广西农村养蚕生产应用的10种消毒剂对家蚕主要病原的消毒效果

针对目前广西农村养蚕生产使用的消毒剂产品质量参差不齐问题,选择农村养蚕生产应用的10种消毒剂:戊二醛、福尔马林、聚维酮碘、癸甲丙二醇氯铵复合碘、苯扎溴铵、癸甲溴铵、月苄三甲氯铵、二氧化氯、优氯净和漂白粉精,按消毒剂的生产实用浓度开展对家蚕病原体的杀灭效果试验,并调查其酸碱度和腐蚀性。结果显示:10种消毒剂对家蚕病原体的杀灭效果有很大差异,其中含醛类的戊二醛、含碘类的聚维酮碘和癸甲丙二醇氯铵复合碘对家蚕病原体基本没有杀灭效果;季铵盐类的苯扎溴铵、癸甲溴铵、月苄三甲氯铵对家蚕灵菌和白僵菌有杀灭效果,但对家蚕核型多角体病毒(BmNPV)和家蚕微孢子虫(Nb)没有杀灭效果;含氯类的优氯净和其他类的二氧化氯对家蚕灵菌、白僵菌和Nb病原体有较好的杀灭效果,但对BmNPV的杀灭效果差;对家蚕病原体的杀灭效果是含氯类的漂白粉精最佳,含醛类的福尔马林次之。消毒剂酸碱度对其杀灭家蚕病原体具有重要影响,戊二醛、福尔马林、聚维酮碘、癸甲丙二醇氯铵复合碘、苯扎溴铵、癸甲溴铵、月苄三甲氯铵、二氧化氯、优氯净等9种消毒剂呈酸性或弱碱性,杀灭BmNPV的能力差。醛制剂、碘制剂和季铵盐类消毒剂属于轻度腐蚀,对养蚕用具腐蚀性低;氯制剂类型消毒剂属于中度、重度腐蚀,腐蚀性强。为达到有效控制蚕病的发生,及满足农村养蚕既能消毒防病又能降低成本的需求,仍需要进一步研发广谱、高效、低毒、低刺激、低腐蚀的新型蚕用消毒剂。     

不同消毒剂对PRV、PPV和TGEV的灭活效果试验

为了确定癸甲溴铵-碘溶液消毒剂和癸甲溴铵消毒剂对猪主要疫病病原如猪细小病毒(PPV)、伪狂犬病病毒(PRV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的灭活效果,通过细胞观察法,用不同浓度的癸甲溴铵-碘溶液消毒剂和癸甲溴铵消毒剂对PRV、PPV和TGEV进行灭活来观察其灭活效果。结果表明,癸甲溴铵-碘溶液和癸甲溴铵溶液对细胞的最大无毒剂量分别为1∶80和1∶10。1∶320的癸甲溴铵-碘溶液消毒剂,1∶80的癸甲溴铵消毒剂与相应浓度的中和剂的反应产物已无毒副作用。癸甲溴铵-碘溶液消毒剂1∶800稀释时可使PRV TCID₅₀降低5个滴度,TGEV TCID₅₀降低4个滴度;癸甲溴铵消毒剂稀释到1∶400时,可使PRV和TGEV的TCID₅₀均降低约3个滴度。两种消毒剂对PPV的灭活效果均不理想。     

几种消毒剂消毒效果观察

本文针对鸡场常见的4种主要致病茵（大肠杆菌、沙门氏菌、巴氏杆菌、葡萄球菌）和1种病毒（NDV病毒）,选取13种消毒剂,进行细菌和病毒杀灭比较实验。结果表明：三氯异氰尿酸粉,碘＋磷酸溶液（2）,癸甲溴铵溶液（2）,过氧化氢＋过氧乙酸在低浓度下作用10min即可杀死新城疫病毒和4种主要致病细菌,为综合效果最好的消毒药;癸甲溴铵溶液（1）,碘＋磷酸溶液（1）,戊二醛甲溴铵溶液．复合酚消毒剂（1）,复合酚消毒剂（2）,复合酚消毒剂（3）应适当提高浓度或延长时间才能有效消毒;月苄三甲氯铵溶液,癸甲溴铵溶液（3）,癸甲溴铵＋碘溶液在任一推荐浓度下30min内均存在杀细菌或杀病毒无效的情况。     

