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不同方法对甜菜不同组织中总DNA的提取效果 总被引:1,自引:0,他引:1
以甜菜的幼嫩叶片、幼嫩花序、萌动种子及糖分积累期块根为提取材料,分别采用高盐低p H法、改良十二烷基硫酸钠(SDS)法、改良十六烷基三乙基溴化铵(CTAB)法及碱裂解法4种不同方法进行总DNA提取,对比不同提取方法及提取部位对提取效果的影响。结果表明,CTAB法适宜于叶片的DNA提取;SDS法适于对花的提取,而且对根和种子的提取效果也优于其它3种方法 ;碱裂解法具有简便快速的优点,但得率低,杂质去除不彻底,有可能影响后续试验,适用于对产量与质量要求不高时的快速提取;高盐低p H法提取的DNA浓度及得率均较低,且产物纯度不高,不建议作为首选方法。甜菜4种组织中,叶片最适合作为提取材料,花次之;根和种子的提取难度较大,建议提取时增加纯化与浓缩步骤。 相似文献
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花生不同部位对提取DNA的影响 总被引:8,自引:1,他引:8
采用CTAB法和SDS法,分别从花生的根尖、下胚轴、种子、幼叶中提取基因组DNA,所提DNA片段长度都在21 kb以上;同种方法中部位之间的DNA纯度没有差异,产率差异极其显著,从种子、根尖、下胚轴到幼叶产率依次升高,CTAB法中产率从128.5~498.5ng/mg,SDS法中产率从225.O~542.6ng/mg;两种方法中,相同部位之间只有叶片在纯度上差异显著,产率上相同部位之间的差异极其显著。用CTAB法从叶片中提取DNA,采用RAPD方法,对19个花生品种的基因组进行扩增,结果显示所提DNA满足分子分析的要求。RAPD可用于亲本和品种的鉴定。 相似文献
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不同方法从大豆不同组织中提取基因组DNA效果的比较 总被引:11,自引:0,他引:11
从大豆组织中获得高质量和足够产量的基因组DNA,是进行大豆分子生物学研究的基础.为进行大豆基因组的PCR,RAPD,SSR等分子生物学研究,分别以大豆种子和其叶片为实验材料,采用改良的SDS法和CTAB法对大豆基因组DNA进行了提取.对DNA的提取效果,采用紫外分光光度检测、琼脂糖凝胶电泳分析及DNA的限制性内切酶图谱分析进行了综合比较.结果表明,在以叶片为材料时,SDS法和CTAB法的大豆基因组DNA的提取效果差别不大,SDS法稍好于CTAB法.在以大豆种子为材料时,SDS法的提取效果明显优于CTAB法,SDS法可从大豆种子中提取到能够充分满足各种分子操作的高质量和数量的大豆基因组DNA. 相似文献
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剑麻核酸的高效提取及应用 总被引:1,自引:0,他引:1
针对剑麻组织中多糖、多酚和次生物质含量高的特点,对其总RNA和基因组DNA提取进行研究。比较了改良SDS法、改良CTAB法提取总RNA和SDS法、CTAB法提取基因组DNA的效果,结果表明:改良CTAB法提取总RNA效果较佳,所得RNA OD260/OD280高于1.8,OD260/OD230大于2.0,而CTAB法提取基因组DNA纯度和完整性较好。基于RNA和DNA水平,分别对剑麻的苯丙氨酸解氨酶基因(PAL)RT—PCR和RAPD反应体系进行优化,均得到理想条带。此方法提取剑麻的核酸可运用于后续分子生物学研究,为其它材料核酸的分离提供参考依据。 相似文献
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蓖麻DNA的提取及SRAP反应体系的建立 总被引:6,自引:2,他引:4
