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采用改良CTAB法得到了可用于RAPD分析的羽衣甘蓝基因组DNA,摸索建立了适合羽衣甘蓝基因组的RAPD反应体系,运用优化的反应体系对羽衣甘蓝新品种的亲缘关系进行了聚类分析. 相似文献
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本文对采自全国8个省市的落叶松—杨栅锈茵茵株进行了基因组DNA提取,并以其为模板对影响RAPD扩增1的重要参数进行优化试验,以期建立落叶松—杨栅锈茵RAPD反应的优化体系。结果表明,PCR扩增体系最佳条件是:25μL体积中,2.5mmol/LM^2 ,30ng/μL模板,0.15mmol/LdNTP,1.5μL引物,0.75UTaq聚合酶。 相似文献
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梓树属植物基因组DNA提取及RAPD体系优化 总被引:1,自引:0,他引:1
以楸树幼嫩叶片为材料,进行楸树基因组DNA提取及RAPD扩增条件优化,试验表明,采用改良的2×CTAB法提取的DNA质量较高,适宜于RAPD分析。RAPD反应的优化体系为(25 ul反应体系):17.8 ul ddH2O;0.5 ul dNTP;2.5 ul 10×buffer;1.0 ul随机引物;2.0 ul Mgcl2;1.0 ul模版;0.2 ul Taq酶。 相似文献
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濒危药用植物延龄草RAPD反应体系的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
以濒危药用植物延龄草(Trillium tschonoskiiM.)的叶片为材料,采用改良的CTAB法提取基因组DNA进行RAPD扩增,优化了RAPD扩增反应的程序及模板、引物、dNTP、Taq酶浓度等参数。结果表明:适合延龄草的RAPD扩增程序为:94℃预变性5 min,然后执行40个循环,每个循环中94℃变性1 min,36℃退火1 min,72℃延伸2 min,最后72℃延伸10min;适宜的反应体系为:25μL总体积中含DNA模板50 ng,Mg2+2.5 mM,引物0.6μM,dNTP 0.2 mM,Taq DNA聚合酶3 U。 相似文献
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在提取高质量八角基因组DNA的基础上,通过对其RAPD反应体系的Taq DNA聚合酶、dNTPs浓度、Mg2+浓度、引物浓度等因子的优化,建立了稳定、重复性高的八角RAPD-PCR反应体系.研究结果表明,在25 μL PCR反应体系中,含1.0 UTaq DNA聚合酶,0.15 mmol·L-1 dNTPs,2.0mmol·L-1 Mg2+,2.0 μmol·L-1引物,20~ 80 ng模板.最佳反应程序为,94℃预变性5 min,扩增后94℃变性30 s,31 ~37℃退火30 s,72℃延伸30 s,35个循环;72℃完全延伸7 min,4℃保存.在建立RAPD-PCR反应体系的基础上,从240条RAPD引物中筛选出15条扩增条带清晰、稳定性好的引物,并通过各引物的退火温度梯度实验,确定了各引物的最适退火温度. 相似文献
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板栗PAPD影响因素的研究 总被引:5,自引:3,他引:2
稳定的RAPD反应体系是进行RAPD分析的关键,分别测试了模板DNA、dNTP、Mg^2 、引物、TaqDNA聚合酶浓度和变性时间、退火温度及时间、延伸时间、延伸时间、循伸时间、循环次数等对反应结果的影响。通过实验确定了板栗最佳的RAPD反应条件。在50ul反应体系中含有50ng模板、0.74umol/L随机引物、180umol/LdNTP、3UTaqDNA聚合酶、2.0mmol/LMgCl2。反应扩增程序为:94C预变性5min.40次热循环,每个循环包括:94C变性30sec,36C退火45sec,72C延伸90sec,最后72C终延伸7min。按照优化的RAPD条件进行的重复实验,重现性良好。 相似文献
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以麻竹DNA为模板,对影响麻竹RAPD扩增的重要参数进行了优化试验,以期建立麻竹RAPD反应的最适体系。最终得出的麻竹RAPD反应体系为:20μL反应体系,2μL10倍反应缓冲液,模板含量为50ng,2 5mmol·L-1的Mg2+,1 5U的Taq酶,dNTP为1 75mmol·L-1,引物浓度为0 4μmol·L-1。优化后的RAPD反应程序为:94℃3min→[94℃1min→37 5℃1min→72℃1min20sec]40个循环→72℃8min→4℃保持。 相似文献
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与毛白杨性别相关的RAPD标记 总被引:1,自引:0,他引:1