猪瘟病毒野毒株和兔化弱毒疫苗株复合实时荧光定量RT-PCR鉴别方法的建立

根据GenBank中的猪瘟病毒强毒和弱毒株基因组序列设计了1对针对猪瘟病毒的通用引物和2条分别针对猪瘟病毒强毒和猪瘟兔化弱毒疫苗株的特异性TaqMan水解探针，建立了一种能区分猪瘟病毒强毒和兔化弱毒疫苗株的复合实时荧光定量RT—PCR检测方法。结果显示，该方法能将我国大陆流行的不同基因亚群的猪瘟病毒强毒株与猪瘟兔化弱毒疫苗株完全区分开来，而不与其他猪源病毒发生非特异反应，分别可检测到初始模板中41．8和81．5个拷贝的病毒RNA，与已建立的复合RT-套式PCR的敏感性相近，两种方法对152份样品检测的符合率达96．9％～100％。通过对8份猪瘟兔化细胞疫苗效价的检测，证实本方法与兔体反应热测定法有一定的相关性，可用于猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗的定量和鉴别检测。     

复方季铵盐泡沫消毒剂成泡性能的优化及对病毒的杀灭效果评价

【目的】研究复方季铵盐泡沫消毒剂的成泡性能,并评估该消毒剂对新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）和猪瘟病毒（Classical swine fever virus,CSFV）的杀灭效果,以及不同作用浓度和时间对消毒效果的影响。【方法】通过响应面法对复方季铵盐泡沫消毒剂中苯扎溴铵、癸甲溴铵和癸基葡萄糖苷3种成分的含量进行优化;采用悬浮杀灭试验,以细胞感染方法,测定该消毒剂稀释度为1：100、1：200、1：400、1：500、1：600、1：800和1：1 000时分别作用5、10和15 min对NDV LaSota株的灭活率;采用悬液定量法,测定该消毒剂稀释度为1：200、1：300、1：400、1：500、1：600时分别作用3、5、7、10和15 min对CSFV Thiveral株的灭活率。【结果】复方季铵盐泡沫消毒剂中主要成分苯扎溴铵、癸甲溴铵和癸基葡萄糖苷含量配比分别为1.4%、3.8%和0.75%时,成泡时间达到83 min。该消毒剂在稀释度最高为1：400（以总含量计约为137.5 mg/L）时,最短作用时间5 min,对NDV LaSota株灭活率为100%;最短作用时间为3 min时,对CSFV Thiveral株灭活率达到100%;作用时间延长至15 min时,对2种病毒的灭活率均稳定保持在100%。复方季铵盐泡沫消毒剂的稀释度低于1：400时,对NDV LaSota株杀灭效果不佳;稀释度为1：500（以总含量计约为110 mg/L）、1：600（以总含量计约为91.67 mg/L）时,作用时间10 min,对CSFV Thiveral株灭活率达到100%,作用时间延长至15 min时,灭活率稳定保持在100%。【结论】复方季铵盐泡沫消毒剂中苯扎溴铵、癸甲溴铵和癸基葡萄糖苷含量为1.4%、3.8%和0.75%时成泡效果最优,该消毒剂对NDV和CSFV杀灭效果较好,为其在养殖场的规范使用提供参考与理论依据,也为畜禽养殖业场地环境消毒效果评价提供更多的可能性。     

猪瘟活疫苗的特点及使用

1猪瘟活疫苗（Ⅰ） 1.1名称：通用名,猪瘟活疫苗（Ⅰ） 1.2简介：本品系用猪瘟兔化弱毒C株接种乳兔,收获感染乳兔实质脏器制成乳剂,加适宜稳定剂,经冷冻真空干燥制成,因此又称猪瘟兔化弱毒乳兔组织疫苗。每头份疫苗所含病毒稀释150倍后能引起兔体的热反应。     

