羽衣甘蓝亲缘关系分析

采用改良CTAB法得到了可用于RAPD分析的羽衣甘蓝基因组DNA,摸索建立了适合羽衣甘蓝基因组的RAPD反应体系,运用优化的反应体系对羽衣甘蓝新品种的亲缘关系进行了聚类分析.     

闽楠基因组DNA提取及RAPD反应条件优化

以闽楠叶片为材料，研究了闽楠基因组DNA提取方法及RAPD反应条件。采用改良的CTAB高盐法提的DNA质量较高，适宜RAPD-PCR分析。在20μL反应体积中，RAPD分析的优化反应体系为：2mmol/L的Mg^2 ，200μmol／L dNTP，1，5ng/μL的模板DNA，1UTap酶，50nmol／L引物。     

落叶松—杨栅锈菌DNA提取及RAPD条件优化

本文对采自全国8个省市的落叶松—杨栅锈茵茵株进行了基因组DNA提取，并以其为模板对影响RAPD扩增1的重要参数进行优化试验，以期建立落叶松—杨栅锈茵RAPD反应的优化体系。结果表明，PCR扩增体系最佳条件是：25μL体积中，2．5mmol／LM^2 ，30ng／μL模板，0．15mmol／LdNTP，1．5μL引物，0．75UTaq聚合酶。     

梓树属植物基因组DNA提取及RAPD体系优化

以楸树幼嫩叶片为材料,进行楸树基因组DNA提取及RAPD扩增条件优化,试验表明,采用改良的2×CTAB法提取的DNA质量较高,适宜于RAPD分析。RAPD反应的优化体系为(25 ul反应体系):17.8 ul ddH2O;0.5 ul dNTP;2.5 ul 10×buffer;1.0 ul随机引物;2.0 ul Mgcl2;1.0 ul模版;0.2 ul Taq酶。     

一种适用于林地土壤微生物RAPD体系的建立

RAPD作为近年来新兴起来的分子标记，以其效率高、样品用量少、灵敏度高和特异性强等优点在土壤微生物基因组分析、多态性研究等方面有着广泛的应用。但是由于本项技术所用的引物较短（通常为10bp），所以对反应条件较为敏感，通过对退火温度、Mg^2＋浓度、Taq酶用量进行优化，建立了较为稳定、重复性较好的适用与土壤微生物RAPD体系。     

橡胶树具有稳定重复性RAPD反应体系的建立

为增强橡胶树RAPD反应的稳定性,通过对影响PCR反应体系的几个主要因子进行组合研究,并分析了增效剂TMAC,BSA对PCR的影响,确定了各成分的最佳工作浓度,建立了稳定的橡胶树RAPD反应体系,为利用RAPD技术对橡胶树种质资源进行研究提供了可靠保证。     

濒危药用植物延龄草RAPD反应体系的建立

以濒危药用植物延龄草(Trillium tschonoskiiM.)的叶片为材料,采用改良的CTAB法提取基因组DNA进行RAPD扩增,优化了RAPD扩增反应的程序及模板、引物、dNTP、Taq酶浓度等参数。结果表明:适合延龄草的RAPD扩增程序为:94℃预变性5 min,然后执行40个循环,每个循环中94℃变性1 min,36℃退火1 min,72℃延伸2 min,最后72℃延伸10min;适宜的反应体系为:25μL总体积中含DNA模板50 ng,Mg2+2.5 mM,引物0.6μM,dNTP 0.2 mM,Taq DNA聚合酶3 U。     

八角RAPD-PCR反应体系的建立及引物筛选研究

在提取高质量八角基因组DNA的基础上,通过对其RAPD反应体系的Taq DNA聚合酶、dNTPs浓度、Ｍg2+浓度、引物浓度等因子的优化,建立了稳定、重复性高的八角RAPD-PCR反应体系.研究结果表明,在25 μL PCR反应体系中,含1.0 UTaq DNA聚合酶,0.15 mmol·L-1 dNTPs,2.0mmol·L-1 Mg2+,2.0 μmol·L-1引物,20～ 80 ng模板.最佳反应程序为,94℃预变性5 min,扩增后94℃变性30 s,31 ～37℃退火30 s,72℃延伸30 s,35个循环;72℃完全延伸7 min,4℃保存.在建立RAPD-PCR反应体系的基础上,从240条RAPD引物中筛选出15条扩增条带清晰、稳定性好的引物,并通过各引物的退火温度梯度实验,确定了各引物的最适退火温度.     