应用RAPD技术筛选与毛白杨性别相关的分子标记,对毛白杨雌雄株的基因组DNA进行混合分组分析(BSA).结果表明:在88条随机引物中有12条引物能够在雌雄DNA反应池间形成多态性条带,应用这12条引物分别对毛白杨雌雄个体(雌雄个体各选取5个)进行RAPD分析,其中引物S60扩增得到1个约为1800bp的与雄性相关的RAPD标记.该标记的获得进一步表明毛白杨雌雄株间存在基因水平的差异,为毛白杨的性别研究提供了分子依据. 相似文献
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濒危药用植物降香黄檀DNA提取及RAPD反应体系优化 总被引:2,自引:0,他引:2
采用改良CTAB法提取了降香黄檀(Dalbergia odorifera T. Chen)新鲜叶片和硅胶干燥后放置3个月的叶片基因组DNA,并对影响RAPD反应的各因素进行了优化。结果显示新鲜的降香黄檀叶可以得到质量较高的DNA,硅胶保存后部分叶片所提的DNA有降解。优化后反应体系为:25μL反应体系中包括,模板的DNA 20ng,Taq DNA Polymerase 2.5U,Mg2 5mmol.L-1,dNTP 0.3 mmol.L-1,引物(S37)0.4μmol.L-1。反应条件为94℃预变性4min;94℃30s,36℃1min,72℃2min,40个循环;72℃延伸10min。 相似文献
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油茶优良无性系是当前生产上的主要良种.通过采用RAPD分子标记方法,从180多个引物中筛选出22个具有多态性的随机引物进行扩增,得到141个位点,其中有91个是多态位点,以此为基础建立油茶优良无性系的RAPD分子鉴别体系.同时还探索出油茶叶片总DNA的分离技术和建立了RAPD反应体系,为油茶分子技术育种积累了相关的知识并奠定了DNA技术基础. 相似文献
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我省板栗主载品种(无性系)RAPD反应体系的建立 总被引:2,自引:0,他引:2
在RAPD反应中,有许多影响结果的稳定性和准确性。本项研究采用浙江省8个板栗主载品种(无性系,)对RAPD各种反应进行了探索,结果表明,板栗理想的反应体系为:20μl反应体积含有100mmol/L Tris-HCl,500mmol/LKCl,20mmol/LMgCL2,0.01%Gelatin,dATP、dTTP、dGTP的量各为100μmol/L,50-200ng引物,0.75-1.0单位Taq酶,2-10ng模板NDA。反应条件为:94℃预变性2min,再94℃30s、40℃30s、72℃1.5min扩增37个循环;最后在72℃延伸7min。应用上述反应体系进行板栗PAPD反应,扩增产物在1.0%琼脂糖凝胶中电泳,经EB染色后在紫外灯下观察照相,可获得满意的DNA指纹图谱。 相似文献
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以桢楠(Phoebe zhennan)新鲜叶片、硅胶干燥叶片为材料,研究了DNA的提取方法,并对影响RAPD反应的各因素进行了优化。得到了桢楠RAPD的优化反应体系及程序,适合桢楠RAPD反应的体系总体积为25μL,DNA模板2μL,Taq DNA聚合酶用量0.3μL,引物用量1μL,Mg2+用量5μL,dNTPs用量0.5μL,ddH2O16.2μL;适合桢楠RAPD扩增的程序是94℃预变性3 min,94℃变性1min,36℃复性1 min,72℃延伸2 min,42个循环,最后72℃延伸10 min,产物于4℃保存,同时结果表明硅胶保存的样品完全可以与传统的新鲜叶片得到同样的PCR扩增结果,完全可以满足研究需要。 相似文献
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我省板栗主栽品种(无性系)RAPD反应体系的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
在RAPD反应中,有许多影响结果的稳定性和准确性.本项研究采用浙江省8个板栗主栽品种(无性系),对RAPD各种反应条件进行了探索,结果表明,板栗理想的反应体系为20μl反应体积含有100mmol/LTris-Hcl,500mmo1/LKCl,20mmol/LMgCL2,0.01%Gelatin,dATP、dTTP、dCTP、dGTP的量各为100μmol/L,50~200ng引物,0.75~1.0单位Taq酶,2~10ng模板DNA.反应条件为94℃预变性2min,再94℃30s、40℃30s、72℃1.5min扩增38个循环;最后在72℃延伸7min.应用上述反应体系进行板栗RAPD反应,扩增产物在1.0%琼脂糖凝胶中电泳,经EB染色后在紫外灯下观察照相,可获得满意的DNA指纹图谱. 相似文献
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