凹凸棒复合氯消毒剂消毒效果研究与安全性评价

目的：观察凹凸棒复合氯消毒剂的消毒效果和安全性。方法：将凹凸棒复合氯消毒剂和强力消毒灵按照不同的稀释度稀释后,与金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、蜡样芽孢杆菌、禽巴氏杆菌、丝状霉形体山羊亚种、鸡新城疫病毒、猪瘟病毒兔化弱毒分别作用不同时间,检测其抑菌、杀毒效果。通过急性毒性试验、皮肤刺激性试验和急性眼刺激试验评价该消毒剂的安全性。结果：凹凸棒复合氯消毒剂在不同稀释倍数下对细菌和病毒有一定的抑制和杀灭作用,且无明显毒性。结论：凹凸棒复合氯消毒剂对细菌和病毒有抑制和杀灭作用,且安全、有效。     

中国株猪瘟兔化弱毒克隆毒的研究

采用终点稀释单细胞微量培养法对中国株猪瘟哆化弱毒（Ｃ株）进行克隆，获１０个克隆株；保持原Ｃ株的免疫原性和其他优良特性；在某些方面并有所提高。随机取６号克隆毒（Ｃ６）进行系列试验，结果表明：（１）对牛睾丸细胞敏感，共收毒批次和合格批次为１５／１９（７９．９％）（２）用兔增殖毒共归兔６４只，发率为９０．６％，用睾丸细胞增殖毒对３８只兔热反应率为８９．４７％，（３）按“规程”安检和增大一倍量对猪均无不良     

猪瘟疫苗不同剂量对猪免疫攻毒效果试验报告

本试验根据近年来湖南农村猪瘟疫苗使用头剂量的变化，在室内、室外分别对猪接种不同剂量猪瘟弱毒乳兔苗和牛睾细胞苗，免疫期１０６￣１３０天攻击石门系猪瘟强毒，其室内接种组攻毒结果：猪瘟乳兔苗头剂量０．５ｍｌ１５０个免疫量，保护率１００％（５／５）；头剂量１．０ｍｌ１５０个免疫量保护率１００％（５／５）；头剂量１．０ｍｌ３００个免疫量保护率１００％（４／４）。牛睾国胞苗头剂量０．５ｍｌ３００个免疫量保护率     

陶氏格利特GLUTEX GS2 消毒剂对猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）和猪瘟（HC）病毒的杀灭效果研究

使用陶氏格利特GLUTEX GS2（含20％戊二醛）测评抗猪繁殖与呼吸障碍综合症（Porcine Reproductive Respiratory Syndrome，PRRS）和猪瘟（Hog Cholera，HC）病毒的效力。陶氏格利特GLUTEXGS2消毒剂在稀释至含1000mg／kg戊二醛并与PRRS病毒接触1min或5min和稀释至含500mg／kg戊二醛并与HC病毒接触5min或10min后，均可完全杀死这两种病毒。     

沙冬青总生物碱体外抗牛病毒性腹泻病毒

为了探讨沙冬青总生物碱抗牛病毒性腹泻病毒的作用,采用药毒同加、先药后毒、先毒后药3种不同途径进行体外抗病毒试验,观察病毒致牛肾原代细胞病变,并采用MTT比色法测定D492值,计算病毒抑制率。结果表明,病毒的TCID50为10^-5.29／0．1mL;沙冬青种子总生物碱的药物安全质量浓度为0．39g／L;与病毒对照组相比,当质量浓度为0．16g／L和0．32g／L时,沙冬青种子总生物碱对牛病毒性腹泻病毒有较强的直接杀伤作用,可抑制病毒的复制,能有效保护经病毒感染的牛肾原代细胞,使细胞活性增强,并减弱病毒导致的细胞病变效应,但对病毒没有明显的阻断作用。综上所述,沙冬青种子总生物碱具有较强的抗牛病毒性腹泻病毒的作用。     