为建立蓖麻快速有效的DNA提取方法和SRAP标记的技术体系,本研究采用SDS法和CTAB法对蓖麻不同叶片(新鲜嫩叶、老叶和陈旧的嫩叶、老叶)的基因组DNA进行提取,并以DNA模板用量、Mg2+浓度、引物浓度和Taq酶用量4个因素的不同水平配制了10个反应体系对蓖麻SRAP反应体系进行优化。结果表明,SDS法和CTAB法均可获得较高质量的DNA,多数样品的A260/A280值介于1.7~1.9之间,但以CTAB法更为省工省时,不同叶片DNA的提取效果,以嫩叶效果最佳;设计的10个反应体系中,以反应体系A(总体积为15µL,40ng DNA模板,1.5mmol/L Mg2+浓度,0.2mmol/L dNTPs,0.3µmol/L引物浓度和1Unit Taq酶)最为经济适用,将该体系用于蓖麻的SRAP扩增能获得稳定、清晰的多态性条带。本实验为蓖麻的遗传多样性研究及目标性状的分析定位提供了技术支撑。 相似文献
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椰子树组织中富含多糖和酚类化合物,为了获取高质量的RNA,笔者以椰子树叶片和根部为材料,比较分析CTAB法和SDS法提取RNA的效果。结果表明:CTAB法提取椰子树组织的总RNA效果较好,能有效克服酚类物质和多糖对RNA提取的影响。经OD值检测和电泳检测,总RNA的28 S和18 S条带清晰可见,纯度较高,完整性好,无明显降解,以此RNA为模板进行RT-PCR反应,能获得特异条带,表明该RNA完全可以用于后续的分子生物学操作。 相似文献
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大豆叶片DNA提取方法的比较研究 总被引:4,自引:1,他引:3
以大豆叶片为材料,对大豆基因组DNA提取方法中若干影响因子如提取液、提取液的浓度、蛋白质去除次数、提取步骤等进行比较研究,试图寻找大豆叶片DNA提取的最佳方法.结果表明,碱裂解法提取速度快,但提取的DNA量少,在SSR分析中,银染效果较CTAB、SDS提取液差,CTAB、SDS提取液均能得到较高质量的DNA;在1%~4%CTAB、SDS提取液浓度下,4%CTAB易使DNA产生降解,但不同浓度提取液提取DNA均可用于SSR分析;提取叶片重量在一定范围内时,随抽提次数减少,DNA浓度增加,纯度下降,但即使用氯仿/异戊醇抽提一次,也能够满足SSR分析的需要;不同提取步骤下,使用氯仿/异戊醇抽提2次后使DNA沉出后再溶解抽提2次和直接抽体4次相比,A260/A280值偏大,但A260/A230值较好. 相似文献
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为了优化小麦高通量TILLING突变体扫描所需基因组DNA提取的方法,对利用SDS法、改良SDS法、CTAB法、改良CTAB法、AxyPrep DNA提取试剂盒、Qiagen DNeasy Plant Mini Kit试剂盒以及再生Qiagen硅胶柱方法提取的小麦基因组DNA进行了系统比较。结果表明,尽管7种方法所提取DNA的纯度及琼脂糖凝胶电泳检测结果均良好,但再生Qiagen硅胶柱方法、CTAB法和改良SDS法的DNA浓度显著高于其他方法。根据小麦细胞分裂素氧化酶基因1(TaCKX1)的DNA序列设计引物,以新鲜DNA样品用于PCR扩增大于1 000bp的片段时,后4种方法扩增效果优于前3种方法;DNA在-20℃下保存100d后重新进行PCR扩增时,则只有Qiagen试剂盒和再生Qiagen硅胶柱2种方法提取的DNA能扩增出大于1 000bp的片段。采用本实验室与新西兰坎特伯雷大学合作建立的再生硅胶柱与自配提取液提取小麦基因组DNA,既保证了DNA的高质量,又降低了使用试剂盒的成本,为小麦TILLING库的构建及其他相关试验提供了一种经济有效的DNA提取方法。 相似文献
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比较了橡胶林土壤微生物CTAB-SDS提取法和SDS提取法的效果。结果表明,2种提取方法均获得约
23.1kb的DNA片段,2种提取方法在颜色、提取量和纯度上存在较大差异。CTAB-SDS提取法提取DNA的纯度较好,不需要纯化可以直接用于PCR扩增、酶切等后续操作;SDS提取法提取的纯度低,不能直接用于PCR扩增。2种方法都适合橡胶林土壤DNA的提取,如果要求获得纯度高的DNA,CTAB-SDS提取法是最佳选择。橡胶林土壤微生物DNA的提取,推荐使用CTAB-SDS提取法。 相似文献