应用MTT比色法评价不同牛血清促细胞生长作用

细胞培养过程中血清的选择对细胞的促生长增殖具有重要作用。本试验分别以商品新生牛血清、自制新生牛血清、自制成年牛血清培养成纤维细胞、骨髓瘤细胞、杂交瘤细胞，通过MTT比色法来判断细胞的增殖能力，进而对血清质量作出评价。结果表明，自制新生牛血清具有良好的促细胞生长作用(相对生长率＞0.96)，并且3次试验结果比较差异不显著(P＞0.05)，具有较好的重复性；而成年牛血清和无血清空白对照组促细胞作用不明显。因此应用MTT比色法能够评价血清质量。     

应用MTT比色法评价不同牛血清促细胞生长作用

细胞培养过程中血清的选择对细胞的促生长增殖具有重要作用。本试验分别以商品新生牛血清、自制新生牛血清、自制成年牛血清培养成纤维细胞、骨髓瘤细胞、杂交瘤细胞,通过MTT比色法来判断细胞的增殖能力,进而对血清质量作出评价。结果表明,自制新生牛血清具有良好的促细胞生长作用(相对生长率＞0.96),并且3次试验结果比较差异不显著(P＞0.05),具有较好的重复性;而成年牛血清和无血清空白对照组促细胞作用不明显。因此应用MTT比色法能够评价血清质量。     

新生牛血清中大肠杆菌噬菌体检测方法的建立

本研究用大肠杆菌标准噬菌体株选择确定的大肠杆菌C-3000作为宿主菌,采用增殖法和噬斑法与双层琼脂平板法,对多个厂家的新生牛血清进行了大肠杆菌噬菌体检测,建立了兽用生物制品细胞培养用新生牛血清中大肠杆菌噬菌体的检测方法。     

反复冻融新生牛血清对促细胞生长效应的影响

选择促细胞生长性能良好的三批新生牛血清，经不同次数冻融后用其配制MEM培养淹，用于培养SP2／0细胞，从细胞最大增殖量和倍增时间2个指标测定促细胞生长效应。结果，用经不同次数冻融的新生牛血清配制的MEM培养液，对SP2／0细胞的最大增殖量和倍增时间影响不大；但反复冻融20次以上的新生牛血清配制的培养没使细胞的倍增时间延长。由此可见，为了防止细胞倍增时间延长，所用新生牛血清的冻融次数应该控制在20次以内。     

不同批次新生牛血清对MDCK细胞培养效果的研究

为筛选适宜MDCK细胞生长的最佳血清,分析6个批次新生牛血清在两种培养方式即贴壁静置培养条件下MDCK细胞的生长状态、平均集落形成率及微载体悬浮培养条件下MDCK细胞的生长状态、生长速率、生长动力学情况。结果表明6组新生牛血清贴壁静置培养的MDCK细胞,平均集落形成率最大的为第Ⅴ组,最小的为第Ⅰ组,由大到小依次为第Ⅴ、Ⅵ、Ⅲ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅰ组;微载体悬浮培养条件下的MDCK细胞,最大增殖密度从大到小依次为第Ⅳ、Ⅲ、Ⅵ、Ⅴ、Ⅱ、Ⅰ组,平均倍增时间由大到小依次为第Ⅵ、Ⅴ、Ⅲ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅰ组。因此,通过对不同批次血清贴壁静置培养的MDCK细胞生长状态、平均集落形成率及微载体悬浮培养的MDCK细胞生长状态、生长动力学评价,筛选出适宜细胞生长的新生牛血清批次为第Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组,而第Ⅰ组新生牛血清对细胞生长的促进效果不明显,细胞生长状态不佳。     

