代多倍体的发掘及SSR鉴定

秋季采摘柑橘成熟果实并剥取种子,将小粒种籽和瘪籽播于MT培养基,待萌发长出2～3片真叶时,取其叶片检测倍性;将饱满种籽播种于露地,对其幼苗首先通过形态筛选获得似多倍体的植株,然后取其叶片用流式细胞仪进行倍性检测;最后对获得的多倍体植株进行SSR分子鉴定。试验结果表明,获得早金甜橙、卡特夏橙、塔罗科血橙、日辉橘、Ortanique橘橙、默科特橘橙、华农本地早橘、朱红橘和Flame葡萄柚等9个品种的四倍体分别为6、1、3、12、3、6、2、1和10株;获得早金甜橙、塔罗科血橙、Itabori甜橙和Ortanique橘橙等4个品种的三倍体分别为1、1、2、4株。用13对多态性SSR引物对胚抢救获得的三倍体和四倍体的来源进行鉴定,发现早金甜橙、Itabori甜橙的三倍体再生植株为异源三倍体;塔罗科血橙、Ortanique橘橙的三倍体可能为同源三倍体;早金甜橙和Ortanique橘橙的四倍体可能为同源四倍体;塔罗科血橙四倍体为异源四倍体。采用37对多态性引物对从饱满种籽中获得的8个品种四倍体的来源进行鉴定,发现均为同源四倍体。这些自然发掘的多倍体资源对柑橘无核育种和相关基础研究具有重要价值。     

汁用甜橙新品种‘渝红橙’

‘渝红橙’（原名‘蜀先橙’和‘红6—6’）是1980年重庆市农业科学院果树研究所从红橘砧‘先锋橙’中发现的大果少核芽变。1980-2005年对母树、高接后代和无性一代的产量、果实品质、植物学特性与生物学特性进行了系统观察鉴定,并进行品比试验．其果较大、质优、少核、丰产稳产、适应性强等主要经济性状稳定。综合经济性状优于‘先锋橙’,2005年通过重庆市农作物品种审定委员会审定。     

柑橘SCoT分子标记技术体系的建立及其在遗传分析中的应用

 采用正交设计方法,对影响柑橘SCoT-PCR反应的Mg2+ 、dNTPs、引物、Taq DNA聚合酶及模板DNA用量等因素进行优化,建立了适于柑橘的SCoT标记分析体系。20 μL反应体系中含有：Mg2+ 1.5 mmol · L-1,dNTPs 0.35 mmol · L-1,引物0.625 μmol · L-1,TaqDNA聚合酶0.25 U,模板DNA 10 ng。最适退火温度为49 ℃。利用该体系对Wan2橘橙 × Li2甜橙的杂交后代及沙田柚四倍体进行分析,扩增条带清晰,扩增产物在150 ~ 2 100 bp之间。7个引物在Wan2橘橙、Li2甜橙及其18株杂交后代中共扩增出74条带,多态性条带48条,多态性比率为64.9%,在相似系数0.85处,18株杂交后代可聚为5类,表明其具有较丰富的遗传多样性;11个引物在4株沙田柚四倍体及其二倍体亲本中共扩增出84条带,其中多态性条带46条,多态性比率为54.8%,聚类分析显示5株沙田柚遗传相似系数在0.785 ~ 0.880,在相似性系数0.825处可分为3类,3株同源四倍体分别聚在不同的位置,四倍体材料均发生了不同程度的遗传变异。研究结果表明建立的柑橘SCoT体系结果稳定,重复性好,可为柑橘遗传育种提供新的技术支持。     

柑橘种间体细胞杂种的核质遗传研究

为了解柑橘体细胞杂种的核质遗传组成,采用流式细胞仪(FCM)、简单序列重复(SSR)、相关序列扩增多态性(SRAP)以及酶切扩增多态性序列(CAPS)对此前通过对称融合获得的2株种间体细胞杂种进行了分析。结果表明,在丹西红橘+红江橙种间组合中,分析的2株植株中1株为二倍体非对称体细胞杂种,其核DNA具有双亲的部分DNA,并有重组发生,胞质DNA则来源于红江橙(叶肉亲本);而另1株则是异源四倍体体细胞杂种,其核DNA来源于双亲,并有重组发生,胞质DNA则来源于红江橙。     