板栗PAPD影响因素的研究

稳定的RAPD反应体系是进行RAPD分析的关键，分别测试了模板DNA、dNTP、Ｍg^2 、引物、ＴaqDNA聚合酶浓度和变性时间、退火温度及时间、延伸时间、延伸时间、循伸时间、循环次数等对反应结果的影响。通过实验确定了板栗最佳的ＲＡＰＤ反应条件。在５０ul反应体系中含有50ng模板、0.74umol/L随机引物、180umol/LdNTP、3UTaqDNA聚合酶、2.0mmol/LMgCl2。反应扩增程序为：94C预变性5min.40次热循环，每个循环包括：94C变性30sec,36C退火45sec,72C延伸90sec，最后72C终延伸7min。按照优化的RAPD条件进行的重复实验，重现性良好。     

麻竹RAPD反应条件的优化

以麻竹DNA为模板,对影响麻竹RAPD扩增的重要参数进行了优化试验,以期建立麻竹RAPD反应的最适体系。最终得出的麻竹RAPD反应体系为:20μL反应体系,2μL10倍反应缓冲液,模板含量为50ng,2 5mmol·L-1的Mg2+,1 5U的Taq酶,dNTP为1 75mmol·L-1,引物浓度为0 4μmol·L-1。优化后的RAPD反应程序为:94℃3min→[94℃1min→37 5℃1min→72℃1min20sec]40个循环→72℃8min→4℃保持。     

油松DNA的提取及RAPD标记技术试验初报

本试验利用RAPD技术,对陕西陇县八渡林场油松种子园14个无性系进行遗传分析.试验确立了提取油松嫩梢DNA方法,提取的DNA可用于RAPD扩增;通过对RAPD反应体系的优化,建立了油松扩增的反应体系和反应程序;用筛选出的8个引物对14个油松无性系进行扩增.共扩增出23个条带,其中具有多态性的条带为14条,占总扩增条带数的60.8%,结果表明:检测到了14个油松无性系具有较丰富的DNA多态性.     

与毛白杨性别相关的RAPD标记

应用RAPD技术筛选与毛白杨性别相关的分子标记,对毛白杨雌雄株的基因组DNA进行混合分组分析（BSA）．结果表明：在88条随机引物中有12条引物能够在雌雄DNA反应池间形成多态性条带,应用这12条引物分别对毛白杨雌雄个体（雌雄个体各选取5个）进行RAPD分析,其中引物S60扩增得到1个约为1800bp的与雄性相关的RAPD标记．该标记的获得进一步表明毛白杨雌雄株间存在基因水平的差异,为毛白杨的性别研究提供了分子依据．     

濒危药用植物降香黄檀DNA提取及RAPD反应体系优化

采用改良CTAB法提取了降香黄檀(Dalbergia odorifera T. Chen)新鲜叶片和硅胶干燥后放置3个月的叶片基因组DNA,并对影响RAPD反应的各因素进行了优化。结果显示新鲜的降香黄檀叶可以得到质量较高的DNA,硅胶保存后部分叶片所提的DNA有降解。优化后反应体系为:25μL反应体系中包括,模板的DNA 20ng,Taq DNA Polymerase 2.5U,Mg2 5mmol.L-1,dNTP 0.3 mmol.L-1,引物(S37)0.4μmol.L-1。反应条件为94℃预变性4min;94℃30s,36℃1min,72℃2min,40个循环;72℃延伸10min。     

油茶优良无性系的RAPD分子鉴别

油茶优良无性系是当前生产上的主要良种.通过采用RAPD分子标记方法,从180多个引物中筛选出22个具有多态性的随机引物进行扩增,得到141个位点,其中有91个是多态位点,以此为基础建立油茶优良无性系的RAPD分子鉴别体系.同时还探索出油茶叶片总DNA的分离技术和建立了RAPD反应体系,为油茶分子技术育种积累了相关的知识并奠定了DNA技术基础.     