60Coγ-射线辐照新生牛血清对BHK21培养细胞的影响

目的:研究新生牛血清(newborn calf serum NBCS)γ-射线辐照后对BHK21细胞培养的影响。方法:用20kGyγ-射线辐照NBCS后培养BHK21细胞,通过连续传代培养和低密度生长曲线比较辐照前后的细胞生长效果。结果:NBCS辐照后连续传代培养10代,每代细胞生长良好,48 h内形成致密单层,与辐照前没有明显区别。NBCS辐照前后低密度培养BHK21细胞第5代平均最大增殖密度为51.35×104/ml、51.20×104/ml、倍增时间21.89 h、22.59 h;第10代为52.25×104/ml、52.73×104/ml和21.95 h、21.62 h,生长曲线基本一致。结论:NBCS 20kGyγ-射线辐照后不影响BHK21细胞的培养效果。     

羔羊血清促细胞生长效果的研究

为研究羔羊血清促细胞生长的效果,用羔羊血清以及羔羊与新生牛混合血清来培养VERO、BHK-21细胞,同时培养SP2/0-Ag14细胞并进行计数。结果表明：羔羊血清促细胞生长效应明显低于新生牛血清,但是与牛血清以不同比例混合后,促细胞生长效应有明显的提高,比例在4∶6和5∶5时,促细胞生长能力与牛血清接近。因此,在细胞培养过程中,把羔羊血清和新生牛血清按1∶1混合使用,既可降低成本,又具有良好的促细胞生长效果,使羔羊血清得到了充分利用,并产生一定的经济效益和社会效益。     

牛白细胞黏附缺陷病液相基因芯片检测方法的建立

从福建某奶牛场200头进口荷斯坦牛采血提取牛血液DNA,根据已知牛染色体上CD18编码基因序列383位基由A变为G而引起牛白细胞黏附缺陷症（BLAD）设计特异性野生型和突变型引物,建立液相基因芯片检测方法用于牛白细胞黏附缺陷症（BLAD）的检测,结果检出2头母牛为BLAD携带者,检出率为0．67％,没有发现患病牛。结果证明建立的液相基因芯片检测方法是一种敏感性和特异性很高的筛选奶牛BLAD有害基因的新方法     

牛血清中口蹄疫病毒非结构蛋白抗体时间分辨荧光免疫分析检测方法的建立

为研究快速定量检测牛血清中口蹄疫病毒非结构蛋白抗体的方法,试验通过优化抗原表达条件等步骤,在大肠杆菌原核表达系统中表达可溶性的3A-3B融合蛋白,并基于纯化的可溶性融合蛋白建立口蹄疫病毒非结构蛋白抗体时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒。结果表明:建立的方法能够检测牛血清中的口蹄疫病毒非结构蛋白抗体,敏感性高,特异性强,对其他相关的牛类病原无交叉反应,其组内与组间变异系数分别低于10%和15%,具有良好的重复性。对300份临床牛血清样品进行检测,同Procheck公司的口蹄疫非结构蛋白抗体试剂盒进行比较,阳性样品符合率96%,阴性样品符合率93.3%,总的符合率95.7%。重复性试验组内与组间变异系数均小于10%。文章首次建立了口蹄疫病毒非结构蛋白抗体时间分辨荧光免疫分析检测方法,同传统的ELISA方法相比,该检测方法特异性相当、敏感性更高,操作更简单、快速,具有较高的应用推广价值。     

牛呼吸道合胞体病的检测方法与疫苗研究

牛呼吸道合胞体病是由牛呼吸道合胞体病毒（BRSV）引起的传染病,临床以呼吸道症状为主（咳嗽、流涕、呼吸急促等）,严重引起泌乳停止、怀孕母牛流产等,不利于养牛业健康发展。BRSV常见的传播方式是直接接触,高滴度的母源抗体可以减轻呼吸道症状。BRSV的诊断方法包括血清学和病原学检测,国内学者对该病研究出单重甚至多重ELISA、PCR法用于诊断,试验证明,它们都具有较好的特异性、敏感性和符合率。BRSV疫苗目前疫苗主要有灭活苗（220/69株）、减毒活疫苗（RB-94致弱株）,现在亚单位疫苗成为研究热点,我国学者将牛疱疹病毒作载体表达BRSV的G蛋白重组疫苗,诱导黏膜免疫,从而保护牛。本病及时发现并早日诊断治疗,可有效控制。此外,应加强饲养管理、环境卫生的改善、提高牛只自身抵抗力等。     