柑橘新品种——少核红橙

柑橘品种红江橙以其果实橙红色、果肉深橙红色、风味浓郁、品质优良而深受国内外消费者欢迎。但是．红江橙果实平均单果种子多达18粒．而国际市场上畅销的橙果大部分都是少籽、无籽（例如脐橙、夏橙等）。如果不改良红江橙单果种子多的缺点．就很难进一步提高该品种市场竞争力。     

苹果柱型基因的ISSR分子标记研究

 以普通型苹果品种‘富士’和柱型苹果‘舞姿’以及其杂交后代的柱型与非柱型实生苗为试材, 建立了苹果的ISSR ( Inter-Simple Squence Repeat polymorphic DNA) 分子标记体系, 并将ISSR 标记用于苹果柱型基因Co 的遗传分析。结果表明, 在20μL 反应体系中各组分的用量为Taq DNA 聚合酶1U、Mg²⁺ 的浓度为2.5 mmol·L^-1 、模板DNA 用量20 ng、引物浓度0.2μmol·L - 1及退火温度52 ℃, 80 %引物具有良好的扩增能力。调整模板DNA 的用量、引物浓度及退火温度能够优化苹果ISSR-PCR 扩增体系。从所筛选的65 个引物中获得了35 个ISSR 标记, 其中33 个标记呈现1∶1 分离, 可用于苹果柱型基因的遗传分析。     

基于SSR标记技术的南丰柑橘种质资源亲缘关系研究

【目的】从分子水平探究南丰柑橘种质间的亲缘关系。【方法】应用SSR技术对28份南丰柑橘种质进行基因组的多态性分析。【结果】从91对引物中筛选得到13对SSR引物,可区分全部供试材料。共扩增得到64个等位基因,平均每个位点4.92个等位基因。以遗传相似系数0.18为界,金柑属金柑单独聚为1类,柑橘属27份供试样品聚为1类。以相似系数0.59为阈值,27份柑橘属供试种质分为5个类群,其中南丰蜜橘品种群(包含小果系、大果系、桂花蒂系、早熟系)所有20份供试种质与‘蜜广’聚为一类,‘小叶广’‘火广’‘火橘’聚为一类,‘红广’‘红橘’‘本地早橘’各为一类。【结论】南丰广橘品种群中‘蜜广’与南丰蜜橘品种群有较近的亲缘关系,而‘红广’与亲本南丰蜜橘和‘红橘’的亲缘关系均较远。‘小叶广’‘火广’和‘火橘’亲缘关系较近。     

欧李实生选育中果实颜色的类型分析

通过考察欧李实生群体的果实颜色,了解到果皮与果肉的颜色差异影响果实的颜色。在把握果实颜色本质的基础上,初步确立果实颜色的分类标准。调查结果表明:欧李实生群体中果实颜色有3种类型:红果型、复合型及黄果型。3种类型在实生群体中分布极不相同,表型数据的比例关系为1:3.15:0.85,红果类型出现的基因频率为0.2,黄果类型为0.17,复合类型为0.63。     

黄瓜嫩果白色果皮颜色遗传规律及其AFLP标记研究

运用形态学观察、经典遗传性状分析、AFLP分子标记等技术在形态学和分子标记水平上研究黄瓜嫩果白色果皮颜色遗传规律。结果表明:黄瓜嫩果白色果皮颜色性状是由1对隐性基因"ww"控制的;AFLP分子标记结果显示对于组合631（黄绿果皮类型）×D0351（乳白果皮类型）、E35M51、E63M79、E63M91被划分为一个连锁群;E33M49、E63M85、E43M61、E62M47、E37M85、E56M90被划分为另一个连锁群,各自总的遗传距离为51.3 cM和114.6 cM。对于组合631（黄绿果皮类型）×D0351（乳白果皮类型）,E37M31、E49M70、E55M90、E32M47、E36M60被划分为一个连锁群,E34M59、E63M50被划分为另一个连锁群,各自总的遗传距离为132.1cM和24.9cM。其中,在对组合631（黄绿果皮类型）×D0351（乳白果皮类型）的F₂群体进行标记过程中,引物对E43M61标记的遗传距离为5.2cM;在对于组合631（黄绿果皮类型）×翠玉8号（乳白果皮类型）的F₂群体进行标记过程中,引物对E34M59标记的遗传距离为5.6cM;表明这2个标记与控制黄瓜果白色果皮的隐性基因"w"连锁。     