免疫增强剂对猪瘟疫苗免疫效果的影响

为查明免疫增强剂是否能够提高猪瘟疫苗免疫抗体水平,选用猪用转移因子与黄芪多糖注射液直接稀释猪瘟兔化高效细胞弱毒苗的方法进行猪瘟疫苗免疫试验。与对照组相比,猪用转移因子直接稀释猪瘟兔化高效细胞弱毒苗组S/P平均值首免后10 d提高127.27%,差异显著（P＜0.05）;首免后20 d提高156.60%,差异极显著（P＜0.01）;整个试验期提高57.05%。与黄芪多糖注射液直接稀释猪瘟兔化高效细胞弱毒苗组相比,S/P平均值首免后10 d提高131.48%,差异显著（P＜0.05）;首免后20 d提高91.55%,差异显著（P＜0.05）;整个试验期提高31.84%。证明猪用转移因子直接稀释猪瘟疫苗可提高猪瘟疫苗的免疫抗体水平;同时也揭示采用断奶前后首免、60日龄左右二免的猪瘟疫苗免疫程序,仔猪在首免后10～30 d免疫抗体S/P值低,阳性率在60%以下,易感染猪瘟野毒。     

新型杀虫剂虫螨腈对家蚕毒性实验

虫螨腈是一种新型吡咯类杀虫剂,杀螨剂。配制虫螨腈7个浓度梯度500×(200mg/L)、800×(125mg/L)、1000×(100mg/L)、1300×(77mg/L)、1500×(70mg/L)、1800×(56mg/L)、2000×(50mg/L)和CK(清水对照),采用添食毒叶的方法进行急性毒性试验。配制虫螨腈4个浓度梯度1000×(100mg/L)、1500×(70mg/L)、2000×(50mg/L)、2500×(40mg/L)和CK(清水对照)对4、5龄蚕多次添食毒叶,进行毒性累积试验。结果表明,虫螨腈对家蚕无急毒作用,连续多次喂食毒叶出现慢性毒性累积,可导致蚕体上蔟结茧死笼率升高、出蛾率降低,并与虫螨腈浓度呈相关性。     

鸡新城疫病毒与传染性支气管炎病毒同胚培养的试验研究

将鸡新城疫病毒（NDV）和鸡传染性支气管炎病毒（IBV）按一定的稀释比例等量混合接种9~10日龄SPF鸡胚,让其在同一鸡胚中增殖（简称同胚培养）。试验结果表明,用5倍稀释的ND-Lasota病毒液与 5000倍稀释的IBH₁₂₀病毒液等体积混合后尿囊腔接种鸡胚,能在同一鸡胚中正常增殖,接种后96 h收毒,用红细胞凝集试验（HA）测得NDV、IBV两种病毒的血凝价分别为11 log2和12 log2,不低于各自病毒单独增殖的HA滴度,病毒的增殖基本趋于平衡。同时也证实了在合适的培养条件下,IBV对NDV的复制不会产生干扰。     

牛病毒性腹泻病毒感染对猪瘟免疫的影响

猪瘟病毒（CSFV）与同属的牛病毒性腹泻病病毒（BVDV）同源性较高,抗原性上有交叉。本次调查对368份猪瘟免疫猪血清样本进行BVDV抗原检测,其中7份呈阳性,阳性率1.90%。对7份BVDV阳性血清采用ELISA和IHA两种方法检测猪瘟（CSFV）抗体水平,抗体合格率偏低,两者的结果符合率为71%。研究表明：BVDV在一定程度上干扰了猪瘟疫苗的免疫效果,影响抗体水平。     