犊牛开食料研究报告

设计了一种犊牛开食料配方,干物质营养成分为:代谢能13.0MJ/kg、粗蛋白21％、钙1.1％、磷0.56％,铁110mg/kg、锰133mg/kg、铜33mg/kg、锌167mg/kg、碘1.4mg/kg、硒0.88mg/kg、钴1.1mg/kg、维生素A 11000 IU/kg、维生素D_32780 IU/kg、维生素E 133 IU/kg。20头新生犊牛经配对试验采食按该配方生产的饲料。结果发现,试验组犊牛的平均日耗料量极显著增加40g(P<0.01),另外腹泻发生率显著降低(P<0.05)。而犊牛血清钙、磷、铁、葡萄糖和总蛋白的浓度都在正常范围之内。试验表明,该颗粒料适口性良好,可以促进犊牛的采食和断奶,并可减少腹泻的发生。     

布拉氏酵母对哺乳期犊牛生长性能、营养物质消化率和血清生化指标的影响

试验旨在研究布拉氏酵母菌对哺乳犊牛的生长性能、营养物质表观消化率和血清生化指标的影响.选择48头初生体重(38.16 ±3.73)kg且健康状况良好的中国荷斯坦犊牛,随机分为4组,每组12头,公母对半.各处理组饲粮中分别添加0(对照)、1(I组)、3(Ⅱ组)、5(Ⅲ组)g/(天?头)的布拉氏酵母,整个试验共42 d.结...     

不同蛋白能量比日粮对荷斯坦奶公犊育肥效果及血液生化指标的影响研究

利用3种不同蛋白能量比配合日粮对荷斯坦奶公犊进行育肥，结果表明：高蛋白能量比日粮组在整个育肥期平均总增重和平均日增重与低蛋白能量比日粮组差异显著（P<0.05），而中蛋白能量比日粮组同高、低2个蛋白能量比日粮组差异均不显著（P>0.05）。在3个试验组中，高蛋白能量比日粮组的饲料报酬和经济效益最高，中蛋白能量比日粮组次之，低蛋白能量比日粮组最低。不同日粮对血液生化指标产生一定的影响，但试验测定值均在正常的生理范围内。在采食试验日粮后，除低蛋白能量比日粮组的血清总脂比采食前有所降低外，各试验组的其它指标，如血清总蛋白、葡萄糖以及血清尿素氮的浓度都升高了。     

不同能量水平日粮中添加复合酶制剂对荷斯坦公牛生长发育及血液生化指标的影响

试验旨在研究不同能量水平日粮中添加复合酶制剂对荷斯坦公牛生长发育及血液生化指标的影响。选择20头6月龄健康的荷斯坦奶公牛,随机分组为5组,分别为高能量日粮加酶组、高能量日粮组、低能量日粮加酶组、低能量日粮组和对照组,每组4头,日粮综合净能摄入量分别为35.26、35.26、30.63、30.63、32.83 MJ,各组日粮粗蛋白质含量基本相同。试验结果表明,①在高能量水平条件下,添加复合酶制剂的试验组组间日增重差异不显著,而在低能量水平条件下,添加复合酶制剂的试验组组间日增重相差达0.14 kg,差异显著(P<0.05);②能量水平相同的条件下,添加复合酶制剂的试验组在胴体重、肌肉重、净肉率及屠宰率等指标上均高于未添加复合酶制剂的试验组;③本试验5种日粮对荷斯坦奶公牛血液生化指标产生了一定影响,能量水平及复合酶制剂均有提高血液中碱性磷酸酶、乳酸脱氢酶和总胆固醇的趋势。因此,复合酶制剂在低能量水平下饲喂效果较为明显,通过血液生化指标与屠宰指标的相关性分析得出,碱性磷酸酶和乳酸脱氢酶可能是反映并监控荷斯坦奶公牛生长发育和消化代谢的重要指标。     