优质早熟大果型锥栗新品种——八月香的选育

八月香系实生优株选育而成。属长枝型,树势强健,枝梢生长旺,分枝角度小;以粗壮结果母枝结果为主,连续结果能力强。坚果圆锥形、单果质量13.5 g、果皮红褐色、果肉黄白色,鲜食熟食品质皆佳;成熟期9月上旬,较黄榛提早20～25 d;早实丰产,盛产期666.7 m2产量200 kg以上。     

无核酸橙资源‘抛橘’的遗传鉴定

以福建无核酸橙资源‘抛橘’为研究对象，运用 cpSSR（叶绿体 SSR）标记鉴定其母系亲本，nSSR（核 SSR）标记鉴定其父系亲本，并构建 UPGMA 聚类树。7 对 cpSSR 引物扩增出 22 个条带，平均每个位点 3.14 个条带，平均期望杂合度（He）和 Shannon 信息指数（I）分别为 0.47 和 0.81。13 对nSSR 引物扩增出 65 个条带，平均每个位点 5 个条带，He 和 I 分别为 0.66 和 1.27。根据 UPGMA 聚类分析结果推测‘抛橘’是以柚类（Citrus maxima）× 酸橙类（Citrus aurantium）杂交而来，并与代代酸橙有密切联系。以甜橙为参考基因组对‘抛橘’进行基因组重测序的分析结果显示：‘抛橘’与酸橙的基因组序列相似度在 85%以上，进一步证明‘抛橘’可能是酸橙的一种类型。     

甜瓜分子标记纯度鉴定研究

以2个甜瓜品种西域雪1号、西域雪2号及其亲本为试材,建立并优化了单粒种子DNA快速提取法和适合甜瓜的RAPD、SSR分子标记杂交种纯度鉴定体系。从100条随机引物中筛选出G17用于西域雪2号纯度鉴定,可有效区分母本和杂交种。从19对SSR引物中筛选出9对稳定扩增、多态性丰富的引物构建西域雪1号、西域雪2号的SSR指纹图谱。SSR分子标记用较少引物即可扩增出品种特异性条带,且多数F1代带型呈双亲互补,非常适合种子纯度鉴定。同时,使用高浓度、非变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染,条带更清晰,可区分只相差1个碱基的扩增片段,同RAPD相比,SSR分子标记更适合甜瓜杂交种纯度快速鉴定。     

龙眼正反交后代的SSR鉴定及遗传多样性分析

以龙眼早熟优质品种‘石硖’与浓香型晚熟新品种‘香脆’的正、反交F1代共124株为试材,利用SSR标记鉴定杂种真实性,结合高接后的始花年龄和果实香气性状对杂交群体进行遗传多样性分析。结果表明：在20对龙眼基因组SSR引物与50对荔枝表达序列标签SSR引物中,筛选出双亲多态性引物9对,多态性引物占比为12.86%,其中6对引物可鉴定出112株‘石硖’ב香脆’杂交苗中的110株真杂种,真杂种比例为98.21%;4对引物可鉴定出12株‘香脆’ב石硖’杂交苗中的11株真杂种,真杂种比例为91.67%。UPGMA聚类分析显示,121株正、反交后代的遗传变异较大,可划分为3个大类5个亚类。正交与反交后代中,短始花年龄的植株（2.5年生）比例为31.58%和28.57%,中等始花年龄的植株（3.5 ~ 4.5年生）比例为68.42%和57.14%,长始花年龄的植株（≥ 5.5年）比例为0和14.29%;果实香气表现出无、淡、浓的广泛变异。     