牛γ-干扰素ELISA检测方法的建立与初步应用

以纯化的rHis-BoIFN-γ制备兔多抗血清,辛酸—硫酸铵两步法对体内诱生的抗rBoIFN-γ单抗腹水进行纯化,用美洲商陆素（Pokeweed mitogen,PWM）刺激奶牛全血产生的分泌性天然BoIFN-γ筛选出与之反应最佳的单抗5E11。将单抗5E11以40μg/mL浓度包被,与1∶3 000倍稀释的兔抗rHis-BoIFN-γ多抗血清（13.8μg/mL）配对,以1∶6 000稀释的商品化酶标羊抗兔IgG为指示抗体,建立了BoIFN-γ抗原捕获ELISA检测方法,该方法可以检出2.56 U/100μL（30.5 pg/100μL）的rHis-BoIFN-γ、8U/100μL的rBac-BoIFN-γ和1U/100μL的分泌性天然BoIFN-γ。以商品化试剂盒作为平行对照,将获得的奶牛临床检测血浆样品使用BoIFN-γ抗原捕获ELISA法进行检测,结果显示两种方法检测符合率达到83.9%。本研究建立的BoIFN-γ抗原捕获ELISA检测方法可有效检测分泌性IFN-γ,为进一步开发BoIFN-γELISA检测试剂盒奠定了基础。     

利用H9亚型的HA1蛋白建立ELISA抗体检测方法

该试验对ELISA反应条件进行摸索,并确定了最适工作条件。结果表明,重组蛋白最适包被浓度为200倍稀释,最适包被条件为4℃过夜,血清稀释度为1∶50,HRP-兔抗鸡IgG的最适工作浓度为1：1000,待检血清和酶标二抗的反应时间均37℃30min,底物在室温显色10min。根据已经建立的ELISA方法及反应条件,确定阴阳性临界值为0.109。     

北京地区规模化奶牛场牛病毒性腹泻病血清学调查

对北京郊区6个未进行牛病毒性腹泻病（BVD）免疫牛场的546份奶牛血清样品,使用牛病毒性腹泻抗体ELISA试剂盒进行检测,并对其中3个牛群进行牛病毒性腹泻病毒（BVDV）血清抗原筛查。共检出阳性血清514份,总阳性率94.1%,其中5个牛场的场内血清抗体阳性率在95%以上。牛病毒性腹泻持续性感染牛（PI牛）筛查的3个牛群均有阳性牛检出。结果表明,北京地区规模化奶牛场存在牛病毒性腹泻感染和接触史,应采取净化措施进行控制。     

HPLC测定大鼠肝微粒体温孵体系中二氢血根碱的含量

建立了测定大鼠肝微粒体温孵体系中血根碱代谢产物二氢血根碱含量的高效液相色谱法。色谱柱为Shimadzu VP-ODSShim-pack（150mm×4．6mm,5μm）;流动相为水：乙腈（37：63,V/V）;流速1mL／min;柱温35℃;检测波长285nm;进样量10μL。结果显示50nmol／L和1000nmol／L二氢血根碱标准溶液的方法回收率分别为101．72％和98．82％;50、100、500nmol／,L标准溶液的日内RSD分别为2．26％、2．57％和3．02％,日间RSD分别为6．21％、4．33％和3．95％：二氢血根碱在25-1000nmol／L内与峰面积呈良好的线性关系（r=0．9996）。本分析方法快速简便,灵敏度高,重现性好,符合方法学验证的要求,可满足二氢血根碱在体外代谢中的定量研究。     

RP—HPLC法同时测定白头翁汤中盐酸小檗碱、盐酸药根碱、盐酸巴马汀的含量

目的：建立反向高效液相色谱方法同时测定白头翁汤中盐酸小檗碱、盐酸药根碱、盐酸巴马汀的含量。方法：色谱柱为XPODS—AC。。（250minx4．6mm,5I．Lm）;采用线性梯度洗脱方法,流动相：溶液A为乙腈,溶液B为O．05mol／L磷酸二氢钾（磷酸调pH值至3．0）。0—40min溶液A：溶液B为5：95—45：55;流速：1．0mL／min;柱温：室温;检测器：DAD检测器;检测波长：340nm;进样量：10μL。结果：盐酸小檗碱、盐酸药根碱和盐酸巴马汀分别在62．5-l000μg／mL、46．875—750μg／mL和37．5—600μg／mL范围内线性良好;平均加样回收率分别为99．22％（RSD为3．25％）、98．46％（RSD为1．99％）和99．20％（RSD为1．69％）。结论：本方法简便、灵敏、准确,适用于白头翁汤的质量控制。