桢楠DNA提取和RAPD条件的优化

以桢楠（Phoebe zhennan）新鲜叶片、硅胶干燥叶片为材料,研究了DNA的提取方法,并对影响RAPD反应的各因素进行了优化。得到了桢楠RAPD的优化反应体系及程序,适合桢楠RAPD反应的体系总体积为25μL,DNA模板2μL,Taq DNA聚合酶用量0.3μL,引物用量1μL,Mg2＋用量5μL,dNTPs用量0.5μL,ddH2O16.2μL;适合桢楠RAPD扩增的程序是94℃预变性3 min,94℃变性1min,36℃复性1 min,72℃延伸2 min,42个循环,最后72℃延伸10 min,产物于4℃保存,同时结果表明硅胶保存的样品完全可以与传统的新鲜叶片得到同样的PCR扩增结果,完全可以满足研究需要。     

我省板栗主载品种（无性系）RAPD反应体系的建立

在RAPD反应中，有许多影响结果的稳定性和准确性。本项研究采用浙江省8个板栗主载品种（无性系，）对RAPD各种反应进行了探索，结果表明，板栗理想的反应体系为：20μl反应体积含有100mmol/L Tris-HCl,500mmol/LKCl,20mmol/LMgCL2,0.01%Gelatin,dATP、dTTP、dGTP的量各为100μmol/L，50－200ng引物，0．75－1．0单位Taq酶，2－10ng模板NDA。反应条件为：94℃预变性2min，再94℃30s、40℃30s、72℃1．5min扩增37个循环；最后在72℃延伸7min。应用上述反应体系进行板栗PAPD反应，扩增产物在1．0％琼脂糖凝胶中电泳，经EB染色后在紫外灯下观察照相，可获得满意的DNA指纹图谱。     

长叶榧RAPD反应条件的研究

以长叶榧为材料 ,研究了RAPD的各种影响因素。确定了长叶榧的最佳的RAPD反应体系为 :15 μl反应体系中含5 0mmol·l-1KCl、10mmol·l-1Tris-HCl(pH9.0 )、0 1%Triton - 10 0、2nmol·μl-1MgCl2 、0 6nmol·μl-1dNTPs、0 .75UTaq酶、30ng引物以及 10 0ng左右的长叶榧DNA。     

我省板栗主栽品种(无性系)RAPD反应体系的建立

在RAPD反应中,有许多影响结果的稳定性和准确性.本项研究采用浙江省8个板栗主栽品种(无性系),对RAPD各种反应条件进行了探索,结果表明,板栗理想的反应体系为20μl反应体积含有100mmol/LTris-Hcl,500mmo1/LKCl,20mmol/LMgCL2,0.01%Gelatin,dATP、dTTP、dCTP、dGTP的量各为100μmol/L,50~200ng引物,0.75～1.0单位Taq酶,2～10ng模板DNA.反应条件为94℃预变性2min,再94℃30s、40℃30s、72℃1.5min扩增38个循环;最后在72℃延伸7min.应用上述反应体系进行板栗RAPD反应,扩增产物在1.0%琼脂糖凝胶中电泳,经EB染色后在紫外灯下观察照相,可获得满意的DNA指纹图谱.     

濒危植物巴东木莲RAPD扩增反应体系的建立

以巴东木莲叶片为材料,通过对反应体系中Mg2+、dNTP、Taq酶、模板、引物浓度等影响因素的优化,确定了一套适于巴东木莲RAPD分析的稳定反应体系,即25μl的总反应体系中:模板DNA 100 ng,Mg2+2.1 mM,引物0.7μM,dNTP0.20 mM,TaqDNA聚合酶3 U。     

雀形目38种鸟类线粒体cytb的引物设计及PCR优化

通过设计雀形目鸟类线粒体细胞色素b的通用引物并对其PCR反应体系进行优化，确定了雀形目38种鸟由基因组DNA扩增线粒体细胞色素b基因全序列的最佳反应条件。在10μl最佳反应体系中，dNTP浓度为100pM，引物浓度10μM，退火温度范围为51-55℃，模板量在50～150ng之间，扩增反应效果最好。在上述最佳反应体系和条件下获得的目的条带清晰、明亮，可应用于雀形目鸟类分子系统学研究。