核桃早实性状相关联的RAPD标记

运用RAPD技术进行核桃早实性状相关的分子标记研究,用180个随机引物,共扩增出1600条DNA带,选出5个多态性引物,进一步用这5个引物进行单株确认,发现只有引物OPG15在早实类群的8个个体中扩增出一条710bp的特异带,而晚实类群的8个个体中无此特异带。初步分析认为,OPG15710可能是与核桃早实性状相关的分子标记,该标记需进一步确定。     

Genetic characterisation of oak seedlings, epicormic, crown and micropropagated shoots from mature trees by RAPD and microsatellite PCR

DNA was isolated from seedlings of Quercus robur, collected from a single provenance, and from epicormic, crown shoots and in vitro shoots from a single tree of Q. petraea using a CTAB method of extraction. DNA was obtained in sufficient quantity and purity, from 13 out of 30 seedlings, and from all isolations from epicormic and in vitro shoots (2.5–10.0 μg/g fresh/ weight). Smearing was minimised at a primer concentration of 0.12 μM with Taq polymerase at 0.5 unit/reaction. Nine primers produced 142 bands, 28 of which were polymorphic. A similarity index showed that 11 seedlings were closely related with high coefficients (0.85–0.90), but each could be identified from another using only 9 primers (OPA-02 and -05, OPG-04 and -05, OPE-01, -02, -03, -08, -09). DNA was isolated from crown, epicormic and in vitro leaves originating from a single 150-yr old tree of Q. petraea and analysed by randomly amplified polymorphic DNA (RAPD) and microsatellites. With each primer, a characteristic RAPD pattern was obtained, and it was common to all six epicormic shoots derived from different parts of a single branch of this tree; also to the shoots from the crown of the same tree with OPE1 OPA-05, OPA-08, OPA-01, OPA-02, OPA-04, OPA-05, OPG-02, OPG-10, OPE-12. Similarly, the RAPD pattern obtained from shoot cultures in vitro, derived from individual nodes of epicormic shoots produced by six different branch segments, were uniform for each of 15 primers. This work was repeated using microsatellite PCR. Three microsatellite loci AG16, AG 1/2 and AG 1/5 were amplified by PCR. It showed a uniformity of these microsatellite loci in shoots from the crown of the tree, and from epicormic shoots cultures derived from six different sections of branch.     

23个石榴基因型遗传多样性的SRAP分析

以23个石榴基因型为试材,利用7对SRAP引物进行PCR扩增,共扩增出1380个条带,其中多态性条带662个,多态率为48%。应用DPS分析软件构建UPGMA聚类图,23个基因型遗传距离在0.0769～0.4131。在遗传距离0.33处,可将石榴基因型分为A、B、C、D和E5个类群。4种单瓣白花基因型都聚类在A组;B组都是单瓣红花、味甜的鲜食品种;C组中鲜食品种果皮都不着色;4种不同花色或叶型的单瓣、赏食兼用基因型则聚在D组;观赏型墨石榴与其它基因型显著不同,单独聚为一类(E组)。引物对组合ME4/EM4-800bp缺失条带是青皮石榴的特异缺失标记,ME4/EM4-480bp缺失条带是峄城红和河阴软籽石榴的特异缺失标记,ME2/EM3-120bp缺失条带是峄城红、白皮酸和大青皮的特异缺失标记。研究结果表明,石榴基因型有着丰富的遗传多样性,SRAP技术可有效运用于石榴基因型的遗传分析。     

SRAP、ISSR和RAPD分子标记技术在银耳菌株鉴别上的应用

Three types of molecular markers (SRAP, ISSR and RAPD) were used to identify four Tremella fuciformis strains, T6 (white), T7 (white), T8 (yellow) and T9 (light yellow). Twelve SRAP primer pairs, ten ISSR primers and eight RAPD primers were screened, and identification data obtained using the three molecular markers were consistent in that the four T. fuciformis strains were divided into three groups with T7 and T9 clustered together in a single group. Each RAPD primer generated a higher average number of polymorphic bands than either the SRAP or ISSR primers, and the average similarity between the four strains was 81.34%. SRAP markers reflected more genetic information compared with the two other markers, and the average similarity was 68.98%. Genetic information reflected by ISSR markers was intermediate between SRAP and RAPD, and the average similarity was 77.48%.