中药“犊泻康”对犊牛免疫功能的影响及犊牛腹泻防治效果的研究

为探讨中药复方制剂犊泻康是否对新生犊牛的免疫水平产生影响,本试验从大庆市庆新牧业有限公司选择15头新生健康犊牛,随机分为试验组和对照组,试验I组每日一次灌服200mL(约0.2g/mL)中药制剂犊泻康,试验Ⅱ组每日灌服200mL(约0.4g/mL)中药制剂犊泻康,对照组每日灌服200mL生理盐水,连续给药7d。各组犊牛饲养管理和基础日粮均相同,分别在第10天、第20天、第30天颈静脉采血并进行红细胞C3b受体花环形成试验、T淋巴细胞E～玫瑰花环试验和淋巴细胞转化率的测定。试验结果显示,两试验组在第10天的红细胞C3b受体花环率与对照组相比,差异显著(P<0.05);两试验组在第10天、第20天的E～玫瑰花环形成率分别与对照组相比,差异极显著(P<0.01),在第30天的E～玫瑰花环形成率分别与对照组相比,差异显著(P<0.05);两试验组在第10天、第20天的淋巴细胞转化率与对照组相比,差异极显著(P<0.01),在第30天的淋巴细胞转化率与对照组相比,差异显著(P<0.05)。试验结果表明,中药制剂犊泻康能明显提高犊牛机体的免疫功能,有效防治犊牛腹泻。     

日粮中添加酵母培养物AYC-X6对犊牛生长发育的影响

[目的]为研究在犊牛日粮中添加酵母培养物对犊牛生长发育的影响。[方法]在宁夏固原现代农业园区肉牛繁育基地随机选取90头2.5月以上犊牛作为试验牛群,采用配对试验设计,试验分为2个处理组。[结果]结果表明,试验组犊牛比对照组犊牛平均干物质采食量提高了14.9%,日增重提高了24.6%,饲料消耗降低了0.08%。体重提高了24.1%,体高、胸围、腹围、体斜长分别提高了5.1%,11.3%,12.8%,24.9%。试验组粪便分离筛第1,2,3层筛上物分别为15%,20%,65%。试验组血清总蛋白(BSA)、球蛋白(BGG)含量均显著高于对照组,谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)含量均显著低于对照组。[结论]在犊牛日粮中添加酵母培养物AYC-X6,能提高饲料消化率,促进犊牛生长发育,提高犊牛平均日增重和生长速度。提高血清总蛋白、球蛋白含量,降低谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶水平,改善犊牛免疫能力。     

羔羊断奶日龄对生长和血清指标的影响

本试验主要研究断奶日龄对羔羊生长性能和血清指标的影响,以确定羔羊早期断奶的最佳时间。16只无角陶塞特(♂)×小尾寒羊(♀)杂交一代羔羊,随机分为4组,对照羔羊随母羊哺乳,A、B、C组羔羊分别在第7、17和27天断奶,饲喂代乳品。试验结果表明:早期断奶组与对照组羔羊的体重、体长、体高和胸围均差异不显著(P>0.05)。试验期间(羔羊7~47日龄),羔羊血清尿素氮(urea nitrogen,UN)含量在4.13~6.81mmol/L之间。血清葡萄糖(glucoses,GLU)含量在4.34~7.30mmol/L之间;总蛋白(total protein,TP)含量为54.60~59.37g/L;白蛋白(albumin,ALB)含量为29.97~35.06g/L;球蛋白(globulin,GLOB)含量为20.23~29.40g/L;白蛋白/球蛋白(A/G)值为1.00~1.70。羔羊47日龄时,不同断奶日龄组与对照组羔羊之间的UN、GLU、TP、ALB和GLOB含量均差异不显著(P>0.05)。试验结论,羔羊早期断奶切实可行,羔羊可在7日龄断奶,17日龄断奶效果更好。